鹿茸的鑒別方法

王宇鵬

鹿茸為鹿科植物梅花鹿CervusnipponTemminck 或者馬鹿CervuselaphusLinnaeus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角[1]。前者習慣性稱為“花鹿茸”，后者習慣性稱為“馬鹿茸”。鹿茸具有壯腎陽、益精血、強筋骨、調沖任、托瘡毒的功效，是我國名貴的中藥材。在我國，鹿科動物種類有十幾種，根據報道顯示有多種動物的茸充當鹿茸使用，導致在中藥材市場上鹿茸摻偽品較多；還有，因為產地不同，梅花鹿茸、馬鹿茸的藥材質量不同[2]。因此，應對鹿茸中藥材進行有效鑒定，保證鹿茸用藥的安全性，本文將近十年與鹿茸藥材的鑒定方法相關的研究進行概述。

1 鹿茸的傳統鑒別方法

1.1 性狀鑒別“花鹿茸”，具有一個分枝的稱為“二杠”，主枝稱為“大挺”，側枝稱為“門莊”。外皮呈紅棕色或者棕色，表面密生細茸毛，茸毛顏色為紅黃色或者棕黃色。具有兩個分枝的稱為“三岔”?！榜R鹿茸”外觀比“花鹿茸”粗大，分枝較多，具有一個側枝的稱為“單門”，兩個側枝的稱為“蓮花”，三個側枝的稱為“三岔”。有研究者對多種鹿茸藥材的外觀性狀進行比較鑒別，發現馬鹿茸分枝最多，這為鹿茸的種間鑒別提供依據[3]。

1.2 顯微鑒別取鹿茸粉末，顯微鏡下可見顯微特征：茸毛多碎斷，毛根多與毛囊相連，基部多膨大呈撕裂狀；毛干表面有瓦片狀排列的扁平細胞，細胞的游離邊緣指向毛尖；沒有骨化的骨組織表面具不規則塊狀突起，無色，邊緣不齊；鹿茸表皮角質層呈淡黃色，表面呈顆粒狀；骨碎片不規則，表面具細密縱向紋理，顏色呈淡黃色或者棕色，骨陷窩呈類圓形，數量較多，排列不齊。鹿茸的炮制應去除茸毛，但是中藥材市場上流通的鹿茸藥材表面的茸毛并沒有清除干凈，茸毛的顯微特征具有一定的穩定性，可以作為鹿茸的顯微鑒定特征之一。劉麗等[4]對馬鹿茸、梅花鹿茸等七種品種鹿茸的茸毛進行顯微鑒別，使用顯微量尺測量七種茸毛的長度、毛干直徑等顯微鑒別指標的數據信息，使用聚類分析法進行分類，鑒別結果與傳統鑒別結果一致，即正品為梅花鹿茸、馬鹿茸，替代品為白唇鹿茸，混用品為新西蘭鹿茸、狍茸、麋鹿絨以及黇鹿茸，結果表明鹿茸的茸毛顯微鑒別特征可以作為鹿茸的顯微鑒別指標，具有鑒別簡便、快速的優點，為鹿茸的品種鑒別提供有效依據。

2 現代鑒別方法

2.1 薄層鑒別薄層色譜鑒別方法具有操作簡單、可靠的優點[5]。有研究者以甘氨酸為對照品，對比鑒別不同鹿茸藥材，結果發現在與甘氨酸對照品相應位置上，鹿茸蠟片、粉片具有清晰斑點顯現[6]；還有研究者以鹿茸溶液為對照品，對強力腦清片、參茸王漿口服液、參茸軟膠囊等含鹿茸的中成藥中的鹿茸藥材進行薄層鑒別[7]，鑒別方法直觀、簡單。

