五味子泡騰片的制備工藝及質量評價

曲中原，朱室儒，姜雪，鄒翔，王欣晨，吳雙，李文蘭

（哈爾濱商業大學藥學院，抗腫瘤天然藥物教育部工程研究中心，黑龍江哈爾濱150076）

五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis（Turcz.）Baill.的干燥成熟果實，主產地在我國的東北地區，因此又稱作“北五味子”[1]。《神農本草經》將其列為上品，應用歷史悠久，具有斂肺、滋腎、生津、收汗、澀精的功效[2]。五味子主要藥效物質為木脂素、萜及有機酸等化合物[3]，現代藥理學研究具有鎮靜催眠、保肝、止咳、免疫調節等作用[4-8]。五味子是一種重要的藥食同源的中藥，已進入衛計委（原衛生部）公布的可用于保健食品的物品名單中[9]。民間常將五味子直接用水浸泡代茶飲[10]，但多未將種仁搗碎或切碎[11]，其果肉中酸味成分溶出較多，而種仁中木脂素類成分不能很好的溶出，以致藥效不能得到很好的體現，限制了其在日常保健領域中的應用。

中藥泡騰片是近些年發展起來的一種較新的中藥劑型，兼有固體制劑和液體制劑的雙重性質，具有服用方便、起效迅速，生物利用度高、口感好，攜帶方便、成本低、患者依從性好等優勢，特別適用于兒童、老年人以及吞服固體制劑困難的患者[12]。本研究在全面提取五味子有效成分的基礎上，以五味子提取物作為主藥，研制一種用于改善睡眠、保肝護肝、增強免疫的泡騰片，為五味子作為一種中藥保健食品的研究與開發提供一種劑型支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

五味子藥材：哈爾濱市三棵樹中藥材專業市場，產地為黑龍江省伊春市，經曲中原教授鑒定為木蘭科植物五味子 Schisandra chinensis（Turcz.）Baill.的干燥成熟果實；五味子對照藥材（批號170922-201809）：中國食品藥品檢定研究院；五味子提取物：哈爾濱商業大學藥學院中藥學研究室自制。將五味子粉碎，按料液比 1 ∶10（g/mL）加入蒸餾水回流提取 2 次，每次 1 h。合并2 次濾液，濃縮干燥制成浸膏粉；五味子醇甲：成都曼思特生物科技有限公司（批號：18031905）；碳酸氫鈉、乳糖：天津市天新精細化工開發中心；檸檬酸：天津市北辰方正試劑廠；甜菊糖苷：晨露添加劑有限公司；聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）6000：天津市致遠化學試劑有限公司；乙腈（色譜純）：德國默克公司；純凈水：廣州屈臣氏有限公司，其余試劑均為分析純。

1.2 儀器與設備

BS110S 電子分析天平：北京賽多利斯天平有限公司；DHG-9140A 電熱恒溫鼓風干燥箱：上海一恒科學儀器有限公司；DP30A 型單沖壓片機：北京國藥龍立科技公司；PHS-3C 型酸度計：上海虹益儀器儀表有限公司；ACQUITY HPLC 色譜儀：美國 Waters 公司；78X-2 型四用測定儀：上海黃浦藥檢儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 五味子泡騰片的制備工藝

采用酸堿分開濕法制粒的方法，依據規定的比例，將五味子浸膏粉分別與檸檬酸（酸源）、碳酸氫鈉（堿源）均勻混合，然后再與甜菊糖苷（甜味劑）、乳糖（填充劑）混合均勻制軟材，過80 目篩，分別制成酸、堿粒，60 ℃烘干。將潤滑劑（PEG 6 000）在 70 ℃恒溫水浴鍋中加熱使其融化，待到熔融狀態時，將酸、堿粒與氯化鈉（引濕劑）迅速倒入其中，并快速攪拌至PEG 6000冷卻，等其充分黏合后進行壓片，即得五味子泡騰片[13]。制粒與壓片過程中打開空調和除濕系統，控制溫度在15 ℃～21 ℃，環境濕度在20%～25%。

