川產道地藥材川貝母栽培品鑒別與品質研究

周琪　雷乾婭　趙軍寧　方清茂　王曙

摘要 目的：對川貝母最新試驗研究結果進行描述，為川貝母藥材鑒別方法提供一定提升思路。方法：用性狀觀察，薄層色譜研究，含量測定方法對川貝母藥材特點進行詳細描述。結果：1）栽培品與野生川貝母在性狀方面的區別主要在于栽培品鱗葉表面的顏色偏黃，有皺縮，稍粗糙，青貝的個體較大（可達4 cm）;2）實際上市的栽培品中具松貝性狀特征的，主要源于暗紫貝母，具青貝性狀特征的主要源于川貝母、瓦布貝母和太白貝母;3）川貝母的薄層色譜特征主要與植物基源有關，有效成分結構類型相似但細微結構有差異;4）具有松貝特征的栽培品與具有青貝特征的栽培品的總生物堿含量有明顯差異。結論：建議將川貝母“栽培品”細分為“松貝栽培品”和“青貝栽培品”2種規格以便市場管理和臨床應用，對川貝母薄層色譜鑒別方法和現行標準中總生物堿含量限度提出了修訂建議。

關鍵詞 川貝母;瓦布貝母;暗紫貝母;太白貝母;松貝栽培品;青貝栽培品;性狀;薄層鑒別;含量測定

Abstract Objective：To describe the latest experimental research results of Fritillariae Cirrhosae Bulbus， and to provide some thoughts for improving the identification methods of it. Methods：With observation of character， thin layer chromatography research， content determination method， the characteristics of Fritillariae Cirrhosae Bulbus was described in detail. Results：1）In characteristics， the main differences between cultivated product and wild Fritillariae Cirrhosae Bulbus were that the surface of the scales of the cultivated Fritillariae Cirrhosae Bulbus was yellowish， with shrinkage， slightly rough， and the size of Qingbei was larger（up to 4 cm）.2）Among the actually cultivated Fritillariae Cirrhosae Bulbus in market， those with Songbei characteristics were mainly derived from Fritillaria unibracteata Hsiao et K. C. Hsia; those with Qingbei characteristics were mainly from Fritillaria cirrhosa D. Don， Fritillaria unibracteata Hsiao et K. C. Hsiavar. wabuensis（S. Y. Tang et S. C. Yue）Z. D. Liu， S. Wang et S. C. Chen and Fritillaria taipaiensis P. Y. Li.3）The TLC identification test showed that the chromatographic characteristics were mainly related to plants origin， indicating that the structure types of the active ingredients of Fritillariae Cirrhosae Bulbus were similar， but the microstructures were different.4）The content determination results showed the significant difference in total alkaloid content between cultivated Fritillariae Cirrhosae Bulbus with Songbei characteristics and with Qingbei characteristics. Conclusion：It is recommended to subdivide the “cultivated Fritillariae Cirrhosae Bulbus” into “cultivated Songbei” and “cultivated Qingbei” for market management and clinical application; Amendments were proposed to the method of TLC identification and the limits of total alkaloids in current standards of Fritillariae Cirrhosae Bulbus.

Keywords Fritillariae Cirrhosae Bulbus; Fritillaria unibracteata var. Wabuensis; F.unibracteata; F taipaiensis; Cultivated Songbei; Cultivated Qingbei; TLC identification; Content determination