2.2 光譜鑒別研究報道顯示[8]，鹿茸的光譜鑒別方法主要有熒光鑒別法以及紫外光譜鑒別法。紫外光譜鑒別具有簡單、直觀的優點，具體方法為取鹿茸樣品，加一定濃度的乙醇進行提取并濾取藥液，以同樣濃度的乙醇為空白，在200～300 nm下測量吸光度，結果顯示在253 nm、236 nm左右，鹿茸樣品呈現最大吸收。但是紫外光譜法在鑒別同源鹿茸藥材方面具有應用局限性。胡翠英等[9]應用凝視式熒光光譜成像技術對13種鹿茸飲片進行真偽鑒別，結果顯示在相同的實驗條件下，13種鹿茸飲片的光譜曲線特征明顯不同；在410～670 nm波長范圍下對13種鹿茸飲片的光譜數據信息進行聚類分析，聚類分析結果與傳統性狀鑒別與顯微鑒別結果一致，表明熒光光譜成像法可用于鹿茸飲片的真偽鑒別，具有鑒別快速、客觀、重復性良好的優點。有研究者[10]使用傅里葉變換紅外光譜技術評價了三種廠家的鹿茸粉的質量，為鹿茸粉的等級質量評價提供依據。吳新宇等[11]使用傅里葉變換紅外光譜技術結合主成分分析法對鹿茸真偽進行鑒別，鑒別準確率高達93.5%。

2.3 色譜鑒別蛋白質是鹿茸飲片中含量較高的成分，氨基酸是蛋白質的基本組成單位，近年來有許多研究將氨基酸含量作為鹿茸質量分析的主要指標。有研究者[12]采用柱前衍生化HPLC法對50批鹿茸飲片中15種氨基酸的含量進行測定，結果顯示鹿茸蠟片中氨基酸含量最高，血片與粉片中氨基酸的含量差異較小，氨基酸含量測定可以作為鑒別鹿茸飲片真偽的主要依據。該研究組使用HPLC指紋圖譜法建立了鹿茸飲片的HPLC指紋圖譜，采用主成分分析法將不同品種的鹿茸飲片進行鑒別區分，還通過聚類分析法將鹿茸蠟片與骨片進行分離，高效液相指紋圖譜結合化學計量法在鑒別不同規格鹿茸飲片具有高效、準確的優點。宗穎等[13]應用高效液相色譜法，建立了梅花鹿茸藥材以及鹿茸不同部位的HPLC指紋特征圖譜，可用于鹿茸飲片的真偽鑒別，鑒定專屬性較高。

2.4 分子鑒別隨著現代生物學技術的快速發展，分子生物學技術逐漸用于鹿茸藥材的真偽鑒別以及質量評價。DNA條形碼技術是分子鑒定中應用比較廣泛的技術，具有通用性、唯一性、信息化等優點，操作簡便規范。有研究者[14]使用COⅠ通用引物對鹿茸飲片中提取出來的DNA進行聚合酶鏈式反應(PCR)擴增，在凝膠電泳成像儀器上可見單一、明亮的條帶，經克隆純化后，測定序列后，使用DNAMAN軟件進行處理，得到目標序列，在NCBI數據庫中使用BLAST算法鑒別鹿茸藥材的真偽，可用于同源類鹿茸飲片的鑒別。陳康等[15]使用高分辨率熔解曲線(HRM)鑒別鹿茸藥材的真偽，以COⅠ序列為引物，建立正品鹿茸藥材的熔解曲線模型，基于該模型，可對鹿茸藥材的真偽進行鑒別。HRM技術與DNA條形碼技術聯合鑒別鹿茸藥材，具有高通量、快速、成本較低等優點。魏藝聰等[16]基于COⅠ與SRY基因序列，建立了2個位點的特異性PCR體系，用于鑒別鹿茸樣本的來源，并隨機選取中藥材市場中流通的24個鹿茸樣品進行鑒別分析，PCR鑒定法具有簡便、可靠的優點。

2.5 免疫鑒定法隨著摻偽技術的發展，目前在中藥材市場上，對非正品鹿茸的炮制加工方法與正品鹿茸相似，傳統性狀鑒別無法進行區分，有研究者[17]使用SDS-PAGE凝膠電泳法鑒別了四種鹿茸藥材的水溶性蛋白質，結果發現四種鹿茸飲片之間的蛋白質差異，在此基礎上，對這四種鹿茸飲片進行鑒別，在凝膠色譜的基礎上，使用膠體金免疫層析技術，制成試劑盒，使其用于鹿茸飲片的鑒別，該法具有很高的專屬性與特異性。

3 小結

鹿茸既是常用藥，又是貴重藥，目前在我國中藥材市場上，鹿茸的摻偽技術復雜多樣，鹿茸的中藥鑒別方法由簡單直觀的傳統經驗鑒別發展為多組分、多層次指紋圖譜技術的綜合鑒定方法；并引入分子生物學、免疫鑒定等技術對中藥材的品種優劣進行評價，但是各種鑒定方法都有一定的局限性。在實際應用中，可根據情況進行選擇。