細菌性陰道病及混合感染微生態(tài)的實驗研究

趙婷，李曉，吳曉梅，肖肖，袁濤△

（1云南省第一人民醫(yī)院 云南省臨床病毒學(xué)重點實驗室，云南 昆明；2云南省第一人民醫(yī)院婦科，云南 昆明）

0 引言

細菌性陰道病(bacterial vaginosis,BV)是育齡婦女最常見的陰道感染性疾病，是由多種致病性厭氧菌感染引起的無明顯粘膜炎性反應(yīng)疾病[1，2]。細菌性陰道病主要是由于女性陰道內(nèi)乳桿菌的減少甚至消失，致使陰道菌群失調(diào)，陰道清潔度、PH值發(fā)生變化，使外源性有害微生物入侵及內(nèi)源性致病菌大量繁殖從而引起陰道炎的發(fā)生。細菌性陰道病發(fā)病還會導(dǎo)致諸多并發(fā)癥，如可導(dǎo)致婦女盆腔炎、不孕不育等疾病[3，4]。如不及時治療可轉(zhuǎn)為慢性感染或帶菌者，病原體因外來或生理因素影響可再次復(fù)活而侵襲傳播，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。

1 實驗方法

1.1 資料來源

本研究收集2016年1月至2016年12月樣本12888例。入選標準：①年齡在 18 歲以上，有性生活，未絕經(jīng)；②非月經(jīng)期、妊娠期；③無陰道出血、急性生殖器官炎癥。排除標準：①白帶常規(guī)檢查假絲酵母菌或/和陰道毛滴蟲陽性；②3d內(nèi)有性生活史；③1周內(nèi)有陰道局部用藥、陰道沖洗及手術(shù)操作史；④2周內(nèi)有全身應(yīng)用抗生素、激素史。

1.2 檢查方法

1.2.1 婦科陰道分泌物采集

（1）用無菌棉拭子自受試者陰道側(cè)壁中上 1/3 處取分泌物，做相關(guān)檢查：①放入有少量生理鹽水的無菌試管中及時送檢作白帶常規(guī)檢查；②pH值測定：將精密 pH 試紙（pH3.8-5.4）直接浸入棉拭子上的陰道分泌物中，0.5s后取出與標準色板比較讀取pH值；（2）陰道微生態(tài)取樣：將擴陰器生理鹽水潤滑后放入受檢者陰道內(nèi)，暴露宮頸，無菌棉簽從陰道后穹窿或陰道上 1/3 皺褶內(nèi)取分泌物并裝于無菌試管內(nèi)，試管內(nèi)加入生理鹽水0.5ml 攪勻后棉簽在清潔載玻片上均勻涂開，試管內(nèi)標本用于功能學(xué)檢測。

1.2.2 陰道微生態(tài)檢測

革蘭染色后顯微鏡檢測項目包括:（1）群密集度:根據(jù)油鏡下每視野平均細菌數(shù)分I-IV級。I級：1-9個/油鏡視野；II級：10-99個/油鏡視野；III級：≥100個/油鏡視野。光鏡下觀察細菌滿視野；IV級：光鏡下觀察細菌聚集成團、或密集覆蓋軸膜上皮細胞。如果沒有觀察到細菌,標記為0級。（2）菌群多樣性：根據(jù)光鏡下細菌的形態(tài)分為I-IV級。I級：能辨別1-3種細菌；Ⅱ級：能辨別4-6種；III級：能辨別7-10種；IV級：能辨別11種及以上的細菌。如果沒有觀察到細菌，標記為0級。（3）優(yōu)勢菌判斷：鏡下所見最多的微生物定義為優(yōu)勢菌。無優(yōu)勢菌標記為菌群抑制；優(yōu)勢菌是革蘭陽性桿菌時為正常優(yōu)勢菌；異常優(yōu)勢菌包括革蘭陰性桿菌、革蘭陽性球菌等。（4）陰道分泌物功能檢測：依照試劑盒的操作分別檢測過氧化氫酶、自細胞酯酶、唾液酸苷酶、B-葡萄糖醛酸酶、乙酚氨基葡萄糖苷酶和pH值6項指標。

1.3 診斷標準

（1）BV：采用Amsel臨床診斷標準[5]，4項中有3項陽性即診斷為BV。（2） VVC：10% KOH濕片鏡檢，檢查菌絲或芽孢，但有陰道炎癥的部分患者，取分泌物進行真菌培養(yǎng)確診。（3）TV：生理鹽水鏡片檢測，看到活動的滴蟲即診斷為TV。（4）AV：陰道分泌物顯微鏡濕片的診斷標準。顯微鏡濕片診斷標準分為觀察的5個指標，分別是乳桿菌、白細胞數(shù)、中毒性白細胞所占比例、背景菌落、基底層細胞所占比例。根據(jù)五個指標分別評分，＞3分以上可以診斷AV。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計分析。用卡方檢驗分析比較，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 陰道分泌物檢測

見表1。

2.2 菌群多樣性分析

見表2、表3。

3 討論

女性陰道是一個復(fù)雜的微生態(tài)體系，由陰道內(nèi)的微生態(tài)菌群，機體內(nèi)分泌調(diào)節(jié)功能組成。陰道炎是婦科常見病及多發(fā)病。陰道炎根據(jù)其病因和病原體的不同可分為10余種，但90%以上的陰道炎為BV、WC及TV三種陰道炎[6-8]。陰道炎患者表現(xiàn)各種各樣的癥狀，常常不典型，或者部分婦女無癥狀，診斷往往比較困難，臨床上50%以上的陰道炎為混合性感染。常見的混合性陰道炎有BV+TV、BV+VVC、TV+VVC。在混合感染中可同時分離出多種具有致病作用的病原體和某些條件致病性微生物。在本研究中BV合并其他感染增加了病程進展，使治療更加困難BV+TV、BV+VVC、BV+AV混合感染使患者的陰道環(huán)境更加復(fù)雜，且表現(xiàn)的特征不一；BV+AV混合感染較其他兩種混合感染的菌群多樣性和密集度顯著增加。

表1 單純BV及混合BV感染的臨床實驗室檢查情況

表2 菌群密集度分析（%）

表3 陰道菌群多樣性比較（%）

陰道內(nèi)乳酸桿菌的減少或缺失是導(dǎo)致BV發(fā)生的主要原因，其復(fù)發(fā)也與沒能重新建立乳酸桿菌占優(yōu)勢的陰道菌群狀態(tài)相關(guān)。

綜上所述，通過對陰道分泌物陰道菌群的密集度、多樣性、優(yōu)勢菌及陰道菌群狀態(tài)功能的綜合研究，能夠客觀全面地評價女性陰道微生態(tài)，為臨床診斷、治療及評估預(yù)后提供充足的依據(jù)。