Vimentin在肝細胞癌組織中的表達及其與臨床預后的關系

原慶會 何偉

肝細胞癌是我國常見的惡性腫瘤之一，居全球范圍內的腫瘤相關致死性疾病第3位[1-2]。相關文獻報道，波形蛋白(Vimentin)與子宮內膜腺癌、三陰型乳腺癌(Trinegative breast cancer，TNBC)等惡性腫瘤病情進展相關[3-5]，但其與肝細胞癌臨床病理特征及預后關系的研究較少。本研究就Vimentin在肝細胞癌組織中的表達及其與臨床預后的關系進行了探討，現報告如下。

資料與方法

一、病例資料

經本院倫理委員會批準，選取2011年1月—2014年10月我院確診并收治的88例肝細胞癌患者癌組織及癌旁正常組織作為研究組和對照組。納入標準：①確診為原發性肝細胞癌；②病例資料詳細；③入組前未進行任何抗癌治療；④所有患者自愿參與本研究。排除標準：①依從性不好；②合并胃癌、乳腺癌等惡性腫瘤；③發生遠處轉移。88例肝細胞癌患者中，男性65例，女性23例；年齡26～78歲，≥52歲患者53例，<52歲患者35例；腫瘤直徑≥5.0cm患者51例，腫瘤直徑<5.0cm患者37例；有肝硬化70例，無肝硬化18例；TNM分期：I、II期患者53例，III、IV期患者35例；肺功能分級：A、B級患者79例，C級患者9例。

二、主要試劑

兔抗人Vimentin多克隆抗體(杭州華安生物技術有限公司)；免疫組織化學SP試劑盒(深圳子科生物科技有限公司)；蘇木精染色液(南昌雨露實驗器材有限公司)；生物素標記過氧化物酶(甘肅益生祥生物技術有限公司)；中性樹膠(上海聯碩生物科技有限公司)；DAB顯色試劑盒(北京雅杰寶生物技術有限公司)；通用型二抗(河南沃瑞生物科技有限公司)。

三、研究方法

采用免疫組化染色法檢測研究組和對照組中Vimentin蛋白表達水平。操作如下：將研究組和對照組組織固定，脫水，石蠟包埋成塊。將組織切成4 μm的連續切片，依次脫蠟、抗原修復、過氧化物酶阻斷，癌組織和正常組織分別滴加第一抗體Vimentin(濃度1∶100)4℃孵育過夜，再滴加一滴通用型二抗，37℃孵育30 min，再經PBS漂洗，經顯色、復染、水洗藍化，透明，干燥，封片，顯微鏡下觀察Vimentin表達，然后根據細胞染色強度和陽性細胞所占百分比對Vimentin表達進行綜合評分[4]，兩項評分相乘為最終得分：陰性為0～1分(-)，弱陽性為2～4分(+)，陽性為5～7分(++)，強陽性為8分(+++)。最終得分≤4分為低表達，最終得分>4分為高表達。治療結束后隨訪3年，每3個月采用電話及門診復查相結合的方式隨訪1次。

四、統計學方法

本研究通過SPSS 23.0軟件采用卡方檢驗比較研究組和對照組中Vimentin蛋白表達水平，采用卡方檢驗比較不同臨床病理特征的肝細胞癌患者癌組織中Vimentin蛋白表達水平，采用Kaplan-Meier法分析Vimentin蛋白在肝細胞癌組織中的表達與患者預后的關系，P<0.05表示差異有統計學意義。

結 果

一、研究組和對照組中Vimentin蛋白表達水平

Vimentin蛋白呈棕黃色或棕褐色顆粒表達于細胞質中，Vimentin蛋白在研究組中陽性表達率顯著高于對照組(P<0.05)，見表1、圖1。

表1 研究組和對照組中Vimentin蛋白表達水平

二、不同臨床病理特征肝細胞癌患者癌組織中Vimentin蛋白表達水平

性別、AFP 指標、攜帶乙肝病毒程度、年齡、門靜脈侵犯、腫瘤直徑、肝功能分級、肝硬化程度不同的肝細胞癌患者癌組織中Vimentin蛋白表達水平無顯著差別(P>0.05)；低分化肝細胞癌患者癌組織中Vimentin蛋白表達水平明顯高于中高分化肝細胞癌患者(P<0.05)；TNM分期Ⅰ、Ⅱ期肝細胞癌患者癌組織中Vimentin蛋白表達水平明顯高于Ⅲ、Ⅳ期肝細胞癌患者(P<0.05)，見表2。

圖1 A為研究組中Vimentin蛋白的陽性表達；B為對照組中Vimentin蛋白的陰性表達

表2 不同臨床病理特征肝細胞癌患者癌組織中Vimentin蛋白表達水平

三、Vimentin蛋白在肝細胞癌組織中的表達與患者預后的關系

Vimentin高表達患者的總體生存率明顯低于低表達患者，具有統計學差異(Log-Rankχ2=43.089,P<0.001)(圖2)。

圖2 Vimentin高表達和低表達組生存曲線

討 論

近年來隨著早期診療技術的發展，肝細胞癌總體療效明顯提高，但肝細胞癌發病隱匿，術后易復發，患者5年生存率仍較低。因此研究肝細胞癌發生、發展的可靠評估指標對提升患者預后尤為重要。

Vimentin是中間絲蛋白家族的成員之一，可參與腫瘤細胞增殖、遷移，同時還具有維持細胞完整性、抵御外界應急損傷的作用[3]。李新軍等[6]研究發現Vimentin與TNBC臨床病理特征和預后相關，并與上皮間質轉化關系密切，提示Vimentin與上皮間質轉化可能參與了TNBC進展。周博鑫等[7]研究發現Vimentin在乳腺浸潤性導管癌中表達明顯增高，其表達與臨床TNM分期有關，且在乳腺浸潤性導管癌侵襲、轉移中扮演重要角色。趙靜等[8]發現Vimentin主要表達于間質組織以及部分宮頸癌細胞中，且Vimentin表達與宮頸癌患者淋巴結轉移、局部侵襲以及腫瘤細胞分化程度有相關性，但Vimentin表達與患者年齡、腫瘤直徑以及臨床分期無相關性。本研究發現，Vimentin蛋白在肝細胞癌組織中呈高表達，提示Vimentin可能參與了肝細胞癌的發生。分析Vimentin表達與肝細胞癌各臨床病理特征參數的關系顯示腫瘤分化、TNM分期不同的患者肝細胞癌組織中Vimentin蛋白表達水平差別顯著，提示Vimentin在肝細胞癌組織中的表達水平與腫瘤分化、TNM分期呈相關性。進一步分析Vimentin表達水平與肝細胞癌患者預后的關系顯示Vimentin高表達患者的總體生存率明顯低于低表達患者，提示Vimentin表達水平與肝細胞癌患者預后呈相關性，Vimentin檢測對肝細胞癌病情進展有一定預測意義。

綜上所述，Vimentin在肝細胞癌組織中呈高表達，Vimentin的表達水平與腫瘤分化、TNM分期及肝細胞癌預后呈相關性。但研究時間短，納入人數少，有待進一步研究。