1.3.2 五味子泡騰片單因素試驗設計

依照《中國藥典》規定的用量[1]，按每日用量6 g 計算，結合制備的五味子提取物浸膏岀膏率為26%，五味子泡騰片片重為0.5 g，以每日12 片定量，模擬計算后，固定五味子提取物浸膏在處方中的比例為26%。此外，在本制劑中五味子提取物有酸澀味，選擇甜菊糖苷作為甜味劑，起到矯味的作用。試驗前期通過感官評定，當甜菊糖苷質量分數為2%時，泡騰片酸甜適中，口感最佳，故固定甜菊糖苷質量分數為2%。

以泡騰片崩解時限、產氣量、pH 值作為評價指標，考察泡騰崩解劑配比、泡騰崩解劑質量分數、PEG 6 000 質量分數3 個因素對泡騰片質量的影響。泡騰崩解劑配比的篩選：固定泡騰崩解劑質量分數為55%，PEG 6 000 質量分數為5%，甜菊糖苷為2%，選擇檸檬酸：碳酸氫鈉質量比為 1 ∶0.5、1 ∶0.6、1 ∶0.7、1 ∶0.8、1 ∶0.9、1 ∶1，進行單因素試驗；泡騰崩解劑質量分數的篩選：固定檸檬酸與碳酸氫鈉質量比為1 ∶0.7，PEG 6 000 用量為5%，甜菊糖苷為2%，選擇崩解劑質量分數為35%、40%、45%、50%、55%、60%，進行單因素試驗；PEG 6 000 質量分數的篩選：固定檸檬酸與碳酸氫鈉質量比為1 ∶0.7，泡騰崩解劑質量分數為55%，甜菊糖苷為2%，選擇PEG 6 000 質量分數為1%、2%、3%、4%、5%、6%，進行單因素試驗。

1.3.3 正交試驗設計

結合單因素試驗結果，選擇泡騰崩解劑配比、泡騰崩解劑質量分數、PEG 6 000 質量分數3 個因素作為考察對象，以崩解時限為評價指標，對五味子泡騰片的處方進行優化，每個因素選定3 個水平進行L9（34）正交試驗，具體見表1。

表1 正交試驗設計因素水平Table 1 Design factor level of orthogonal experiment

1.3.4 工藝驗證

按“1.3.3”項下優化所得工藝配方制備五味子泡騰片3 批進行工藝驗證。

1.4 五味子泡騰片的質量評價

1.4.1 感官評價

觀察五味子泡騰片表面顏色、光滑度。觀察湯色的澄明度，是否有沉淀。品嘗酸甜是否適中，是否有五味子特有的香味[14-15]。

1.4.2 泡騰片相關指標的測定

1.4.2.1 崩解時限測定

隨機取1 片五味子泡騰片，置25 mL 燒杯（內有20 mL 溫度為20 ℃左右的水）中，應立即有許多氣泡放出，當片劑或碎片周圍的氣體停止逸出時，片劑應完全溶解或分散在水中，無聚集的顆粒剩留，記錄崩解時間。同法檢查6 片，各片均應在5 min 內崩解。如有1 片不能完全崩解，應另取6 片復試，均應符合《中國藥典》相關規定[16]。

1.4.2.2 產氣量測定

采用質量損失法，取泡騰片1 片，研磨，精密稱取片粉質量，置于已經精密稱量質量的含水燒杯中，待其產氣完全，再精密稱定燒杯及溶液的質量，計算CO2的體積（n=6）。

1.4.2.3 pH 值的測定

取泡騰片1 片，分別分散于100 mL 蒸餾水中，測定各溶液的 pH 值（n=6）。

1.4.2.4 片重差異測定

隨機抽取五味子泡騰片20 片，精密稱定總質量，求得平均片重后，再分別精密稱定每片的質量，每片質量與平均片重比較。質量差異限度為±5%，超出片重差異限度的不得多于2 片，并不得有1 片超出限度1 倍[16]。

