頂空毛細管氣相色譜法測定（R，R）-酒石酸福莫特羅中有機溶劑殘留量

郭俐麟

福莫特羅的（R，R）構型藥理活性是（S，S）構型的1 000倍，并顯示出較少的毒性，單獨使用其支氣管舒張作用是外消旋體活性的兩倍。因此，單獨使用（R，R）-福莫特羅即阿福特羅不僅可以增強作用活性，降低使用劑量，而且還可以減少毒副作用的發生。（R，R）-酒石酸福模特羅為高效的用于慢性阻塞性肺病的藥物，能顯著改善哮喘病人的發病［1-5］。本實驗室在（R，R）-酒石酸福莫特羅原料藥的生產過程中使用了甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲苯等有機溶劑，為了有效的控制產品質量和保證用藥安全，有必要測定藥物中有機溶劑殘留是否符合藥典要求，部分文獻報道了富馬酸福莫特羅有機溶劑殘留［6-7］，而有關酒石酸福莫特羅原料藥的有機溶劑殘留卻未見報道。本研究于2017年1月至2018年5月采用頂空毛細管氣相色譜法［8-21］檢查（R，R）-酒石酸福莫特羅中7 種有機溶劑殘留量，方法準確可靠。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 安捷倫7890A氣相色譜儀，安捷倫G1888 頂空進樣器。甲醇、乙醇、異丙醇為色譜級，二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）為分析純。（R，R）-酒石酸福莫特羅樣品為自制（批號20101118、20101119、20101120）。

1.2 色譜條件 HP-5 毛細管柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm）；載氣為氮氣，流速1.0 mL/min；進樣口溫度為200 ℃，分流比為1∶1；程序升溫，40 ℃下保持8 min，然后以8 ℃/min 的速率升到120 ℃保持5 min。檢測器溫度為250 ℃，氫氣流速30 mL/min，空氣流速300 mL/min，尾吹25 mL/min；進樣體積1 mL。安捷倫G1888頂空進樣器，頂空瓶加熱溫度為100 ℃，定量環110 ℃，傳輸線120 ℃，頂空瓶加熱時間30 min，加壓時間0.2 min，定量環填充時間0.2 min，定量環平衡時間0.05 min，進樣時間1.0 min，頂空瓶體積20 mL。

1.3 對照品溶液的配制 精密稱取甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲苯適量置50 mL量瓶中，加DMF稀釋至刻度，制成每1毫升中含甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲苯分別為120、200、200、26、200、30、36 μg 的對照品溶液。

1.4 供試品溶液的配制 精密稱取供試品（R，R）-酒石酸福莫特羅200 mg，置20 mL 頂空瓶中，加入DMF 5.0 mL，密封，使之溶解即得供試品溶液。

2 結果

2.1 系統專屬性試驗 分別取甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲苯及DMF 適量，在信噪比≥3條件下，取樣5 mL，頂空進樣分析，結果見圖1。出峰順序甲醇（2.636）、乙醇（2.756）、異丙醇（2.877）、二氯甲烷（3.040）、乙酸乙酯（3.621）、四氫呋喃（3.804）、甲苯（6.942）、DMF（8.207）。7 種有機溶劑之間的分離度均大于2，理論塔板數均大于10 000，對稱性好。

2.2 線性與范圍 分別吸取對照品儲備液0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL 于25 mL 量瓶中，用DMF 稀釋至刻度，配成7 個線性濃度（1、2、3、4、5、6、7）。分別吸取各線性下溶液5.0 mL于20 mL 的頂空瓶中，密封，分別進樣分析，測定結果見表1。結果表明乙醇、異丙醇、乙酸乙酯在40.00～400.00 μg/mL 范圍內；甲醇在60.00～240.00 μg/mL 范圍內；二氯甲烷在4.80～48.00 μg/mL 范圍內；四氫呋喃在5.76～57.60 μg/mL 范圍內；甲苯在7.12～71.20 μg/mL范圍內，線性關系良好。

表1 線性關系測定結果

2.3 精密度試驗 按“1.3”項下配制對照品溶液，分別吸取5 mL于20 mL頂空瓶中，密封。依次進樣分析，測定結果見表2。結果表明甲醇、乙醇、異丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲苯6次進樣的峰面積相對標準偏差（RSD）分別為1.55%、1.76%、2.05%、3.66%、1.85%、1.98%、1.57%。數據顯示精密度較好。