中圖分類號：R282.5文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.02.018

川貝母是百合科植物川貝母（Fritillaria cirrhosa D.Don）、暗紫貝母（Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia）、甘肅貝母（Fritillaria przewalskii Maxim.）、梭砂貝母（Fritillaria delavayi Franch）、太白貝母（Fritillaria taipaiensis P.Y.Li）或瓦布貝母（Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia var.wabuensis（S.Y.Tang et S.C.Yue）.Z.D.Liu，S.Wang et S.C.Chen）的干燥鱗莖。上述川貝母藥材按照性狀不同分別習稱“松貝”“青貝”“爐貝”和“栽培品”[1]，是中醫藥治療肺經疾病的要藥，也是具有代表性的川產道地名貴藥材[2-3]。自《中華人民共和國藥典》2010版收載川貝母的栽培品以來，川貝母的產業化栽培快速發展，為滿足臨床需要提供了越來越多的川貝母藥源。其相對固定的植物基源和生長條件，使其具有了相對穩定的性狀、成分種類和含量，這為科學評價川貝母栽培品的品質，完善其質量標準提供了有利條件。但是川貝母栽培品和野生川貝母間存在明顯的性狀差異，而無論是藥材的臨床應用還是市場監管層均對這種性狀差異所涉及的藥材內在品質持慎重甚至是懷疑態度，這對川貝母栽培品的推廣應用產生了廣泛的不利影響。

本文從性狀特征、薄層色譜斑點和主要活性成分（生物堿）含量等主要指標的角度對川貝母栽培品進行品質評價研究。為川貝母栽培品的市場流通和臨床應用提供科學的依據，進而為建立川貝母栽培品規范的質量標準奠定基礎，以此促進川貝母產業化栽培的順利發展。這對規范川貝母市場流通秩序，解決川貝母資源可持續利用所面臨的問題具有重大意義。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 數碼照相機[佳能（中國）有限公司，型號：EOS-50D];十萬分之一電子天平（Startorius，德國，型號：BP211P）;電子天平（福州華志科學有限公司，型號：HZT-A+200）;超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司，型號：SB25-12DT）;旋轉蒸發裝置（上海亞榮生化儀器廠，型號：RE-5203）;打粉機（上海江信科技有限公司，型號：LX-05）;真空泵（浙江黃巖求精真空泵廠，型號：2XZ-1）;全自動真空泵（ThermoFisher，美國，型號：XWK-Ⅲ）;優普系列超純水機（四川優普超純科技有限公司，型號：UPR-II-10T）;紫外可見分光光度計（上海譜元儀器有限公司，型號：Alpha-1860）。

1.2 試劑 貝母素乙對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110751-201712）、西貝母堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110767-201710）、貝母素甲（中國食品藥品檢定研究院，批號：110750-201612）、貝母辛（中國食品藥品檢定研究院，批號：111892-201402）;水為純水，其余試劑為分析純。

1.3 分析樣品 本課題組于2015年7月至2018年8月期間，對包括四川、西藏、青海、陜西、重慶、甘肅、云南等省市自治區川貝母栽培品主產區的資源情況進行了實地調查、植物標本和藥材樣品采集，根據《中國植物志》《中國高等植物圖鑒》描述的植物形態[4-5]對樣品進行了植物基源鑒別，川貝母的6個基源植物標本和藥材。見表1。保存于四川大學華西藥學院生藥教研室。調查發現，上述藥典收載的6種植物基源的川貝母中，實現產業化栽培的主要有川貝母、暗紫貝母、太白貝母和瓦布貝母等4種。甘肅貝母和梭砂貝母因產量過低[6-8]等原因至今未見量產商品藥材上市。因此課題組主要針對上述4種已經進行產業化栽培的川貝母進行采樣研究。

2 方法與結果

2.1 性狀與分析 取實地采樣樣品，擺放出各種角度使能反映完整的藥材性狀，置室外自然光照下拍照。由于收集的川貝母栽培品（上市商品）自然分為“松貝栽培品”和“青貝栽培品”，即兩者通常分別采挖加工并銷售，故兩者按實際分別收集并分別拍攝。上述4種植物基源的川貝母均可產生松貝和青貝。見圖1。不同基源的松貝栽培品的性狀特點是類圓錐狀、近球形或圓柱狀，高0.6～1.5 cm，直徑0.5～1.2 cm，表面類白色至淺黃棕色，或帶黃棕色斑紋，或皺縮，稍粗糙。外層鱗葉2瓣，大小懸殊，大瓣緊抱小瓣，未抱部分呈新月形，習稱“懷中抱月”;頂部多閉合，少數開裂，多具粉性。不同基源的青貝栽培品的性狀特點是多呈類圓錐形、短圓柱形或類扁球形，高0.8～3.0 cm，直徑0.8～3.5 cm，表面類白色至淺黃棕色，或帶黃棕色斑紋，或皺縮，稍粗糙。外層鱗葉2瓣，大小相近，相對抱合，習稱“觀音合掌”;頂部開裂，內有心芽和小鱗葉2～3枚及細圓柱形的殘莖。

