亞甲基水楊酸桿菌肽預混劑對雞的安全性研究

孫晨明，徐亞亞，高清清，袁華根

（1.江蘇農牧科技職業學院，江蘇 泰州 225300；2.揚州大學獸醫學院，江蘇 揚州 225009）

亞甲基水楊酸桿菌肽預混劑為多肽類抗生素中的一種，對革蘭氏陽性菌如金黃色葡萄球菌、魏氏梭菌、鏈球菌、腸球菌有抑制作用，可以促進動物生長，提高飼料利用率，預防和控制由梭菌或其他敏感菌引起的或并發的壞死性腸炎，可與其他藥物聯合使用。美國FDA 批準的亞甲基水楊酸桿菌肽適應癥包括提高增重率和飼料效率、提高蛋雞產蛋量、防治雞壞死性腸炎、治療火雞傳染性腸炎、預防鵪鶉潰瘍性腸炎和預防豬痢疾等[1]。藥效學試驗表明，國產亞甲基水楊酸桿菌肽預混劑按55 mg∕kg·d混飼給藥，連用42 d，能有效治療產氣莢膜梭菌引起的雞壞死性腸炎。本次試驗旨在評價亞甲基水楊酸桿菌肽預混劑對靶動物雞的安全性，以期為其在雞的臨床用藥中提供依據。

1 材料

1.1 供試藥品 亞甲基水楊酸桿菌肽預混劑（規格10%，以桿菌肽計），批號L091001，福建某生化有限公司提供。

1.2 儀器與試劑 主要儀器有血細胞計數板、生物顯微鏡、手撳式計數器、OLYMPUS Au2700 全自動生化分析儀、載玻片、離心管、一次性注射器、離心機等。主要試劑有磷酸鹽緩沖液、冰醋酸、瑞士染液、結晶紫染液、蒸餾水、生理鹽水、中性紅染液，以及用于血液生化測試分析的相關試劑等。

1.3 試驗動物 1 日齡雜交黃羽肉雞100 只，由中國家禽研究所提供。育雛期及試驗期間，采用油汀和白熾燈保溫。

1.4 試驗動物入選和剔除標準

1.4.1 入選標準 用于靶動物安全性試驗的雞在試驗前一天須經獸醫人員檢查，并確認處于良好的健康狀況。

1.4.2 剔除標準 有下列狀況的雞應從試驗中剔除：適應期內瀕死的雞；適應期內生病或受傷的雞。

1.5 試驗設計 正式試驗時從約100只8日齡雛雞中選擇80只健康雛雞，然后按體重進行均衡隨機分組，使每組雞的體重盡可能一致。試驗雞共分為4組，每組20只。采用翅號和籠號進行標記識別。

根據生產廠家擬推薦的臨床給藥劑量，各試驗組分別按最大推薦劑量的倍數——0（空白對照）、1、3、5倍給藥（見表1）。

表1 試驗雞分組與給藥

試驗雞由專人飼養，飼料使用的是中國農業科學院中國家禽研究所飼料廠特制的不含任何抗菌藥物的全價日糧。試驗前將藥物按預先擬定的給藥劑量，采用逐級稀釋法將受試藥物與飼料混勻飼喂。每天定時喂料，雞只自由飲食，定期記錄每組雞的采食量。

2 試驗方法

2.1 臨床觀察 試驗雞每天由飼養人員嚴密監控，觀察和記錄雞對藥物有毒劑量產生的反應情況。記錄的項目如下：與藥物有關的發病率和死亡率，其他可能出現的不良反應；分別于試驗前、試驗中期（0～21 d）和試驗結束（21～42 d）各測定一次試驗雞的體重和各階段的飼料消耗量，據此計算每組雞在各階段的平均增重和飼料利用率等。

2.2 眼觀病理學檢查 對試驗中所有死亡雞進行剖檢。對于與藥物毒性、疾病或其他原因有關的死亡，通過可接受的診斷技術加以確認，并記錄死亡日期。對顯示疑似與藥物有關的眼觀損傷進行組織學病理學檢查。

2.3 臨床病理學檢查 在試驗中期（第21 d）每組隨機選擇10只雞分別采集血樣，進行血常規和血液生化學檢查。試驗結束時（第42 d）對每組剩下的10 只雞也分別采集血樣進行血常規和血液生化學檢查。血常規分析采用人工血細胞分類計數法，血液生化學檢測采用全自動生化分析儀測定[2]。

2.4 組織病理學檢查 試驗中期（第21 d）從10只被采血樣的雞中隨機抽出5 只，逐只剖檢進行眼觀病理學檢查。試驗結束時，撲殺每組存活下來的雞進行組織學檢查，收集下列組織并保存于10%福爾馬林溶液中：心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟、胸腺、腎上腺、法氏囊、胰腺、甲狀腺、氣管、睪丸、卵巢、食管、嗉囔、肌胃、腸（上段、中段和盲腸）。

