急性上呼吸道感染性疾病患兒血清中PU.1、IL-4表達及其臨床診斷價值

郭朝金，軒妍

兒童急性上呼吸道感染性疾病是由真菌、支原體、病毒、細菌等多種病原菌引發的一種炎癥性疾病。兒童由于免疫力較弱，屬于易感人群。如不及時診治，常引發鼻咽部感染，導致血行傳播，進而引發不同程度的并發癥。故快速、早期診斷，給予針對性治療措施是臨床治療及改善患兒預后的關鍵。目前，體格及病史檢查結合外周血細胞技術為臨床診斷兒童急性上呼吸道感染的常用手段。亦有研究顯示，新型的炎癥標志物可在一定程度上提高該病診療水平［1-2］。PU.1為Est家族最重要的一種轉錄因子，能夠對Th9細胞表型進行特異性增強，且是Th9細胞分化所必需的轉錄因子，而Th9細胞可分泌促炎細胞因子，進而引發炎癥，促進疾病進展［3-4］。白細胞介素4（interleukin-4，IL-4）作為一種炎性因子，可介導免疫，促進IgE分泌，在感染性疾病中呈異常表達，敏感度較高［5-6］。但是目前探究急性上呼吸道感染性疾病患兒血清中PU.1和IL-4表達的研究相對較少，仍處于初始研究階段。本研究對急性上呼吸道感染性疾病患兒血清PU.1和IL-4表達進行分析并探究其臨床診斷價值，為臨床早期干預提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年7月—2021年7月在本院接受治療的急性上呼吸道感染疾病患兒78例作為疾病組，并選取同期體檢的健康兒童78例作為對照組。納入標準：（1）疾病組患兒均符合《內科學》［7］中急性上呼吸道感染性疾病診斷標準。（2）患兒家屬配合本研究。（3）疾病組患兒檢查前1 d未服用抗生素治療。排除標準：（1）合并內分泌系統、免疫系統疾病。（2）同時參與其他臨床研究。（3）合并肝腎功能障礙。（4）合并其他炎癥性疾病。本研究經倫理委員會批準，患兒家長對本研究內容知情并簽署同意書。

1.2 方法 抽取患者清晨空腹靜脈血3 mL，常溫下靜置1 h，以3 000 r/min離心15 min。取血清，將其置于-80℃冰箱內保存。以熒光定量PCR檢測血清PU.1相對表達量，具體操作步驟按照說明書嚴格進行，試劑盒購自HaiGene公司。以酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清IL-4、IL-6、C-反應蛋白（CRP）、降鈣素原（PCT）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）水平，試劑盒購自江蘇江萊生物科技有限公司。

1.3 統計學方法 使用SPSS 22.0軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差（±s）描述，組間比較采用t檢驗；計數資料以例（%）表示，行χ2檢驗。通過繪制受試者工作特征（ROC）曲線評估血清IL-4、PU.1表達用于診斷上呼吸道感染性疾病的診斷價值。多因素Logistic回歸分析上呼吸道感染性疾病發生的危險因素。以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2組一般資料比較2組年齡、性別比較差異無統計學意義（P＞0.05），疾病組患兒血清IL-6、CRP、PCT、TNF-α水平明顯高于對照組（P＜0.01）。見表1。

Tab.1 Comparison of general data between the two groups表1 2組一般資料比較 （n=78）

2.2 血清IL-4水平及PU.1相對表達量 疾病組血清IL-4水平及PU.1相對表達量均明顯高于對照組（P＜0.05）。見表2。

Tab.2 Comparison of serum IL-4 level and relative expression of PU.1 between the two groups表2 2組血清IL-4水平及PU.1相對表達量比較（±s）

Tab.2 Comparison of serum IL-4 level and relative expression of PU.1 between the two groups表2 2組血清IL-4水平及PU.1相對表達量比較（±s）

＊＊P＜0.01。

組別對照組疾病組t n 78 78 IL-4（ng/L）6.74±1.78 8.43±1.78 5.937＊＊PU.1 0.74±0.12 0.82±0.18 3.127＊＊

2.3 IL-4及PU.1對急性上呼吸道感染性疾病的診斷價值 繪制ROC曲線評估血清IL-4水平、PU.1相對表達量及聯合檢測用于診斷上呼吸道感染性疾病患兒的價值顯示，兩者聯合檢測價值更高。見圖1、表3。

Fig.1 ROC curve of the relative expression of serum IL-4 and PU.1 in the diagnosis of upper respiratory tract infectious diseases圖1血清IL-4及PU.1相對表達量診斷上呼吸道感染性疾病的ROC曲線

Tab.3 Diagnostic value of serum IL-4 and PU.1 for upper respiratory tract infectious diseases表3血清IL-4及PU.1對上呼吸道感染性疾病的診斷價值