2.2 薄層色譜鑒別

經反復試驗發現，川貝母藥材的薄層色譜斑點的異同主要與川貝母的植物基源有關，據此，本課題組首先分別將相同基源的樣品集中點樣分析，再將不同基源樣品集中在一個薄層板上點樣分析比較。川貝母藥材樣品信息表見表1。試驗條件如下。

2.2.1 供試品溶液的制備 1）川貝母（除暗紫貝母）供試品溶液的制備：取川貝母粉末2 g，加濃氨試液3 mL，搖勻，密塞，浸泡1 h，加二氯甲烷-無水乙醇（4∶1）20 mL，超聲處理1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1.0 mL使溶解，作為供試品溶液。2）暗紫貝母供試品溶液的制備：取暗紫貝母粉末5 g，加濃氨試液8 mL，搖勻，密塞，浸泡1 h，加二氯甲烷-無水乙醇（4∶1）50 mL，超聲處理1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣用1%鹽酸水溶液反復潤洗，轉移至分液漏斗中，直至檢測無生物堿反應，以相同體積石油醚調節pH值到11萃取3遍，合并萃取液，殘渣用甲醇0.5 mL使溶解，作為供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取貝母素乙對照品5 mg于10 mL容量瓶中，以色譜甲醇定容即得對照品溶液（0.5 mg/mL），依照以上方法同法制備西貝母堿對照品、貝母素甲對照品、貝母辛對照品。

2.2.3 薄層色譜的展開 照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取供試品10～20 μL、對照品溶液5 L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-石油醚-甲醇-氨水（10∶10∶2∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干。

2.2.4 顯色與檢視 以碘粉多次包埋顯色至清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

2.2.5 方法驗證 取不同來源、不同批次或不同等級的川貝母藥材，按照2.2.1～2.2.4項下方法進行試驗，川貝母藥材信息見表1。川貝母樣品主要來源于四川、青海。來源于不同產區的川貝母樣品薄層斑點基本一致。來源于青海產區樣品（1～6，8）均含有貝母素乙、貝母辛、貝母甲素、部分含有西貝母堿對應斑點，來源于四川產區樣品（9～16）均含有貝母素乙、貝母辛、西貝母堿而部分含有貝母素甲對照斑點。通過重復試驗，均可得到以上結果。見圖2。

瓦布貝母樣品主要產于四川阿壩州。不同來源、不同生長年限的瓦布貝母，無論青貝或松貝還是青貝、松貝混合樣品薄層斑點均較為一致，且均具有貝母乙素、西貝母堿、貝母甲素、貝母辛對照斑點，通過重復試驗，均可得到以上結果。見圖3。

太白貝母的薄層斑點在本色譜條件下主要分布在Rf 0.5以下下，野生品種可能由于含量差異斑點不夠清晰。上圖中，太白貝母具有貝母乙素、貝母辛對照斑點，可能含有貝母甲素對照斑點，西貝母堿對照斑點不明顯，以上試驗結果與田芡等[9-10]關于太白貝母的研究結果一致。兩批甘肅貝母樣品薄層圖譜較為一致，具有貝母乙素和貝母辛對照斑點。重復試驗均可得到以上結果。見圖4。