1.4.2.5 硬度和脆碎度測定

分別取6 片和20 片五味子泡騰片，用吹風機吹去片劑脫落的粉末，精密稱重，利用四用測定儀分別測定泡騰片的徑向硬度和脆碎度，取平均值[10]。

1.4.3 薄層色譜定性鑒別研究

精密稱定五味子醇甲對照品，制成濃度為0.20mg/mL的五味子醇甲對照品溶液。取五味子對照藥材粉末2 g，按料液比 1 ∶10（g/mL）加入20 mL 蒸餾水回流提取1 h，過濾，收集濾液，殘渣加入20 mL 蒸餾水回流提取1 h，過濾，合并濾液，濃縮，干燥，加入乙腈復溶，25 mL容量瓶定容，制得五味子對照藥材溶液。取五味子泡騰片2 片，適量蒸餾水溶解，揮干，浸膏加乙腈復溶，25 mL 容量瓶定容，作為供試品溶液。取不含五味子藥粉的泡騰片1 片，適量蒸餾水溶解，揮干，取浸膏加乙腈復溶，25 mL 容量瓶定容，得陰性對照液。以上溶液均過 0.45 μm 濾膜，備用。

取一個預先制備好的硅膠GF 254 板，點樣。待測樣品依次為五味子醇甲溶液、五味子對照藥材溶液、五味子泡騰片溶液、陰性對照液各2 μL。以石油醚（30 ℃～60 ℃）∶甲酸乙酯 ∶甲酸（體積比 15 ∶5 ∶1）的混合溶液為展開劑進行展開，然后取出晾干。在254 nm紫外光燈下檢視。

1.4.4 高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）測定五味子泡騰片中五味子醇甲含量

1.4.4.1 色譜條件

色譜柱：Sill Green Rp-18 高效液相色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈-水梯度洗脫，0～17 min，50 %乙腈；17 min～25 min，50 %～55 %乙腈；25 min～30 min，55%～75%乙腈；30 min～40 min，75%～65%乙腈；40 min～45 min，65 %乙腈；45 min～50 min，50 %乙腈。流速：1.0 mL/min；檢測波長為254 nm；進樣量為10 μL，柱溫為 35 ℃。

1.4.4.2 對照品溶液和供試品溶液的制備

對照品及供試品溶液制備見“1.4.3”項下，過0.45 μm微孔濾膜，備用。

1.4.4.3 標準曲線的制備

精密量取五味子醇甲對照品溶液 1、2、3、4、5 mL，定容至10 mL 容量瓶中，分別精確進樣10 μL，以峰面積為縱坐標（Y），以濃度為橫坐標（X），繪制標準曲線。得回歸方程為 Y=30 000 000X-209 184，r=0.999 9，五味子醇甲在0.02 mg/mL～0.10 mg/mL 范圍內和峰面積積分值呈良好的線性關系。

1.4.4.4 方法學考察

方法學考察結果顯示儀器的精密度良好（n＝6，RSD 為 1.23%），供試品溶液在 24 h 內穩定（n＝6，RSD為 1.29%），試驗的重復性良好（n＝6，RSD 為 1.17%），平均回收率為（97.21±1.19）%，測定結果準確（n＝6，RSD 為 1.52%）。

1.4.4.5 五味子醇甲的含量測定

按“1.4.4.1”項下色譜條件將五味子醇甲對照品溶液、五味子泡騰片供試品溶液分別精確進樣10 μL，根據樣品中五味子醇甲色譜峰峰面積，以標準曲線計算五味子醇甲的含量。

1.5 數據處理

試驗數據均為3 次重復試驗結果的平均值，結果表示為平均值±標準偏差，采用Origin 9.1 軟件作圖，SPSS 19.0 進行正交試驗數據處理。

2 結果與分析

2.1 單因素試驗優化結果

泡騰崩解劑配比、泡騰崩解劑質量分數、PEG 6000 用量的單因素試驗結果見圖1～圖3。

圖1 泡騰崩解劑配比篩選結果Fig.1 Optimization results of effervescent disintegration

圖2 泡騰崩解劑質量分數篩選結果Fig.2 Experimental results of the mass fraction of effervescent disintegrating agent

