水朝陽草薄層色譜鑒別方法的建立

徐曉芳　舒娟　石玉梅

【摘 要】 目的：建立水朝陽草的薄層色譜鑒別方法。方法：取本品粉末2g，加石油醚（30～60℃）40 mL，超聲處理20 min，棄去石油醚，藥渣揮干，加稀鹽酸1 mL與乙酸乙酯50 mL，超聲處理40 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取綠原酸、3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸對照品，加甲醇制成每1 mL各含1 mg的溶液，作為對照品溶液。將供試品溶液10 μl、對照品溶液5 μL點于聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（1∶15∶1∶1∶2）的上層溶液為展開劑，展開后，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結果：薄層色譜圖譜檢出綠原酸、3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸，且斑點清晰，專屬性強。結論：該方法可作為水朝陽草的薄層鑒別方法。

【關鍵詞】 水朝陽草; 綠原酸; 3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸; 薄層色譜

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2020）4-0039-03

Establishment of TLC Identification Method of Shui Chaoyang Grass

XU Xiaofang SHU Juan SHI Yumei

Tongren Food and Drug Inspection Institute，Tongren 554300，China

Abstract：Objective To establish a thin-layer chromatographic identification.method for water radiance.Methods? Take 2g of this product powder，add 40 ml of petroleum ether （30～60 ℃），sonicate for 20 minutes，discard petroleum ether，dry the dregs，add 1ml of dilute hydrochloric acid and 50 ml of ethyl acetate，sonicate for 40 minutes，filter After that，the filtrate was evaporated to dryness，and the residue was dissolved in 2 ml of methanol to be dissolved.Another chlorogenic acid，3，5-O-dicaffeoylquinic acid reference substance was added，and methanol was added to make a solution containing 1 mg per 1 ml，which was used as a reference solution.Point 10 UL of test solution and 5 u L of reference solution on polyamide film，and the upper layer solution of toluene-ethyl acetate-formic acid-glacial acetic acid-water （1∶15∶1∶1∶2） was used as a developing solvent.After deployment，the UV lamp （365 nm） is viewed.Results? The obtained thin layer chromatogram showed chlorogenic acid and 3，5-O-dicaffeoylquinic acid，and the spots were clear and the specificity was strong.Conclusion? This method can be used as a thin layer identification method for water sungrass.

Key words：Shui Chaoyang Grass; Chlorogenic Acid; 3，5-o-dicaffeoylquinic acid; TLC

水朝陽草為菊科旋覆花屬植物水朝陽花Inula helianthus-aquatica C.Y.Wu ex Ling.的新鮮或干燥地上部分。夏、秋二季采割，鮮用或干燥[1]。水朝陽草始載于《滇南本草》，《滇南本草》調其“生水內，花朝陽”，故名水朝陽草。菊科旋覆花屬植物中綠原酸有較廣泛的抑菌作用，3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸具有抗炎、抗病毒、抗菌、抗氧化等諸多藥理作用。近年來發現許多有機酸具有多方面的生理活性，如綠原酸、異綠原酸具有很強的抗菌作用[2]。為有效控制水朝陽草藥材質量，本文以綠原酸、3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸為對照，采用薄層色譜法鑒別，操作簡便、結果直觀。

1 儀器與材料

1.1 儀器 KQ-500E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司） ，梅特勒XPE56電子天平。

1.2 材料 綠原酸（批號：110753-200413）、3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸（批號：111782-201204）中國食品藥品檢定研究院。水為純化水，其他試劑為分析純。水朝陽草樣品分別采集自貴州龍里、開陽、清鎮 （見表1），且所有樣品均經貴陽中醫學院何順志教授鑒定。

2 方法與結果

2.1 提取方法的考察 稱取S1樣品2 g 3份，分別按下述方法處理后作為供試品溶液：①加甲醇50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。②加石油醚（30～60 ℃）20 mL，棄去石油醚，藥渣揮干，加乙酸乙酯50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。③加石油醚（30～60 ℃）40 mL，超聲處理20 min，棄去石油醚，藥渣揮干，加稀鹽酸1 mL與乙酸乙酯50 mL，超聲處理40 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。

