桔梗根腐病病原鑒定及防治藥劑篩選初報

唐菲菲

摘 ? 要 ? 對桔梗根腐病癥狀觀察、病原菌分離、病原菌形態觀察及接菌和再分離，桔梗根腐病病原鑒定為鐮刀菌。同時采用室內生長速率法比較了15種殺菌劑對桔梗根腐病的毒力作用。結果表明，不同殺菌劑在抑制菌絲生長程度上存在差異，其中10%氟嗎啉·50%代森錳鋅WP對桔梗根腐病菌菌絲生長有明顯的抑制效果，其 EC50值為0.000 12 μg·mL-1;50%多菌靈WP對桔梗根腐病病菌菌絲的生長抑制效果較好，其EC50值為0.205 01μg·mL-1，以上這兩種藥劑可作為桔梗根腐病田間藥效試驗的首選藥劑。其他藥劑如百菌清、凱潤、嘧菌脂、代森錳鋅和瑞對桔梗根腐病病菌菌絲生長的抑制效果差。

關鍵詞 ? ?桔梗;鐮刀菌;病原形態;生長速率法;EC50

中圖分類號：S435.672 ? ?文獻標志碼：A ? ?DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2020.1.007

桔梗（Platycodon grandiforus），是桔?？疲–ampanulaceae）桔梗屬（Platycodon）的一種多年生草本植物。桔梗也叫鈴鐺花、白藥、土人參等，以根入藥，除藥用外，還可以用于釀酒、菜食及作為觀賞花卉栽培。桔梗味苦、辛，性平[1]。主要分布于中國、朝鮮半島、日本和西伯利亞東部。桔梗體內有乳汁，全株光滑無毛。根粗大肉質，圓錐形或有分叉，外皮黃褐色。莖直立，有分枝;葉多為互生，少數對生，近無柄，葉片卵形或卵狀披針形，邊緣有鋸齒;花大型，藍紫色或藍白[2]。朝鮮族人把桔梗的根用作野菜食用，有宣肺、利咽、祛痰、排膿功效?，F代醫學研究表明，桔梗還有降血糖、降血脂、鎮靜、鎮痛、解熱、擴張血管、減慢心率、抗潰瘍等功效。

病害嚴重一直是影響桔梗產量的主要因素。據調查，桔梗病害主要有兩大類，一類是莖葉上的病害，主要有輪紋病（Ascochyta.sp）、斑枯?。⊿eptiria platycodonis Sdy.）、炭疽?。–olletotrichum sp.）;另一類是根部病害，主要有立枯?。≧hizoctonia solani）、枯萎病（Fusarium）、根腐?。‵usarium sp.）、紫紋羽病菌（Helicobasidium mompa Tanaka）、根結線蟲?。∕eloidoyne incognite）等[3]。其中根部病害是影響桔梗產量的主要病害，危害程度不容忽視。

近年來，根腐病已經成為影響桔梗生產的主要病害之一，但生產中仍然有很多人對其認識不足、重視不夠，往往錯過最佳防治時機，使病害難以得到有效防控。因此，迫切需要尋找高效、低毒、低殘留的藥劑來進行防治。本試驗對吉林農業大學藥植園中的患病桔梗進行病原菌的分離和鑒定，并做了大量的室內藥劑篩選工作，以期篩選出對桔梗病害防效好、安全環保、不影響桔梗產量和品質的農藥種類，為生產上科學用藥提供依據。

1 材料與方法

1.1 病害癥狀描述

2018年7月，在吉林農業大學植物園發現桔梗根腐病發生非常嚴重，尤其是在地勢低洼地的桔梗根腐病發病率將近100%。

1.2 病原菌分離與純化

組織分離法對在吉林農業大學藥園采集到的桔梗進行分離，用刀片切取病健交界處病組織若干塊，大小為2 mm×2 mm，放在0.1%升汞中消毒0.5 min，再用無菌水沖洗3次，置于PDA培養基上，每皿2～4塊，在25 ℃恒溫培養箱下培養。