2.4 上呼吸道感染性疾病發生的影響因素 以是否發生上呼吸道感染性疾病為因變量（是=1，否=0），血清IL-4、PU.1、IL-6、CRP、PCT、TNF-α表達水平為自變量行多因素Logistic回歸分析。結果顯示，血清IL-4、PU.1、IL-6、CRP、TNF-α水平升高為影響上呼吸道感染性疾病發生的獨立危險因素（P＜0.05）。見表4。

Tab.4 Multivariate Logistic analysis of factors affecting the occurrence of upper respiratory tract infectious diseases表4多因素Logistic回歸分析上呼吸道感染性疾病發生的影響因素

3 討論

上呼吸道感染性疾病為臨床常見的兒科疾病，可發生于一年四季，多發于冬春季節及氣溫驟變時［8］。若不能及時防治，該病可引發多個器官感染，導致肺炎、氣管炎、咽喉腫脹及中耳炎等疾病發生，嚴重影響患兒健康，因此，早期診斷并給予防治在臨床中具有重要價值。

3.1 炎性因子在上呼吸道感染性疾病中的作用PCT主要由甲狀腺C細胞分泌，為前體激素，可作為細菌感染的診斷標志物，能夠預測急性上呼吸道感染病情［9］。CRP在組織受到損傷或機體發生細菌感染時水平明顯上升，而且CRP水平的上升不受免疫功能、性別及年齡等因素的干擾，也不受免疫抑制劑或各種藥物的干擾，為診斷急性上呼吸道感染的重要標志物［10］。IL-6為典型的炎性因子，也是臨床診斷上呼吸道感染性疾病的常用指標［11］。TNF-α為重要的炎癥介質，主要由巨噬細胞分泌，感染性疾病發生時其水平明顯升高［12］。本研究對急性上呼吸道感染性疾病患兒及體檢健康兒童以上指標進行檢測分析，結果顯示，疾病組患兒血清IL-6、CRP、PCT、TNF-α水平明顯高于對照組，與陳娟等［13-14］研究基本一致。提示炎性因子參與上呼吸道感染性疾病的發生。

3.2 血清IL-4水平對上呼吸道感染性疾病的診斷價值 以往多需進行細菌培養、病毒分離及病毒血清學檢查等方法才能確定上呼吸道感染病原體，易延誤確診時間。引入新的血清學指標有利于臨床早期診斷及治療上呼吸道感染患者［15］。因此，本研究通過檢測血清學指標，以期為臨床診斷上呼吸道感染性疾病提供參考。IL-4主要由T淋巴細胞產生，可提升T淋巴細胞活性，促進B細胞分裂增殖，還能夠分泌IgE，促進肥大細胞增殖［16］。Saggini等［17］研究顯示，中耳炎患者IL-4水平明顯升高，IL-4可參與炎癥反應的發生。本研究通過對上呼吸道感染性疾病患兒血清IL-4水平進行檢測，結果顯示，疾病組血清IL-4水平明顯高于對照組，與Saggini等［17］研究類似，推測IgE通過與肥大細胞的特異性結合，導致大量生物活性物質（白三烯、組胺等）的合成與釋放，促使機體增加呼吸道黏液分泌量，從而增加上呼吸道感染性疾病的發生風險。ROC曲線分析發現，血清IL-4水平為臨床診斷上呼吸道感染性疾病的有效指標，提示檢測IL-4水平對早期判斷上呼吸道感染性疾病的發生有積極意義。

3.3 血清PU.1水平對上呼吸道感染性疾病的診斷價值 轉錄因子PU.1是Est家族中的一員，能夠活化炎癥相關的部分受體及相關細胞因子［18］。張明海等［19］研究顯示，PU.1可直接結合IL-9基因啟動子，誘導IL-9的表達，進而促進炎癥反應的發生。郭錦均等［20］研究顯示，PU.1在膿毒癥患兒中呈高表達，與患兒預后關系密切。本研究中，疾病組血清PU.1相對表達量較對照組高，推測PU.1可能通過調控炎性因子IL-4、TNF-α等參與上呼吸道感染性疾病的發生，具體機制需深入探討。ROC曲線結果顯示，PU.1用于疾病診斷有一定的價值，且血清PU.1、IL-4聯合檢測診斷上呼吸道感染性疾病的效果更好。另外，多因素Logistic回歸分析結果顯示，血清IL-4、PU.1、IL-6、CRP、TNF-α表達水平為上呼吸道感染性疾病發生的獨立影響因素。這也提示當患兒上述因子水平升高時應加強監測，同時與臨床癥狀相結合進行診斷，及早干預，以改善患兒預后。

綜上所述，急性上呼吸道感染性疾病患兒血清中PU.1、IL-4、IL-6、CRP、PCT、TNF-α表達水平較高，檢測血清中PU.1、IL-4水平可能有助于輔助診斷急性上呼吸道感染性疾病。