圖3 PEG 6000 用量篩選結果Fig.3 Optimization of experimental results of PEG 6000

從圖1～3 中可以看出，當檸檬酸∶碳酸氫鈉質量比為1 ∶0.7 時，泡騰片崩解時限最短，堿源比例過大，泡騰片溶液容易發澀，酸源質量比例過大，pH 值太小，泡騰片溶液口感較酸，也不利口感。綜合考慮，選取崩解劑檸檬酸 ∶碳酸氫鈉的質量比應在 1 ∶0.6～1 ∶0.8 范圍內進行正交試驗；當崩解劑質量分數在55%時，泡騰片崩解時限最短，崩解劑總質量分數對pH 值的影響不大，選取泡騰崩解劑質量分數應在45%～55%范圍內進行正交試驗；在制粒壓片過程中，PEG 6000 用量為1%、2%、3%時制成的顆粒較松散，易造成松片現象，當PEG 6000 用量為6%時，所制備的分散體呈塊狀，研磨不均勻，易造成損失，PEG 6000 用量為5%時，泡騰片崩解時限最短，因此選擇PEG 6000 質量分數應在4%～6%范圍內進行正交試驗。

2.2 正交試驗結果

處方優選的正交試驗結果見表2。

從表2 中可以看出，列出的是各因素對崩解時限的影響為C＜A＜B，最優組合為A2B3C2，因此泡騰崩解劑配比，即檸檬酸∶碳酸氫鈉質量比為1 ∶0.7，崩解劑質量分數為55%，PEG 6000 為5%。

表2 正交試驗設計結果Table 2 Orthogonal experimental design results

2.3 工藝驗證及質量評價結果

3 批五味子泡騰片表面呈扁平藥片狀，顏色淺粉色，光滑。湯色清澈透明，酸甜可口，并伴有五味子特有香氣。工藝驗證試驗結果見表3。

表3 工藝驗證及質量評價結果（n=3）Table 3 Process verification and quality evaluation results（n=3）

從表3 中可以看出，3 批五味子泡騰片的崩解時限為（87.42±1.91）s，泡騰片水溶液的 pH 值為 4.63±0.071，平均片重為（500±20）mg，硬度平均值為（45.1±3.1）N，脆碎度平均值為0.65%，均符合《中國藥典》對于泡騰片的相關要求。

五味子泡騰片薄層色譜鑒別結果如圖4 所示。

從圖4 中可以看出，五味子泡騰片供試品溶液與五味子醇甲對照品和五味子對照藥材相應位置上顯示相同顏色的斑點，陰性對照品溶液無干擾。

采用高效液相色譜法測定五味子泡騰片中五味子醇甲含量，結果如圖5～圖7 所示。

圖4 五味子泡騰片薄層色譜圖Fig.4 Thin layer chromatography identification of Schisandra chinensis effervescent tablets

圖5 五味子醇甲色譜圖Fig.5 Schisandrin high performance liquid chromatogram

圖6 五味子泡騰片色譜圖Fig.6 Schisandra chinensis effervescent tablet high performance liquid chromatogram

圖7 五味子泡騰片陰性對照色譜圖Fig.7 Negative control of Schisandra chinensis effervescent tablet high performance liquid chromatogram

由圖5～圖7 可以看出，五味子泡騰片供試品中五味子醇甲分離度好，陰性對照溶液無干擾，測得每片五味子泡騰片中五味子醇甲的含量為（9.79±0.18）mg。

3 結論

經試驗優化確定五味子泡騰片最佳處方：檸檬酸∶碳酸氫鈉最佳配比為1 ∶0.7（質量比），泡騰崩解劑的最佳質量分數為55%，五味子水提物浸膏質量分數26%，PEG6000 的最佳質量分數為5%，甜菊糖苷2%，氯化鈉2%，乳糖10%。最優工藝條件下制備的泡騰片外觀良好，崩解迅速，溶解后溶液澄清透明，酸甜可口，并伴有五味子特有香氣。平均片重、崩解時限、產氣量、pH 值、硬度和脆碎度均符合藥典規定，每片泡騰片中五味子醇甲的含量為（9.79±0.18）mg。五味子泡騰片制備工藝簡單可行，質量穩定可控。五味子泡騰片具有改善睡眠、增強免疫力、保肝、抗過敏、抗疲勞及延緩衰老等多種保健作用，作為藥食同源的保健品具有良好的市場前景。在今后的研究工作中，本課題組將對五味子泡騰片的藥效學及作用機制方面進行進一步研究。