康復新液的體外抑菌活性研究

梁啟聰，蔡婭娟

（中山大學附屬第五醫院藥學部，廣東 珠海）

0 引言

康復新液為美洲大蠊提取物，含有海藻糖、肌醇、苯丙氨酸、天冬酰胺等多種糖蛋白和氨基酸等，具有增強機體免疫力、保護肝臟、促進組織修復和廣泛的抗腫瘤等作用[1]。內服可治療瘀血阻滯如胃出血，胃、十二指腸潰瘍等，以及肺結核、陰虛肺癆的輔助治療[2]。外用可用于潰瘍、外傷、燒傷、燙傷、褥瘡等皮膚黏膜創口[3]。目前廣泛應用于臨床多個學科，體現多種藥理作用，從藥理學角度分析，康復新液富含多元醇類和多肽(表皮細胞生長因子EGF)，能促進表皮細胞生長和肉芽組織增生，改善局部血液循環，促進創面壞死組織脫落，加速創面修復；抗結核作用，肺結核病為結核桿菌引起的肺部特異炎癥，其治療主要通過抗結核藥物的殺菌作用，而康復新液對非特異性炎癥有一定消炎作用、抗癌作用，有學者提出惡性腫瘤的發展可能和身體防御機能的破壞、細胞免疫的缺陷、免疫監視失敗以及機體抗腫瘤生長潛力的減少和不平衡有關；促進機體的新陳代謝，防止機體內的氧化損傷，提高機體的抗氧化酶活性，從而起到抗衰老的作用等[4]。而且康復新液屬于純天然昆蟲——美洲大蠊的提取物，與傳統西藥相比，有安全性高、副作用小、使用方便、不易產生耐藥性等優點。王奎等[5]研究發現，美洲大蠊乙酸乙酯提取物對供試的金黃色葡萄球菌、藤黃微球菌、枯草芽孢桿菌3種革蘭氏陽性菌具有一定抑菌作用，因此設計實驗研究康復新液對金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌及黑曲霉這5種具有典型代表的菌是否具有廣譜抑菌效果，探索康復新液體外抑菌的廣譜性。

1 材料

1.1 受試藥物

康復新液（100 ml/瓶，四川好醫生攀西藥業有限責任公司，批號：190409）。

1.2 儀器

SW-CJ-1F型凈化工作臺（蘇州安泰技術有限公司），DHP300型電熱恒溫培養箱（武漢海聲達儀器設備有限公司），HWS-12 電熱恒溫水浴鍋( 上海一恒科技有限公司)，LMQR-3260B立式高壓滅菌器（山東新華醫療器械股份有限公司），BHC-1500IIBl生物安全柜等。

1.3 試劑、菌株

無菌水，金黃色葡萄球菌（GIM1.64），大腸埃希氏菌 （GIM1.973），銅綠假單胞菌（GIM1.843），白色念珠菌（GIM2.194），黑曲霉（GIM 3.516）。以上菌株由廣東微生物菌種保藏中心提供。

1.4 培養基

Mueller-Hinton 瓊脂培養基（廣東環凱微生物科技有限公司，批號190621）。Mueller-Hinton（MH）肉湯培養基（廣東環凱微生物科技有限公司，批號190610），TTC顯色劑（廣東環凱微生物科技有限公司，批號190517）。

2 方法

2.1 實驗原理

本試驗采用瓊脂稀釋法將不同濃度的抑菌劑混合溶解在瓊脂培養基中，然后點種細菌，通過細菌的生長與否，確定抗（抑）菌物質抑制受試菌生長的最低濃度，即最小抑菌濃度(minimal inhibitory concentration，MIC)[6]。

2.2 菌懸液的配制

刮取銅綠假單胞菌、大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌18-20h的培養物，加入到含15ml無菌水的無菌試管中。搖勻，制成菌懸液。利用可見光光度儀，調菌懸液濃度為108/ml（白色念珠菌濃度為106/ml）。取培養成熟的黑曲霉用吐溫-80水溶液做洗脫劑，洗掉黑曲霉，用血球計數板調菌液濃度為106/ml。

2.3 培養基的配制

培養基配制選用Mueller-Hinton（MH）肉湯培養基。培養基滅菌處理后冷卻至45℃左右，加入TTC顯色劑（含量為0.5g/L）。

2.4 體外抑菌試驗

精密稱量32g康復新液加入68g無菌水，均質搖勻，制成樣品混合液。用5ml移液器吸取MH肉湯培養基5ml加入到無菌試管中待用，5根為一組（編號為1#、2#、3#、4#、5#），共五組，每組均重復以下步驟：用5ml移液器吸取樣品混合液5ml加入1#試管，均質。從中吸取5ml加入2#試管，均質。按上述操作,制備二倍系列稀釋樣品勻液至1%。每遞增稀釋一次，換用1次5ml吸頭。0.1%濃度吸取出的5ml倒于廢液缸。三組試管分別加入銅綠假單胞菌、大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌菌懸液每根各0.1ml。放入恒溫培養箱37 ℃培養48±2h，觀察結果。剩余兩組試管分別加入白色念珠菌、黑曲霉菌液每根各0.1ml。放入恒溫培養箱28 ℃培養5-7d，觀察顯色結果。

3 試驗結果

結果顯示康復新液對金黃色葡萄球菌的MIC為40g/L，對大腸埃希氏菌的MIC為80g/L，對銅綠假單胞菌的MIC為80g/L，對白色念珠菌的MIC為40g/L，對黑曲霉的MIC為80g/L，因此，在使用濃度為80g/L時，康復新液對這五種代表菌具有一定的廣譜抑菌活性。結果見表1。

表1 康復新液最小抑菌濃度( MIC) 測定

4 討論

本研究結果顯示，康復新液中含有抗菌活性成分，對多種細菌及霉菌具有抑制作用，且抑菌效果在使用濃度80g/L有體現。康復新液抗菌有效物質可能與其所含的小分子化合物及抗菌肽有關，前者涉及不飽和脂肪酸、異黃酮化合物及甾醇類化合物，并分別獲得個別單體成分；后者主要是美洲大蠊受到各種誘導源刺激后所產生的抗菌肽，并對其誘導與提取影響因素及初步殺菌機制進行了研究[7]。康復新液雖然對多株細菌具有抗菌活性，但抗菌的最小抑菌濃度相對較大，不適宜單獨做抗菌劑使用，可復配其他抗菌劑或作輔助使用[8]。