對下列組織進行常規檢查：肝臟、腎臟、法氏囊、脾臟、胸腺、卵巢和睪丸。根據出現的毒性情況決定是否對其他組織作進一步檢查[3]。

所有剖檢動物的臟器組織均被固定（如10%福爾馬林溶液）和保存起來。根據臨床觀察、血液學和血液生化學檢測的數據結果，結合該藥的作用特點，僅對肉眼觀察到受影響的器官和可疑靶器官進行組織病理學檢查（包括制作組織病理切片和顯微觀察）。

如果與不給藥的對照組相比，來自較高推薦劑量試驗組的雞組織未出現與藥物相關的組織病理學變化，則較低濃度劑量組的雞組織就不再進行組織學檢查。

2.5 數據統計分析 用SPSS軟件進行數據的顯著性檢驗[4]。采用t檢驗比較試驗組與對照組在平均增重、料肉比（飼料利用率）、血液學和血液生化學指標等方面的顯著性差異。

3 結果與分析

3.1 一般臨床觀察 整個試驗期間，對照組和各劑量組中所有試驗雞的健康狀況良好，飲水和采食均正常，未觀察到任何臨床癥狀，各組雞均未出現死亡。

3.2 增重與飼料利用率 各組雞各階段的平均增重及飼料利用率分別見表2～表5。統計學分析表明，試驗組雞連續給藥至第21 d（0～21 d）時，各用藥組與對照組的平均增重均無顯著差異（P＞0.05）；但至試驗結束時（21～42d），3 倍和5倍推薦劑量組的平均增重與對照組相比卻有顯著或極顯著性差異，增重明顯（P＜0.05或0.01）。

表2 試驗中期各組雞的平均增重（，n＝20） g

表2 試驗中期各組雞的平均增重（，n＝20） g

表3 試驗中期各組雞的料肉比（n＝20） g

表4 試驗結束時各組雞的平均增重（，n＝10） g

表4 試驗結束時各組雞的平均增重（，n＝10） g

注：肩標a 表示與對照組比較差異顯著，肩標b 表示與對照組比較差異極顯著；下同

表5 試驗結束時各組雞的料肉比（n＝10） g

與對照組相比，各用藥組的料肉比均下降，飼料利用率增加，且隨著劑量增加，料肉比呈明顯下降的趨勢。表明亞甲基水楊酸桿菌肽預混劑在一定劑量范圍內，隨著給藥劑量的增加，其改善飼料利用率的效果越明顯。

3.3 血液學參數 試驗中期和試驗結束時每組抽檢的10 只雞的血液學檢測結果分別見表6 和表7。統計學分析表明，試驗結束后各劑量組與對照組間均無顯著性差異（P＞0.05）。

表6 試驗中期各組雞的血液學指標（，n＝10）

表6 試驗中期各組雞的血液學指標（，n＝10）

表7 試驗結束時各組雞的血液學指標（，n＝10）

表7 試驗結束時各組雞的血液學指標（，n＝10）

3.4 血液生化學參數 試驗中期、試驗結束時每組抽檢的10 只雞的血液生化學檢測結果分別見表8和表9。

3.5 病理學檢查 試驗中期（給藥后第21 d）隨機選出5 只雞，經剖檢和眼觀病理學檢查，未發現有明顯眼觀病理學變化。試驗結束后將5倍、3倍推薦劑量組和對照組的雞全部撲殺剖檢，眼觀檢查結果顯示：5 倍劑量組中有2只雞出現輕度脂肪肝，對照組中有1 只雞出現輕度脂肪肝，而3 倍推薦劑量組的肝臟均正常；未發現其他明顯的眼觀病理學變化。組織病理學切片HE染色鏡檢結果亦顯示：3倍和5倍推薦劑量組雞的肝、脾、腎和肺均未發現明顯的顯微病變。

表8 試驗中期各組雞的血液生化指標（，n＝10）

表8 試驗中期各組雞的血液生化指標（，n＝10）

表9 試驗結束時各組雞的血液生化指標（，n＝10）

表9 試驗結束時各組雞的血液生化指標（，n＝10）

4 討論與結論

FDA 資料顯示，分別給小雞和產蛋雞飼喂1 100 mg∕kg亞甲基水楊酸桿菌肽8周和5個月，在雞組織、蛋清和蛋黃中均未檢出桿菌肽殘留。加之桿菌肽口服不吸收，在雞的可食性組織中也無殘留，所以對于家禽養殖生產具有很好的安全性[5]。本試驗所采集的數據包括體重、健康狀況、食欲情況以及血液學、生化學等參數，與對照組相比，1倍、3倍和5倍推薦劑量組的試驗雞在健康狀況、食欲情況以及血液學參數等方面無顯著性差異。用亞甲基水楊酸桿菌肽預混劑連續飼喂42 d，雖然尿素氮指標略有上升，但與對照組相比差異并不顯著。另外，1 倍和3 倍推薦劑量組中極個別血液生化參數（如白球比值、葡萄糖和氯的含量）與對照組相比差異顯著，但無劑量相關性。各試驗組之間血液學和血液生化參數無顯著性差異；各用藥組與對照組相比，增重得到了明顯改善，飼料利用率增加。

綜上所述，亞甲基水楊酸桿菌肽預混劑以推薦劑量給靶動物雞連續給藥42 d，具有較好的安全性。