小茴香飲片的粉末均勻化研究*

王新慧，李 敏，柴 欣，王躍飛，楊 靜

（天津中醫藥大學中醫藥研究院，天津市現代中藥重點實驗室，天津 301617）

小茴香為傘形科植物茴香（Foeniculum vulgare Mill.）的干燥成熟果實，始載于《唐本草》，味辛，溫，具有散寒、理氣和胃的功效[1]。鹽小茴香具有暖腎，散寒的功效，用于寒疝腹痛、睪丸偏墜、?，F代藥理研究證明，小茴香具有顯著的抑菌、調節胃腸機能、利尿等作用，同時還具有利膽、保肝、促滲、抗癌、抗氧化抗突變及性激素樣等作用[2-5]。

中藥“標準飲片”作為中藥提取物和中成藥生產中的原料，可以全面的表征中藥飲片特征屬性，進而完整控制飲片中藥效物質，更專屬、更準確地分別評價生、制飲片質量，保障中藥飲片的安全性、有效性、質量可控[6-7]。粉碎工藝的優化是標準飲片均勻化過程的重要環節，是后續一系列對于標準飲片內涵屬性研究的基礎。本實驗以出粉率和紫丁香苷（SG）、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷（QG）的含量為指標，在此基礎上設計L9（34）正交實驗，采用“蛛網模式”[8-9]優選生小茴香和鹽小茴香標準飲片均勻化工藝，為制定生小茴香和鹽小茴香標準飲片均勻化技術規范提供參考依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 ACQUITYTMUPLC system 超高效液相色譜儀（美國沃特世公司）；XS 205 型十萬分之一電子天平（瑞士Mettler-Toledo 公司），AL 204 型電子天平（瑞士Mettler-Toledo 公司）；DL 180E 型智能超聲波清洗器（上海之信儀器有限公司；功率：180W，頻率：50 kHz）；TGL-16C 型高速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；Milli-Q 型超純水系統（美國Millipore 公司）；HYC-940 醫用冷藏箱（青島海爾特種電器有限公司）；藥篩：1～9 號（上虞市沖壓篩具廠）；FW80 型粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）。微量進樣器（平頭10 μL，上海高鴿工貿有限公司），硅膠G 板（200 mm×100 mm，青島海洋化工分廠）。

1.2 試劑 生小茴香購自河北春開制藥股份有限公司，經天津中醫藥大學李天祥教授鑒定為傘形科植物茴香（Foeniculum Vulgaer Mill.）的干燥成熟果實。鹽小茴香：嚴格按照2015 版《中華人民共和國藥典》鹽炙法（通則0213）炮制。紫丁香苷（批號111574-201605）購自中國食品藥品檢定研究院，槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷（批號R24S7F21842）購自上海源葉生物科技有限公司，HPLC 分析純度均≥95%。茴香醛（批號110838-201106）購自中國食品藥品檢定研究院。甲醇、甲酸均為色譜純，水為超純水。本文中小茴香是生小茴香和鹽小茴香的統稱；紫丁香苷簡稱為SG；槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷簡稱為QG。

2 方法

2.1 色譜條件 超高效液相色譜條件色譜柱ACQUITY UPLC?BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）；流動相：甲醇（B）-0.1%甲酸水（A），梯度洗脫（0～7 min，95% →63.5% A；7～12 min，63.5% →15% A）；柱溫40 ℃；流速0.3 mL/min；檢測波長：254 nm；進樣量：2 μL[10]。

薄層色譜條件按照2015 版《中華人民共和國藥典》中薄層色譜法（通則0502）實驗，吸取樣品和對照品溶液各1～5 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（17∶2.5）為展開劑，展至8 cm，取出，晾干，噴以二硝基苯肼試液，日光下檢視。

2.2 對照品溶液制備 分別取SG、QG 對照品適量，精密稱定，制成質量濃度為1 mg/mL 的對照品儲備液，備用。分別取上述SG、QG 對照品儲備液500 μL、700 μL，置于5 mL 容量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，搖勻，制成質量濃度分別為99.30 mg/mL、123.8 mg/mL 的混合對照品溶液，供定量分析用。

取茴香醛對照品，加乙醇制成每1 mL 含1 μL的溶液，作為對照溶液，供薄層鑒別用。

2.3 供試品溶液的制備 取小茴香粉末0.5 g，精密稱定，置于25 mL 的容量瓶中，加適量50%甲醇，密塞，超聲處理（功率144 W，頻率50 kHz）20 min，放冷，50%甲醇定容至刻度，搖勻，14 000 r/min 離心10 min，取上清液，過濾，取續濾液1 mL，加1 mL 蒸餾水，混勻，供定量分析用。

取小茴香粉末2 g，加乙醚20 mL，超聲處理（功率144 W，頻率50 kHz）10 min，濾過，濾液揮干，殘渣加三氯甲烷1 mL 使溶解，供薄層鑒別用。

2.4 不同目數的小茴香飲片粉末分布及對指標成分的影響研究 取生小茴香和鹽小茴香各100 g，粉碎機單次粉碎10 s，采用《中華人民共和國藥典》規定的標準藥篩制備不同粒度的粉末，稱取不同藥篩上未通過該藥篩的樣品粉末重量，分別計算其比例。按“2.3”項下方法處理樣品A ～H（生小茴香飲片粉末）和樣品A'～H'（鹽小茴香飲片粉末）制備含量測定和薄層鑒別樣品，按“2.1”色譜條件測定供試品溶液中SG、QG 的含量，薄層色譜條件鑒別不同粒度小茴香飲片粉末。

