伴丘疹性損害的先天性無毛癥一例HR基因突變檢測

劉偉英 高貴云 鄭璐瑤 李 明

1湖南航天醫院皮膚科，長沙，410205；2上海交通大學醫學院附屬新華醫院皮膚科，上海，200092

先天性無毛癥是一組罕見的遺傳性皮膚病，具有較強的臨床和遺傳異質性，其臨床表現為頭皮或身體其他部位的毛發缺失或完全脫光，伴或不伴有身體其他系統的損害，根據表型可分為綜合征型和非綜合征型。先天性少毛癥的遺傳模式常呈常染色體顯性遺傳、常染色體隱性遺傳以及性連鎖遺傳。伴丘疹性損害的先天性無毛癥(atrichia with papular lesions, APL)的遺傳模式為常染色體隱性遺傳，其致病基因是HR基因[1]。APL患者出生時毛發正常，出生后不久頭皮毛發完全脫失且不可逆，大概2歲時，患者開始出現多發的毛囊丘疹，出現在面部、頭皮、肢端等，某些患者還可見色素減退斑。本研究中，我們對一例APL患兒進行了HR基因的突變檢測，現將結果報道如下。

1 對象與方法

1.1 對象 患兒，女，8歲。足月順產，出生時毛發與胎脂粘連于頭皮，洗澡后頭發、眉毛、睫毛大部分脫落，持續加重，頭發脫落后不生長，眉毛、睫毛可再生長但不牢固，長至約1 cm后脫落。1歲時患兒頭發脫光，近幾個月頭皮出現散在近膚色丘疹。父母均正常，無兄弟姐妹，家族中其他成員無類似表現。體檢：患兒血尿糞常規、肝功能、免疫功能、微量元素測定均無明顯異常，智力正常。皮膚科檢查：頭發、眉毛、睫毛全部脫失(圖1a、1b)，頭皮可見散在近膚色毛囊丘疹(圖1c)，無掌跖角化，無指(趾)甲異常。

1.2 外周血基因組DNA抽取 征得知情同意后，抽取患兒及其父母共3人的外周靜脈血各2 mL。同時采集了100名正常對照的外周血。應用QIA ampDNA Blood Minikit(德國QIAGEN公司)試劑盒提取基因組DNA。

1.3 PCR擴增和測序 采用Primer 5.0軟件對HR基因的19個外顯子設計特異性引物，進行常規PCR擴增，PCR擴增產物純化后使用ABI 3730測序儀進行Sanger測序，測序結果使用Chromas軟件進行分析，并通過與HR基因cDNA參考序列(NM_005144.4)比較來描述突變。

2 結果

DNA直接測序結果顯示HR基因存在復合雜合突變，分別在第10外顯子發現移碼突變c.2270delC(圖2a)，導致第757位氨基酸提前終止，變為無義氨基酸。在第15外顯子內發現錯義突變c.3038T>C(圖2b)，導致1013位氨基酸由脯氨酸突變為亮氨酸。患兒的兩個突變分別遺傳于其父親和母親。以上2個突變在100名正常對照中均未檢測到(圖2c、2d)，提示它們為致病變異而非單核苷酸多態，查閱國內外文獻均屬首次報道，在Ensemble、NCBI等數據庫均未查到該突變。

1a、1b：患兒頭發和眉毛脫失；1c：頭皮可見近膚色的毛囊丘疹

圖1臨床圖片

2a：示c.2270delC移碼突變；2b：示c.3038 T>C錯義突變；2c：正常對照序列；2d：正常對照序列

3 討論

伴丘疹性損害的先天性無毛癥患者臨床上可表現為出生時局部或全部的毛發缺失或者出生時毛發正常，在出生后的前幾個月脫落，患者還會出現擴散的多發性角化毛囊性丘疹，好發于頭皮、面部和四肢。患者無其他外胚層發育的缺陷，如指甲、汗腺或牙齒等，某些患者軀干部可見色素減退斑。APL的遺傳模式通常為常染色體隱性遺傳。本文報道的患兒為散發病例，出生后不久毛發均脫落，同時伴有丘疹損害，為典型的常染色體隱性遺傳APL。

APL通常需要與先天性普禿(alopecia universalis congenita，AUC)進行鑒別診斷，兩種疾病均為常染色體隱性遺傳，且病因都與無毛基因的突變有關，值得注意的是，AUC患者表現的毛發脫失和APL幾乎一致，但前者皮膚是正常的，而APL患者會出現擴散的多角化毛囊性丘疹。仔細詢問家族史，根據典型的臨床表現不難作出診斷。

1954年，Damste等[2]首次報道了APL，1998年Ahmad等[3]在一個以色列-阿拉伯裔的家系中將該病的致病基因定位于染色體8p21[4]，并發現HR基因為本病的致病基因，該基因含有19個外顯子，只表達在皮膚和大腦，其表達產物是無毛蛋白，分子量為130kDa，含1189個氨基酸，該蛋白功能的缺陷會導致毛發生長周期的不穩定，其可能在第一個毛發生長周期起作用，由于此蛋白的缺失，毛囊的分化不會被誘導，休止期毛囊不會重新進入生長期，新的毛發也就無法再生長，進而導致毛發的脫落。無毛蛋白功能缺失還可導致毛囊結構的不成熟，從而引起多發性的擴散性毛囊丘疹。

通過對文獻及數據庫的檢索，已經發現了30余種不同的HR基因突變，包括不同的突變類型，如錯義突變[5]、無義突變、缺失突變[6]和剪切位點突變[7,8]等。其中國外報道近親結婚的家系，APL的HR基因的突變均為純合突變。目前已發現的該基因的突變位點通常分散在整個HR基因上，還未發現熱點突變區域。本文報道的患兒家系否認近親結婚史，患兒攜帶復合雜合突變，分別為移碼突變c.2270delC和錯義突變c.3038T>C，在國內外都屬首次報道。c.2270delC突變導致基因編碼框移碼，即p.S757Ffs*144，致使無毛蛋白截短；c.3038T>C引起患者無毛蛋白的第1013位的脯氨酸由亮氨酸替代，即p.P1013L，我們通過Polyphen-2軟件(http://genetics.bwh.harvard.edu/pph2/)對其進行功能預測，結果顯示該突變很可能是有損害的。這些突變可能導致無毛蛋白的功能異常，導致毛發周期不穩定以及毛囊結構不成熟，最終表現為毛發的脫失以及近膚色的毛囊丘疹。

我們應用HR基因突變檢測在1例APL患兒中發現了2種新的HR基因突變c.2270delC和c.3038T>C，增加了中國漢族人群中HR基因的突變譜，為今后進行產前診斷及遺傳咨詢奠定了基礎。