表2 精密度試驗結果

2.4 回收率試驗 精密稱取供試品（R，R）-酒石酸福莫特羅2份，每份200 mg，分別置于20 mL頂空瓶中，加入DMF 5.0 mL，密封，使之溶解，作為空白。另外精密稱取供試品（R，R）-酒石酸福莫特羅9 份，每份200 mg，每3份一組，每組分別加線性3、4、5溶液5.0 mL，密封，使之溶解。依次測定，測定結果扣除空白后，計算回收率。結果見表3。

表3 回收率測定結果/%

2.5 定量限和檢測限的測定 分別單獨配置7 種待測有機溶劑溶液，用DMF適當稀釋直到待測有機溶劑的色譜峰峰高是基線噪聲的10 倍，作為定量限，將達定量限的溶液進一步稀釋到待測有機溶劑的色譜峰峰高是基線噪聲的3 倍，作為檢測限。結果顯示，當信噪比約為10時，7種有機溶液濃度分別為：甲醇55.73 μg/mL，乙醇33.98 μg/mL，異丙醇20.50 μg/mL，二氯甲烷2.41 μg/mL，乙酸乙酯35.59 μg/mL，四氫呋喃2.92 μg/mL，甲苯6.58 μg/mL。當信噪比約為3 時，7 種有機溶液濃度分別為：甲醇15.22 μg/mL，乙醇10.14 μg/mL，異丙醇7.29 μg/mL，二氯甲烷0.72 μg/mL，乙酸乙酯10.64 μg/mL，四氫呋喃0.88 μg/mL，甲苯1.98 μg/mL。

2.6 穩定性的考察 精密稱取供試品（R，R）-酒石酸福莫特羅200 mg，置20 mL 頂空瓶中，加入DMF 5.0 mL，密封，溶解，于室溫下分別放置0、1、2、4、6 h，照色譜條件進行測定，均未測出7 種有機溶劑殘留。結果表明，本方法用于測定（R，R）-酒石酸福莫特羅中殘留有機溶液，數據可靠。

2.7 耐用性的考察 考查載氣流速（0.8 mL/min、1.0 mL/min、1.2 mL/min）、進樣口溫度（195 ℃、200 ℃、205 ℃）、檢測器溫度（245 ℃、250 ℃、255 ℃），在不同條件下測得RSD 分別為1.3%、1.9%、1.0%，均未大于2.0%，該方法耐用性良好。

2.8 （R，R）-酒石酸福莫特羅有機溶劑殘留測定按照1.3和1.4的方法配置精制對照品及3批樣品，照色譜法進行測定，精制對照品與3批樣品均未檢出7種殘留有機溶劑，符合人用藥物注冊技術要求國際協調會（ICH）的有機溶劑殘留量研究指導原則標準。

3 討論

3.1 柱溫的選擇 本實驗中7 種待測溶劑在柱溫達到40 ℃時能達到基線分離，但因DMF 的沸點比較高，保留時間比其他溶劑長。故在本實驗中采取了程序升溫的方式加快DMF被載氣帶出，從而使實驗時間縮短。

3.2 溶劑的選擇 本實驗嘗試水作為溶劑，但峰形存在拖尾現象，后采用了DMF，峰形明顯得到改善，分離度良好。

3.3 色譜柱的選擇 在前期實驗中，比較了不同極性的色譜柱，如HP-5、DM-624，四氫呋喃與乙酸乙酯在DM-624毛細管柱上未達到基線分離，最終選擇了能有效分離并測定7種有機溶劑的HP-5色譜柱。

本研究建立了頂空毛細管氣相色譜法測定（R，R）-酒石酸福莫特羅中有機溶劑殘留量的方法，并對三批樣品進行了有機溶劑殘留的測定。該方法靈敏、準確、快捷，經方法學驗證，該方法的專屬性、檢測限、線性與范圍、精密度、回收率等均滿足藥物質量控制的方法學要求，所建立的方法能夠對（R，R）-酒石酸福莫特羅中有機溶劑殘留量進行有效的測定。可為該產品后續的研發等工作提供很好的參考，可作為質量控制的方法，為其他類藥物的有機溶劑殘留的檢測工作提供參考，具有一定實用性。