不同生長年限，不同來源暗紫貝母薄層斑點具有一定的統一性，均含有貝母甲素對照斑點，部分含有貝母辛斑點，但從薄層圖譜中無法判斷是否含有貝母乙素、西貝母堿。見圖5。

2.3 含量測定 按照2015版《中華人民共和國藥典》一部川貝母【含量測定】方法測定。川貝母項下川貝母基源14個樣品總生物堿含量范圍為0.1%～0.2%，最高值為0.205%，最低值為0.089%，平均值為0.128%;瓦布貝母12個樣品總生物堿含量范圍為0.1%～0.3%，其生物堿含量較其他基源川貝母普遍偏高，最高值為0.290%，最低值為0.116%，平均值為0.204%，其中松貝總生物堿平均值為0.199%，青貝總生物堿平均值0.207%;太白貝母9個樣品總生物堿含量范圍為0.05%～0.3%，最高值為0.271%，最低值為0.080%，平均值為0.187%;暗紫貝母12個樣品總生物堿含量范圍為0.03%～0.1%，最高值為0.076%，最低值為0.032%，平均值為0.052%，其中松貝總生物堿平均值為0.046%，青貝總生物堿平均值0.072%;梭砂貝母3個樣品總生物堿含量，平均值為0.064%。以上川貝母樣品野生品種總生物堿含量明顯低于栽培品種[1]。見表2（n=2）。

3 討論

3.1 關于性狀與規格劃分

3.1.1 川貝母栽培品的性狀特點 如圖1，松貝栽培品大小多不超過1.0 cm，具“懷中抱月”特征，表面類白色或淺棕黃色，稍粗糙，部分有皺縮;青貝栽培品大小差異明顯，但形成商品的多在2.0 cm，甚至直徑達4.0 cm。由此可見，與野生川貝母的性狀比較，栽培品性狀與之不同之處主要表現在鱗葉表面的顏色有的偏黃，有皺縮，稍粗糙，而且青貝栽培品的大小明顯大于藥典規定青貝的大小。從這種變異的程度和性質來看，顯然不影響川貝母栽培品作為川貝母的臨床使用。

3.1.2 松貝栽培品與青貝栽培品 野生川貝母中松貝與青貝的差異僅表現為性狀[11]不同而分為2種規格，其植物基源、成分結構與含量等的異同較為模糊，也未見研究報道;近年來川貝母的規范化和規模化的栽培，自然形成了2種性狀區別明顯栽培品：一種是以暗紫貝母為主要種質資源的松貝栽培品，一種是以瓦布貝母、川貝母和太白貝母為種質資源的青貝栽培品。調查發現，暗紫貝母種子資源豐富，價廉，但種植后第4年種植時，需要翻挖移栽，種植后產量（增重）較低，故在播種時多采用高密度種植，種植3年后采挖作“松貝”上市銷售，不再移栽;瓦布貝母、川貝母和太白貝母種植后第4～5年生長迅速，年增重可達3～5倍，效益明顯，故這3種基源的栽培品多以種植4年或5年后的“青貝”上市銷售。由于松貝的價格略高于青貝，故種松貝的效益也不差，各產地因地制宜栽培上述幾種川貝母，形成了松貝栽培品與青貝栽培品同時存在的格局。進一步的測試發現，上述不同基源的川貝母藥材的薄層色譜鑒別斑點各具特點，彼此有一定差異，表明其生物堿的（細微）結構有一定差異（見圖2～5）;還應引起注意的是，上述“松貝栽培品”的總生物堿的含量通常在0.03%～0.07%之間，而“青貝栽培品”的總生物堿的含量通常在0.08%以上，瓦布貝母的含量通常約在0.20%。即是說，這2種性狀的栽培品的區別不僅是外在的性狀不同，更在于其植物基源不同，由此還涉及到所含的成分結構與含量等內在品質的區別。因而應該將川貝母栽培品細分為“松貝栽培品”與“青貝栽培品”2種規格[12]，含量限度也可分別制定，以利于合理的進行品質評價和利用。

3.2 關于薄層鑒別 川貝母商品規格的劃分主要是依據藥材性狀，這種劃分難以說清楚與內在品質的關系;而能在一定程度上與其內在品質有關的檢測方法主要是基于有效成分的理化鑒別與含量測定。薄層色譜鑒別是目前評價川貝母真偽優劣簡便、有效且不能取代的主要方法之一[13-14]。現行2015版《中華人民共和國藥典》也收載了川貝母的薄層鑒別方法，但其以貝母素乙作為對薄層鑒別對照品及相關操作存在不妥：其一，本課題組通過液質聯用、高效液相色譜法（ELSD-HPLC）等分析手段多次試驗證明，川貝母藥材中源于暗紫貝母、甘肅貝母、梭砂貝母和太白貝母植物基源的藥材中幾乎不含貝母素乙，或難以檢出;其二，川貝母主要偽品浙貝母和湖北貝母均含有貝母素乙[15-18]，并將其作為指標成分之一，如川貝母也用以作對照品，易致混淆。加之還有其他不妥之處，故本課題組認為有修訂的必要。本研究從川貝母薄層鑒別用對照品、供試品溶液制備、點樣量與展開劑體系、溫度和顯色方法等5個方面進行方法改進，使其專屬性、準確性和靈敏度有所提高。

