CD34和Ki67的表達預測肝癌術后復發的風險

賈磊 李豪 白鴻太 陳國勇 魏思東

肝細胞癌(HCC)是常見的惡性腫瘤，其發病率位于所有惡性腫瘤第3位，僅我國每年導致33萬多例肝癌的相關死亡，病死率居于惡性腫瘤前列[1]。目前肝癌最好的治療方式仍是根治性的手術切除，肝癌根治性手術術后在6、12、24個月時的復發率分別為27.0%、39.7%和45.6%，近半都在兩年內復發，5年相對生存率為12.1%[2]，術后復發制約了患者的長期生存。如何預測肝癌復發對治療具有重要的意義。我們通過對比分析發現，肝癌組織CD34和Ki-67的表達能夠預測肝癌的術后復發，為肝癌術后復發的預測提供了方向。

資料與方法

一、一般資料

回顧性分析從2014年10月至2018年12月我院因肝細胞癌行根治性手術治療患者的臨床資料及病理免疫組化結果，排除術前證實有肝內外轉移、無法行根治性手術、或根治性手術前給予過介入或射頻消融手術、術后無隨訪、病理資料不全、不能定性或無免疫組化結果的患者資料后。共50例患者納入統計分析。

二、 資料采集

收集患者的性別、年齡、是否患有乙肝、腫瘤最大直徑、臨床病理結果、免疫組化結果和復發的時間。

三、復發時間及分組

所有患者行根治性手術切除，于術后定期復查彩超、甲胎蛋白(AFP)等，當彩超提示腫物或AFP再次升高，懷疑復發之后再進一步進行增強CT、MRI明確診斷。以手術后2年內復發定義為早期復發組，2至5年復發定義為晚期復發組，早期復發組及晚期復發組合并定義為復發組， 5年內未復發者定義為治愈組。

四、統計學方法

運用統計學軟件SPSS 22.0數據進行分析。計數資料采取例數和百分比表示，單因素分析采用χ2檢驗、Fisher確切概率法；計量資料使用均數±標準誤表示，差異比較采取t檢驗，3組間比較使用方差分析，P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

一、患者一般資料比較

在納入統計的50例患者中，其中32例男性，18例女性；14例患者早期復發，16例晚期復發，20例未復發；首先將早期復發和晚期復發合稱為復發組共30例，未復發的治愈組20例。復發組年齡(53.5±1.9)歲，治愈組(50.6±3.9)歲。腫瘤最大直徑復發組為(5.4±0.7)cm，治愈組(4.9±0.6)cm。復發組96.7%(29/30)患有慢性乙型肝炎，治愈組80%(16/20)患慢性乙型肝炎。一般資料比較復發組和治愈組無統計學差異。

二、復發組和治愈組免疫組化分析

通過對兩組患者的免疫組化分析發現，CD34的陽性表達在復發組明顯高于治愈組(P<0.05)，復發組和治愈組表達率分別為73.3%(22/30)和45.0%(9/20)。Ki67的表達在復發組高于治愈組(P<0.05)，復發組和治愈組表達率分別為(39.0±3.3)%和(25.3±5.1)%；同時我們分析了兩組間CD10、CK19、Hep、Arg和GPC-3的表達，結果顯示這些蛋白的陽性率在復發組均稍高于治愈組，但無統計學差異(P>0.05)。結果見表1。

三、早期復發組、晚期復發組和治愈組免疫組化分析

為進一步分析是否CD34和Ki67的表達在不同時間段復發組有差異，我們把早期復發組、晚期復發組和治愈組免疫組化結果再進一步對比。結果顯示CD34早期復發組陽性表達為71.4%(10/14),晚期復發為75%(12/16)，和治愈組三組進行卡方檢驗，χ2=4.129，P=0.127，三組之間無差異。Ki67早期復發組的表達為41.4±5.0(%)，晚期復發組為(36.9±4.5)%，治愈組為(25.3±5.1)%，3組行方差分析，F=2.943，P=0.063，不能認為三組間有差異。

討 論

肝細胞癌術后復發轉移其危險因素的分子預測尚不明確，干細胞的理論認為，腫瘤的復發與干細胞的存在密切相關，CD34蛋白是一種高度糖基化修飾的跨膜糖蛋白，選擇性表達于人類干細胞表面，在細胞成熟后表達下降，肝臟病理研究顯示CD34的表達在正常肝組織、肝硬化組織、肝癌中的表達依次增強[3]，在研究肝臟結節性病變中發現，肝癌中CD34的表達明顯高于肝臟再生結節(RN)不典型增生結節(DN)，并且CD34的表達從RN到DN再到肝癌依次升高[4]，同時，在甲胎蛋白陰性的原發性肝癌中，伴有局灶性結節性增生(FNH)的患者的CD34蛋白表達明顯高于不伴有FNH的患者[5]。CD34是特異性和敏感性都比較強的血管內皮細胞標志物，和腫瘤的血管生成、毛細血管密度密切相關，對血管的生成起促進作用，腫瘤的微血管越多增值指數越高；CD34分子有可能通過促進血管生成促進癌變的過程，研究顯示CD34陽性表達的骨髓源性細胞被招募聚集于腦腫瘤中，支持新生的血管，促進腫瘤的生長。雖有研究顯示CD34的表達在分化較好的肝癌組織中表達的陽性較高，但因CD34和血管生成的關系，更容易形成脈管瘤栓，這就使CD34陽性表達的肝細胞癌更容易發生血行轉移，該研究顯示CD34的表達是肝細胞癌術后復發的關鍵因素，CD34的高表達可能預示肝細胞癌的不良預后，其機制可能是CD34的高表達與更容易形成脈管癌栓轉移相關。

表1 復發組與治愈組免疫組化蛋白表達比較的數據統計分析

a:CD34陽性表達;b:CD34陰性表達;c:Ki67高表達;d:Ki67低表達

圖1CD34和Ki67在肝癌組織中的表達

Ki67 抗原是細胞增殖標志抗原，與多種腫瘤細胞的增殖活性、細胞周期以及腫瘤的生長方式、復發、轉移等多種生物學行為相關，其表達隨細胞周期的不同而發生改變，G0期不表達，而在G1 、S 期、G2期、M期的表達逐漸升高[6]。有研究證實Ki67的表達越弱，則其組織的分化越好，反之，Ki-67高表達，則其分化程度低[7]，相關研究也證實Ki-67 的過表達與肝細胞癌腫瘤大小、腫瘤分期、淋巴結轉移、靜脈侵犯、浸潤深度有關，較高的Ki-67表達可使肝細胞癌患者進展快，預后差，其生存率明顯降低，在口腔鱗癌中也得到相似結論[8-9]。本研究發現，根治性手術切除術后，復發組的Ki-67和治愈組的表達有差異，且復發組Ki-67的表達明顯大于治愈組，提示Ki-67的高表達能夠預測術后肝癌復發的風險。

在CD34及Ki67兩種蛋白三組對比時得出結果均不能證明三組間存在差異，可能是由于對比三組間的差異使每組的數據減少，有待增加樣本量進一步分析。細胞角蛋白(CK)19屬于膽管細胞型細胞角質素，參與腫瘤侵襲和血管生成，CK19表達陽性的組織分化較低[10]，CK19與不良預后有關，但本研究中無統計學差異，考慮數據較少，其與復發的關系有待進一步研究。