二十五種中草藥對煙草普通花葉病毒病的防治效果

任瓊麗

摘 ? 要 ? 煙草普通花葉病毒病在云南省玉溪煙區發生日趨嚴重，影響煙葉產量和品質，威脅玉溪煙草生產，目前尚無一種較為理想的防治藥劑。試驗測定了25種中草藥在普通煙品種K326上對煙草普通花葉病毒病的防治效果及對煙葉中丙二醛、類黃酮和總酚含量的影響。結果表明：煙株接種煙草普通花葉病毒24 h后，分別噴25種中草藥的粗提物200倍液，14 d后，煙葉中丙二醛的含量顯著低于清水對照，類黃酮和總酚的含量顯著高于對照;對煙草花葉病的防效較好的是射干、柴胡、五倍子和虎杖，防治效果分別為57.95%、53.33%、50.26%和48.72%。

關鍵詞 ? ?中草藥;煙草;普通花葉病毒;防治效果

中圖分類號：S435.72 ? ?文獻標志碼：A ? ?DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2020.1.006

煙草普通花葉病毒病是一種在世界各煙區廣泛分布、局部地區嚴重流行的煙草病害，在我國各產煙區普遍發生[1]。近年來，云南省玉溪煙區普通花葉病毒病發生日趨嚴重，且有不斷上升趨勢，嚴重影響了煙葉的產量和品質，威脅玉溪煙草生產。前人對煙草花葉病毒病的防治做了一些研究，但由于病毒擴散、傳播方式特殊，與寄主的寄生關系和復制（增殖）方式復雜及農藥自身的特性等，迄今為止尚無一種較為理想的防治藥劑[2]。中草藥的應用在我國有著古老的歷史，在人、畜病毒病的防治中發揮著重要作用[3]。從植物中篩選抗病毒物質是開發植物抗病毒抑制劑的重要途徑之一[4]。本研究旨在篩選能有效防治煙草花葉病毒病的中草藥，為煙草花葉病毒病防治探索新的途徑[5]。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試中草藥：供試的25種中草藥（見表1），購自玉溪市一心堂藥店，廠家為云南鴻翔藥業。

供試作物：普通煙（Nicotiana tabacum L.），品種為K326（玉溪中煙種子有限公司生產）。漂浮育苗，于6～7葉時進行盆栽。

供試毒源：供試毒源Tobacco mosaic virus（TMV）保存在普通煙上。采用常規汁液摩擦法接種。病毒接種液由病葉和PBS緩沖液按1∶20（w/v）的比例加少量金剛砂研磨后，用4層紗布過濾所得[6-7]。

1.2 試驗方法

1.2.1 中草藥粗提物的制備

用中藥粉碎機將中草藥粉碎成粉末，在室溫下加入樣品量6倍的分析甲醇（V/M），浸泡72 h，期間不斷攪拌，使其充分溶解，用漏斗過濾后，蒸發濃縮獲得膏狀提取物，置于4 ℃冰箱保存[8]。

1.2.2 接種

煙株盆栽10 d后接種病毒，采用常規汁液摩擦法接種。接種后用清水沖洗，24 h后噴中草藥粗提物200倍液，對照噴清水。試驗設26個處理，每種藥劑為1個處理，以清水為對照，每處理重復3次，每次重復20株。

1.2.3 病情調查

接種14 d后調查各處理煙株的發病率和病情指數，計算防治效果。病害分級與調查方法按照國標GB/T 23222-2008《煙草病蟲害分級及調查方法》進行，以株為單位，分為：0級，全株無病;1級，心葉脈明或輕微花葉，病株無明顯矮化;3級，1/3葉片花葉但不變形，或病株矮化為正常株高的3/4以上;5級，1/3至1/2葉片花葉，或少數葉片變形，或主脈變黑，或病株矮化為正常株高的2/3至3/4;7級，1/2至2/3葉片花葉，或變形或主側脈壞死，或病株矮化為正常株高的1/2至2/3;9級，全株葉片花葉，嚴重變形或壞死，或病株矮化為正常株高的1/2以上[9]。發病率、病情指數、防治效果計算公式如下：

發病率=（發病株數/調查總株數）×100%

病情指數=[∑（各級病株×該病級值）/（調查總病株×最高級值）]×100

防治效果=[（對照病情指數-處理病情指數）/對照病情指數]×100%

1.2.4 煙株生理指標的測定

病情調查后，取樣測定煙葉的丙二醛、類黃酮和總酚含量。

1.2.4.1丙二醛（MAD）測定

丙二醛（MAD）含量的測定采用硫代巴比妥酸法[10-11]，具體過程為：稱取各處理新鮮葉片0.5 g，加入5%三氯乙酸（TCA）5 mL，研磨后所得勻漿在3 000 r·min-1下離心10 min，取上清液2 mL，加入0.67%硫代巴比妥酸（TBA）2 mL，混合后在100 ℃水浴上煮沸30 min，冷卻后再離心一次，最后以0.67%硫代巴比妥酸（TBA）溶液為對照，分別測定上清液在450 nm、532 nm、600 nm處的吸光度值，并按公式算出MDA濃度，再算出單位鮮量組織中的MDA含量（nmol·g-1）。