PDA培養基配方：馬鈴薯200 g、葡萄糖18 g、瓊脂16 g、蒸餾水1 000 mL。

將在平板培養基上分離出的菌絲連同培養基一起挑出，移植到另一PDA培養基上繼續培養。

1.3 病原菌致病性測定

采用傷口接種法，將保存的待試菌株接種到PDA平板上活化，25 ℃下培養。7 d后，用無菌水將健康桔梗莖（根）沖洗干凈，用刀片割傷桔梗莖（根）。將PDA上的菌種分成大小均等的四塊菌餅，用無菌水將脫脂棉濕潤，將菌餅放入脫脂棉中，用透明膜將脫脂棉包在桔梗傷口處（注意用菌餅對準傷口），以無菌水接種健康桔梗莖（根）為對照，每隔3天觀察一次，并記錄發病情況。

1.4 病原菌形態學鑒定

對接種發病的菌株進行形態學觀察，包括對病原菌在培養基上形成的菌落形態、色澤。觀察病原菌分生孢子的大小、形態，并做好記錄。

1.5 室內藥劑篩選

供試菌種為分離獲得的病原菌。供試殺菌劑有15種，其藥劑名稱、有效成分、生產單位詳見表1。

1.5.1 試驗方法

采用生長速率法進行測定，在滅菌融化并冷卻到40～50 ℃的9 mL PDA 培養基中加入1 mL藥液，搖勻注入直徑 90 mm的培養皿中制成含毒平板。對照處理加入1 mL滅菌水。每種藥劑按高濃度到低濃度（1×104 mg·L-1、1×103 mg·L-1、1×102 mg·L-1、10 mg·L-1、1 mg·L-1、0.1 mg·L-1）順序，每個處理設3次重復。帶藥平板靜置冷卻后，將試驗前3 d擴繁的根腐病菌平板，用打孔器打成直徑為 8 mm的菌餅置于含藥平板中，每皿3塊菌餅，均勻放置，置于25 ℃恒溫箱中培養，待培養72 h后用十字交叉法測量菌落直徑，并做記錄。

1.5.2 計算方法

根據公式：抑制率（%）=（對照組菌落直徑-處理組菌落直徑）/（對照組菌落直徑-菌碟原始直徑）×100;求出生長抑制率，將其換算成幾率值，藥劑濃度取對數值，建立“濃度對數-幾率值”直線方程，即y=a+bx（y為幾率值，x為稀釋倍數的對數）。進行相關顯著性分析，根據直線回歸方程，當取y=5時，求得的x值的負對數即為EC50的值，比較病原菌對各種藥劑的敏感程度。

2 結果與分析

2.1 病害癥狀描述

該病菌主要為害桔梗根部，發病初期在近地面的根頭部位出現褐色壞死，逐漸向下蔓延，15～20 d即可引起全根壞死，后因腐生菌侵入，導致壞死組織軟腐分解，僅殘留外皮[4];同時地上部莖葉逐漸變黃，此時莖內導管并不變色。當整個肉質根變褐壞死，地上部莖、葉也萎蔫死亡。

2.2 菌種純化培養

用組織分離法獲得純化菌株在PDA培養基上培養，使用時轉至PDA平板培養基上活化。

2.3 致病性測定

用傷口法接種7 d后均開始發病，呈褐色病斑，與自然發病病斑相比顏色較淺。對照莖（根）未見發病，從以上接種的發病莖（根）再分離的病菌與原接種菌株相同，因此證實原接種菌株為致病菌（見圖1）。

2.4 病原菌形態學鑒定

在PDA平板上培養，菌落突起絮狀，菌絲白色質密。菌落初期為白色，后期產生色素，呈粉白色、淺粉色，略帶有紫色。小型分生孢子單細胞，橢圓形至卵圓形，分生孢子大?。?.04～15.93） μm×（1.64～6.06） μm;大型分生孢子鐮刀形，少許彎曲，分生孢子大?。?4.39～44.54） μm×（3.26～7.31） μm，多數為三個隔膜，少數有1～2個隔膜，鑒定為尖孢鐮刀菌（F.oxysporum）（見圖2、圖3）。