2.5 基于“蛛網模式”的小茴香飲片粉碎工藝正交實驗研究 以粉碎時間、粉碎次數、投料量（以投料藥材占粉碎室的體積計）為因素，以出粉率、化合物含量為指標進行正交實驗，借鑒本課題組研究的“蛛網模式”[11]原理，優選最佳粉碎工藝。Ga、G'a 分別代表生小茴香和鹽小茴香中出粉率，SG 和QG 的總量為Za 和Z'a，其中a 為不同粉碎方式（9 個正交實驗組，a 為1～9）的小茴香飲片粉末樣品。

為了消除不同指標取值范圍差異對統計結果的影響，需對不同變量指標進行歸一化處理。生小茴香和鹽小茴香樣品中最大出粉率為Ga（max）和G'a（max）；SG 和QG 的最高總含量為Za（max）和Z'a（max）。將所得指標的數值分別除以其最大值，得到出粉率的歸一化結果分別為Qa 和Q'a，SG、QG總量的歸一化結果分別為Ha 和H'a。計算公式1、2如下所示。

通過計算Qa 和Ha（Q'a 和H'a）組成的陰影部分面積，優選生小茴香和鹽小茴香飲片的最佳粉碎方式，其歸一化面積分別為S 和S'，計算公式3、4如下所示。

2.6 小茴香飲片最佳粉碎工藝研究驗證 取生小茴香和鹽小茴香，以確定的小茴香最佳粉碎工藝制備小茴香標準飲片粉末，計算出粉率；按“2.3”項下方法制備小茴香飲片粉末供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定供試品溶液中SG、QG 的含量。

3 結果與討論

3.1 不同目數的小茴香飲片粉末分布及對指標成分的影響研究 由圖1 所示，小茴香飲片粉末全部通過10 目篩，生品中56.29%粉末通過24 目篩，鹽品粉末中75.99%通過24 目篩；生品粉末中33.49%通過50 目篩，鹽品粉末中43.17%通過50 目篩；生品鹽品中均未有粉末通過200 目篩。由結果可以看出經過高溫炮制之后的小茴香飲片，質地更為疏松，更利于粉碎。SG 和QG 指標含量隨標準篩目數增加，含量增加。薄層色譜結果顯示生品鹽品中茴香醛的含量隨標準篩目數增加，斑點顏色加深。鹽品中茴香醛斑點強度弱于生品中茴香醛強度，結果見圖2。

圖1 不同目數小茴香飲片粉末質量（A）、指標成分含量（B）、指標成分質量（C）的折線圖

圖2 不同生小茴香飲片粉末（A）、鹽小茴香飲片粉末（B）薄層色譜圖

3.2 基于“蛛網模式”的小茴香飲片粉碎工藝正交實驗研究 結合小茴香飲片粉末目數分布的結果和2015 版《中華人民共和國藥典》小茴香項下的相關規定，采用中國藥典規定的標準藥篩三號篩制備小茴香標準飲片粉末，按“2.3”項下方法制備小茴香飲片粉末供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定供試品溶液中指標成分的含量。以粉碎時間、粉碎次數、投料量（以投料藥材占粉碎室的體積計）為因素，以出粉率、化合物含量為指標進行正交實驗，優選最佳粉碎工藝，測定結果見表1。

按“2.5”項下計算公式對小茴香粉末出粉率、化合物含量進行歸一化處理，計算其歸一化面積，結果見圖3。通過正交實驗設計助手對實驗數據進行分析，以歸一化面積（S）為指標進行評價，考察因素對生小茴香飲片研究結果的歸一化面積的影響為：粉碎次數＞粉碎時間＞投料量，最佳粉碎工藝為A3B3C3，即投料量為1/2 粉碎室的體積，單次粉碎時間40 s，粉碎3 次，過50 目篩，即得?？疾煲蛩貙}小茴香飲片研究結果的歸一化面積的影響為：粉碎次數＞投料量＞粉碎時間，最佳粉碎工藝為A3B2C3，即投料量為1/2 粉碎室的體積，單次粉碎時間40 s，粉碎2 次，過50 目篩，即得。

3.3 生小茴香和鹽小茴香飲片最佳粉碎工藝驗證研究 采用“2.6”項下方法，采用最佳粉碎工藝制備小茴香標準飲片粉末，計算出粉率及SG、QG 的含量，結果見表2。

綜上可知，采用最佳粉碎工藝制備的生小茴香飲片的出粉率84.93%，RSD 為1.44%（n=3）；SG、QG的總含量為3.473 mg/g，RSD 為1.01%（n=3），說明生小茴香最佳粉碎工藝穩定、可行。采用最佳粉碎工藝制備的鹽小茴香飲片的出粉率92.01%，RSD為0.57%（n=3）；SG、QG 的總含量為1.740 mg/g，RSD 為1.50%（n=3），說明鹽小茴香最佳粉碎工藝穩定、可行。

表1 小茴香飲片粉碎工藝正交實驗表

表2 小茴香飲片最佳粉碎工藝驗證結果

圖3 基于“蛛網模式”對小茴香飲片粉碎工藝研究結果

4 結論

實驗利用“蛛網模式”的研究方法，通過出粉率、指標成分的總含量計算歸一化面積（S），采用正交實驗法以S 為指標對小茴香進行粉末均勻化工藝研究。經粉碎工藝放大驗證，該方法可行，為小茴香的標準飲片均勻化技術規范制定提供參考依據。