取上述供試品溶液10 μL、對照品溶液5 μL，點于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（1∶15∶1∶1∶2）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結果：方法①主斑點不清晰; 方法②主斑點不清晰; 方法③主斑點清晰，薄層色譜圖展距適中，故選擇方法③為供試品溶液的制備方法。

2.2 展開劑的考察 取S1樣品按提取方法③制成供試品溶液，取供試品溶液10 uL、對照品溶液各5 μL點于聚酰胺薄膜上，分別在下述展開系統中展開：①甲苯-乙酸乙酯-甲酸（8∶2∶0.5）。②冰醋酸。③甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（1∶15∶1∶1∶2）的上層溶液。展開后，取出晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結果：系統①分離效果差，對照品斑點未顯出; 系統②對照品3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸斑點清晰，但與綠原酸對照品對應斑點未分開，未達到理想的分離效果; 系統③兩個主斑點清晰，分離效果好。因此選擇③為水朝陽草薄層色譜鑒別的展開劑。

2.3 耐用性考察

2.3.1 溫度的考察 進行低溫 （7℃） 、室溫（20℃） 、高溫（40℃） 的考察。結果表明在上述條件下都能較好分離，斑點清晰，未有明顯差異。

2.3.2 濕度的考察進行低濕度（28%） 、中等濕度（58%） 和高濕度（88%）的考察。結果表明在上述條件下都能較好分離，斑點清晰，未有明顯差異。

2.3.3 不同生產廠家聚酰胺薄膜的考察 取S1樣品按提取方法③制成供試品溶液，取供試品溶液10 μL、對照品溶液5 μL點于聚酰胺薄膜上，①為國藥集團化學試劑有限公司生產的聚酰胺薄膜②為浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠生產的聚酰胺薄膜。結果：兩個廠家聚酰胺薄膜都能較好分離，未有明顯差異。

2. 4 水朝陽草的薄層色譜鑒別 取本品粉末2 g，加石油醚（30～60 ℃）40 mL，超聲處理20 min，棄去石油醚，藥渣揮干，加稀鹽酸1 mL與乙酸乙酯50 mL，超聲處理40 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取綠

原酸、3，5-O-二咖啡酰基奎寧酸對照品，加甲醇制成每1 mL各含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗（通則0502），吸取供試品溶液10 μL、對照品溶液5 μL，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（1∶15∶1∶1∶2）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。如圖1所示。

3 討論

水朝陽草具有降氣化痰、祛風除濕功效。主咳嗽痰多，胞悶氣喘，風濕痹痛[3]，用于治療咳嗽痰多，胸悶氣喘，風濕性關節炎和外傷骨折疼痛等，是我國民間常用的中草藥之一。體外癌細胞株篩選實驗證明水朝陽草有抗癌作用，對多種實體癌具有不同程度的抑制作用，對人體肺癌、口腔表皮細胞癌等6種癌細胞具有殺滅作用[4、5]。2003年版《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》收載的水朝陽草只有性狀描述，缺乏必要的質量控制項目。本實驗從提取方法、展開系統考察等方面對水朝陽草進行了系統研究，最終選出上述薄層鑒別方法，在該實驗過程中，同時進行了水朝陽花的薄層研究，該方法同樣適合水朝陽花的薄層鑒別，如圖1所示。該方法分離效果好、專屬性強、斑點清晰，為更好地控制水朝陽草質量提供了科學依據。

參考文獻

[1]貴州省藥品監督管理局編.貴州省中藥材、民族藥材質量標準[M].貴陽：貴州科技出版社，2003：112.

[2]林瑞超.中藥藥品檢驗檢測技術指南[M].北京：人民衛生出版社，2017：82.

[3]《中華本草》編委會.中華本草（第七冊）[M].上海：上海科學技術出版社，1999：870.

[4]胡美英，梁紅，梁紅，等.水朝陽草抗癌化學成分的篩選研究[J].中國民族民間醫藥，1998（6）：43-45.

[5]張人偉，林詠月，戚育芳，等.水朝陽草抗癌化學成分的研究[J].天然產物研究與開發，1998（1）：31-33.

（收稿日期：2019-12-05 編輯：劉 斌）

作者簡介：徐曉芳（1988-），女，漢族，本科，主管藥師，研究方向為中藥及中成藥檢測。E-mail：576367706@qq.com