2.5 室內藥劑篩選結果

根據供試菌碟在含毒平板上菌落直徑的大小計算抑制率，求得各藥劑對病菌的毒力回歸方程及EC50見表2。由表2可知，300億/g蠟質芽孢桿菌WP、50%多菌靈WP、30%氟菌唑WP對桔梗根腐病菌菌絲生長的抑制效果最好，其EC50值0.000 121、0.205 011、

1.359 245 μg·mL-1;10%氟嗎啉·50%代森錳鋅WP、1×106 cfu/g寡雄腐霉WP、10%苯醚甲環唑WG對桔梗根腐病菌菌絲抑制效果較好，其EC50值分別為5.766 748、6.751 321、8.040 113 μg·mL-1，以上這幾種藥劑是防治桔梗根腐病的首選藥劑;其次10%多抗霉素BWP、40%氟硅唑EC、1億/g枯草芽孢桿菌WP、25%丙環唑EC沒有明顯的抑制效果;250 g·L-1吡唑醚菌酯EC、250 g·L-1嘧菌酯SC、70%代森錳鋅WP、50%嘧菌環胺WG對桔梗根腐病病菌幾乎沒有抑制效果。

3 結論與討論

試驗結果表明，引起桔梗根腐病的病原菌是尖孢鐮刀菌。15種藥劑對桔梗根腐病病菌的室內毒力測定結果表明，300億/g蠟質芽孢桿菌WP、50%多菌靈WP、30%氟菌唑WP對桔梗根腐病菌菌絲生長的抑制效果最好，10%氟嗎啉·50%代森錳鋅WP、1×106 cfu /g寡雄腐霉WP、10%苯醚甲環唑WG對桔梗根腐病菌菌絲的抑制效果較好，以上幾種藥劑可作為桔梗根腐病田間藥效試驗的首選藥劑;而10%多抗霉素BWP、40%氟硅唑EC、1億/g枯草芽孢桿菌WP、25%丙環唑EC沒有明顯的抑制效果，250 g·L-1吡唑醚菌酯EC、250 g·L-1嘧菌酯SC、70%代森錳鋅WP、50%嘧菌環胺WG對桔梗根腐病病菌菌絲幾乎沒有抑制效果。

本試驗結果表明：300億/g蠟質芽孢桿菌WP對桔梗根腐病病菌菌絲生長的抑制效果最好，其相關研究尚未見報道。50%多菌靈WP對桔梗根腐病病菌菌絲抑制效果較好，與朱京斌等用多菌靈蘸根對桔梗根腐病的防治效果很好的研究結果[5]相一致。本研究為殺菌劑的室內毒力測定，還需進行田間藥效試驗來確定藥劑稀釋濃度?！熬G亨一號”“綠亨二號”是目前較先進的新型內吸殺菌劑，性能穩定，安全可靠，是防治土傳病害的理想藥劑，可大面積推廣應用[6]。

筆者認為，本試驗篩選出了300億/g蠟質芽孢桿菌WP是防治桔梗根腐病的首選藥劑，可以在大田試驗中推廣應用。目前，大多數研究者認為多菌靈是防治根腐病的首選藥劑[7-9]。長期使用某種藥劑會使病原菌產生抗藥性，因此藥劑的輪換使用是十分必要的。藥劑防治多少都會對環境造成污染，需要我們繼續研究高效的生物防治技術，以減少對環境的污染。采取一定的農業防治也是有必要的[10]，忌連作，最好是與禾本科作物輪作;要及時防治地下害蟲[11]，因為地下害蟲對植物造成的傷口往往使病菌有機可乘，也是植物發病的主要原因之一。

藥劑對病菌的EC50值并不能完全代表該藥劑的田間防治效果，如果單純根據室內毒力測定結果來判斷殺菌劑的抑菌效果，往往讓室內抑菌效果差的藥劑過早被淘汰，失去進入田間藥效試驗的機會，這與劉峰等的觀點一致[12]，因此需要根據進一步的田間藥效試驗結果來確定理想藥劑。

參考文獻：

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（責任編輯：易 ?婧）