3.3 關于含量測定 需要關注2點：1）松貝的總生物堿平均值為0.046%，青貝的總生物堿平均值0.072%，所以松貝與青貝的區別不應僅看做是性狀的或外在上的區別，其內在品質特征也是有區別的;2）自2010年版藥典收載【含量測定】項，其含量限度為“以西貝母堿計，不得低于0.05%”，而經數年的實踐，發現松貝，尤其是植物基源為暗紫貝母和甘肅貝母的野生品，有相當數量的含量達不到這一限度，本課題的實測進一步證實了現行標準的含量指標偏高，故建議將川貝母的含量限度修訂為“以西貝母堿計，不得低于0.03%”。

參考文獻

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2015：36-38.

[2]趙高瓊，任波，董小萍，等.川貝母研究現狀[J].中藥與臨床，2012，3（6）：59-64.

[3]張志勇，楊潔，齊澤民.川貝母的研究進展[J].江蘇農業科學，2017，45（24）：9-13.

[4]中國科學院中國植物志編委會.中國植物志[S].北京：科學出版社，2004：101-120.

[5]中國科學院植物研究所.中國高等植物圖鑒[S].第5冊.北京：科學出版社，1975：459-463.

[6]楊濤，王沛雅，張軍，等.瀕危藥材甘肅貝母試管小鱗莖再生的研究[J].中藥材，2016，39（5）：971-974.

[7]馬靖.栽培川貝母品質調控技術的初步研究[D].成都：成都中醫藥大學，2015.

[8]高永茜，張立軒，汪明潤，等.梭砂貝母的傳粉生物學研究[J].中國中藥雜志，2014，39（10）：1795-1798.

[9]田芡，強毅，陳克克，等.珍稀瀕危藥用植物太白貝母研究進展[J].陜西農業科學，2018，64（9）：96-98.

[10]黃林芳，段寶忠，王麗芝，等.川貝母新資源太白貝母中水溶性成分的含量測定[J].中國中藥雜志，2011，36（5）：585-588.

[11]祝之友.川貝母的鑒別要點[J].中國中醫藥現代遠程教育，2016，14（15）：53.

[12]徐云，謝慧敏，謝慧淦，等.川貝母栽培品的性狀分類[J].華西藥學雜志，2018，33（2）：216-218.

[13]方琳，姚帥，崔亞君，等.二維薄層色譜技術的研究進展[J].中成藥，2014，36（3）：589-592.

[14]李玲玲，黃炎，畢志明.中藥蛇莓的薄層色譜鑒別及含量測定研究[J].中國新藥雜志，2014，23（18）：2203-2206.

[15]杜偉鋒，賈永強，張焱新，等.HPLC-ELSD法同時測定浙貝母飲片硫熏前后3種有效成分的含量[J].藥物分析雜志，2015，35（4）：675-678.

[16]徐定平，吳晶晶，周鑫堂，等.湖北貝母化學成分和藥理作用研究進展[J].中國藥業，2015，24（6）：92-93，94.

[17]牛換云，金施施，賈宇平，等.湖北貝母與紫花鄂北貝母中4種生物堿的含量比較分析[J].中藥材，2015，38（10）：2105-2108.

[18]崔明超，張加余，陳少軍，等.浙貝母植株各部位中生物堿和黃酮的LC-LTQ-Orbitrap MSn分析[J].中國中藥雜志，2016，41（11）：2124-2130.

（2020-01-09收稿 責任編輯：王明）