C（μmol·L-1）=6.45（A532-A600）-0.56A450

1.2.4.2類黃酮、總酚含量測定

類黃酮、總酚含量的測定參照余清等[12-15]的方法進行。具體過程為：用電子天平稱取0.500 g新鮮葉片，剪1～2 mm的小塊，加1%HCl的甲醇溶液5 mL提取24 h（4 ℃），取0.5 mL提取液用蒸餾水稀釋至25 mL，測定OD280和OD325，類黃酮含量以OD325/g鮮重表示，總酚含量以OD280/g鮮重表示。

1.3 數據處理

試驗數據采用Excel 2007進行數據統計，DPS7.0分析軟件進行顯著性測驗，Duncans新復極差法進行多重比較。

2 結果與分析

2.1 25種中草藥對煙草普通花葉病的防治效果

噴藥14 d后調查各處理煙株的發病情況，計算病情指數和防治效果，結果見表2。由表2可見，防治效果最好的是射干，防效達57.95%;其次是柴胡、五倍子和虎杖，防效分別為53.33%、50.26%和48.72%;再次是連翹、貝母、玄參、夏枯草，防效分別為44.61%、43.59%、41.54%、41.54%;甘草、黃連、佩蘭、苦杏仁、桔梗、槐花、板蘭根和地榆的防效在30.26%～39.49%;其余處理的防效都低于30%。

2.2 25種中草藥對煙葉丙二醛含量的影響

測定各處理煙葉的丙二醛含量，結果表明（見表3），對照煙葉的丙二醛含量最高，達13.83 nmol·g-1;最低的是射干，煙葉丙二醛含量為7.58 nmol·g-1;枙子、黃花、黃岑、知母、牡丹皮、地黃、魚腥草、薄荷、板蘭根、地榆、淡竹葉、槐花、桔梗處理的煙葉丙二醛含量高于10 nmol·g-1;其余處理的煙葉丙二醛含量都低于10 nmol·g-1。

2.3 25種中草藥對煙葉類黃酮含量的影響

測定各處理煙株煙葉內類黃酮的含量，結果表明（見表3），對照處理的煙株中類黃酮含量最低，為0.501 OD325/g;枙子、黃花、黃岑、知母處理的煙株類黃酮含量低于1.000 OD325/g;其余處理的煙株煙葉類黃酮含量均高于1.000 OD325/g，其中射干處理的煙株煙葉類黃酮含量最高，達1.553 OD325/g。

2.4 25種中草藥對煙葉總酚含量的影響

測定各處理煙葉的總酚含量，結果表明（見表3），射干處理的煙葉總酚含量最高，達1.779 OD280/g;對照處理的煙葉總酚含量最低，為0.567 OD280/g;射干、五倍子、虎杖、連翹、貝母、夏枯草、黃連、苦杏仁、佩蘭、柴胡、玄參、桔梗、淡竹葉、地榆、槐花和板蘭根處理的煙葉總酚含量高于1.000 OD280/g。

3 結論與討論

試驗結果表明，煙株接種普通花葉病毒24 h后，分別噴25種中草藥的粗提物200倍液，7 d后，25種中草藥處理的煙葉中丙二醛含量顯著低于清水對照，類黃酮和總酚含量顯著高于對照;其中對煙草花葉病的防效較好的是射干（防效達57.95%）、柴胡（防效達53.33%）、五倍子（防效達50.26%）、虎杖（防效達48.72%）。

MDA含量作為細胞膜損傷程度的生理指標和膜質過氧化指標，反映了細胞質過氧化程度和植物對逆境條件的反應強弱[15-16]，總酚和類黃酮含量與植物抗病性關系密切[17-21]。本研究中射干、柴胡、五倍子、虎杖等中草藥能降低煙葉中丙二醛含量，提高煙葉類黃酮、總酚含量，從而增強煙草的抗病性，但其對煙草的抗病活性物質和抗病機理還有待進一步研究。

植物病毒病有“植物癌癥”之稱，目前還沒有一種植物病毒病的理想防治藥劑[22]。中草藥中普遍存在生物堿類、苷類、有機酸、黃酮類、氨基酸、揮發油、酚、醛、鞣質、多糖和單糖等抗病毒物質[23]，這些物質易在植物體內運輸，在環境中易被降解，不易造成環境污染和殘留問題。劉學端等[24]利用商陸、甘草、連翹等幾種中草藥復配成MH11-4可濕性粉劑能明顯抑制植物體內TMV的增殖。劉華山等[25]研究3種中草藥對煙草普通花葉病有一定的防效。本試驗結果表明，射干、柴胡、五倍子對普通煙K326煙草花葉病的防效高于50%。我國中草藥資源豐富，在進行抗病毒活性中草藥的篩選時，要充分擴大篩選范圍，有利于從中發現高活性中草藥，由此開發出高效植物抗病毒抑制劑。

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（責任編輯：易 ?婧）