兩種檢測豬偽狂犬病gB抗體方法比較

張曉亭

（河南省許昌市建安區動物疫病預防控制中心 461000）

豬偽狂犬病 （Pseudorabies） 是由豬偽狂犬病病毒 （Pseudorabies virus，PrV） 引起的可致妊娠母豬流產、種公豬不育、育肥豬生長停滯、仔豬死亡的一種急性傳染病[1]。一旦豬場發生該病，將給養殖戶帶來巨大的經濟損失。目前還沒有有效的方法治療該病，疫苗免疫接種是預防與控制該病的根本措施。而血清抗體水平檢測可以反映出豬群的免疫抗體水平，對豬場免疫程序的制訂具有一定指導意義[2]。目前，國標上推薦的方法依然是ELISA，ELISA 方法具有快速、簡便、特異性好等優點，是當前常用的適合大規模應用的抗體檢測方法。化學發光免疫分析法結合了抗體免疫方法與化學發光技術，其靈敏度更高，已廣泛應用于醫學、環境監測、食品檢測等方面。為了解化學發光免疫分析法在檢測豬偽狂犬病gB 抗體方面的應用價值，本實驗將某國產豬偽狂犬病病毒gB 化學發光抗體檢測試劑盒 （化學發光免疫分析法） 與美國IDEXX 公司生產的豬偽狂犬病病毒gB 抗體ELISA 檢測試劑盒進行比較分析，以期為臨床豬血清樣品豬偽狂犬病gB 抗體的檢測尋找更為簡便、快速且準確的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

河南省某幾個規模化養殖場的豬血清樣品，共計110 份。

1.2 檢測試劑

豬偽狂犬病病毒 gB 抗體檢測試劑盒 （ELISA 法，美國IDEXX）；豬偽狂犬病病毒gB 化學發光抗體檢測試劑盒 （化學發光免疫分析法，國產）。

1.3 儀器設備

酶標儀：美國伯騰儀器有限公司；化學發光免疫分析儀：安圖生物；洗板機：；美國伯騰儀器有限公司；培養箱：德國愛安姆 （北京） 科技有限公司；100 ul 微量移液槍、100 ul 多道移液槍：Eppendorf。

1.4 實驗方法

1.4.1 樣品預篩

用美國產豬偽狂犬病病毒gB 抗體檢測試劑盒 （ELISA 法）預篩選本實驗室所收集的豬血清樣品，根據實驗檢測結果篩選出陽性樣品 58 份，陰性樣品 52 份，共計 110 份。

1.4.2 化學發光方法檢測

對預篩選出的110 份豬血清用豬偽狂犬病病毒gB 化學發光抗體檢測試劑盒 （化學發光免疫分析法） 進行檢測。檢測操作及結果判定均按照試劑盒說明書進行操作與判定。

1.5 數據分析

將化學發光免疫分析法的檢測結果與ELISA 法的檢測結果進行比對分析。（1） 以 ELISA 法的檢測結果作為標準，計算化學發光免疫分析法的特異性、靈敏性、符合率；（2） 應用Kappa 檢驗判定兩個實驗方法結果的一致性。Kappa>0.8，表明一致性極高；0.60

2 結果

2.1 檢測結果

附表 ELISA 法與化學發光免疫分析法檢測豬偽狂犬病gB 抗體的檢測結果

2.2 方法效能評價

以ELISA 法為標準，根據附表的結果計算得出化學發光免疫分析法的靈敏度為 98.31%、特異性為 100%、符合率為99.10%。

2.3 一致性結果

以ELISA 法作為標準，將化學發光免疫分析法的檢測結果與之進行Kappa 檢驗，得出化學發光免疫分析法的 Kappa 為0.96，表明兩種實驗方法的檢測結果高度一致。

3 討論

國外對化學發光的大量研究始于20 世紀初，至20 世紀60年代，隨著現代電子技術與高靈敏度光傳感器的發展，其作為一種分析方法得到迅速發展。我國化學發光方法的研究始于20世紀80 年代初期，目前該項技術已廣泛應用于有機、冶金、藥物、臨床醫學檢驗、食品檢驗、生命科學、材料科學、環境監測等各個領域。但卻少有化學發光技術在動物疫病防控中關于臨床血清樣品抗體檢測的報道。

本文檢測豬偽狂犬病gB 抗體的化學發光免疫分析法是一種采用競爭反應原理，包被重組蛋白，通過檢測發光信號值，校準曲線擬合計算，得出待檢血清樣品抗體量的方法。相比于傳統ELISA 方法檢測豬偽狂犬病gB 抗體，化學發光免疫分析法用時更短，操作更加簡便。本試驗結果表明，在檢測豬偽狂犬病gB 抗體方面，與ELISA 方法相比，化學發光免疫分析法的敏感性、特異性、符合率均較高。以ELISA 法為標準計算的化學發光免疫分析法的Kappa 為0.96，說明兩種實驗方法的檢測結果高度一致。這說明，可將化學發光免疫分析法應用于臨床血清樣品豬偽狂犬病gB 抗體的檢測。