精液稀釋液的配制及檢測

吳德標

（江蘇省鹽城市鹽都區家畜改良站，江蘇 鹽城 224056）

豬精液稀釋液的質量關系到豬精子的體外存活時間。在授精環節中豬精液稀釋液的配制、消毒及檢測工作都影響著授精效果。

1 配方與藥品

葡萄糖—檸檬酸鈉液是一種較簡單的稀釋液配方。配置稀釋液的藥物原料要純凈，盡可能選用化學純和分析純制劑。

1.1 葡萄糖 葡萄糖補充精子代謝過程中消耗的能量。精子代謝是單純的分解作用，只能利用簡單的能量物質，葡萄糖即是其中之一。配制精液稀釋液以用注射用葡萄糖為好，比例占5%～6%。

1.2 檸檬酸鈉 檸檬酸鈉是緩沖物質，用于維持精液相對恒定的pH 值，避免精子代謝產物影響精液品質。市售品有檸檬酸三鈉或枸櫞酸鈉，本品用量較小，以用分析純為好，比例占0.3%～0.5%。

1.3 乙二胺四乙酸二鈉 本品有保護精子抗冷休克的作用，能改變精子細胞膜的通透力，降低精子的果糖分解，抑制精子的活動，延長精子的壽命，同時它也是一種螯合劑，可使精液稀釋液所含不利于精子存活的一些金屬離子變成穩定的絡合物，減少對精子的傷害。本品以用分析純為好，比例占0.1%。

1.4 水 宜用純凈、新鮮的蒸餾水，水質決定稀釋液的質量。蒸餾水可自制，要符合藥典標準。

1.5 抗生素 精液難免被細菌等有害微生物污染，因此稀釋時須加入抗菌物質抑制有害微生物生長繁殖。實踐證明慶大霉素能抑制細菌，且對精子無傷害，用量為1萬國際單位/100 mL。

2 藥物稱量和溶解

配置稀釋液用天平稱取藥品，用量杯量取水。需注意的是稱、量一定要準確，所有藥品必須充分溶解，特別是乙二胺四乙酸二鈉和檸檬酸鈉等較難溶解的藥品。

配制分兩步進行，第一步將所稱藥品放入錐形瓶內，加入適量蒸餾水后加熱使之充分溶解；第二步再加入蒸餾水定容到所需量，并充分攪拌。配置好的稀釋液須過濾掉所有雜質。

3 稀釋液消毒

稀釋液是一種培養基，配置好的稀釋液必須嚴格滅菌，可采用高壓消毒鍋對稀釋液進行消毒滅菌。

滅菌時將稀釋液裝入500 mL潔凈的鹽水瓶，塞上瓶塞并用紗布包裹扎緊，再放入鍋內，蓋上鍋蓋，擰緊環狀壓蓋螺帽，關閉放氣閥，接通電源加熱。當壓力升到0.3 kg/cm2時打開放氣閥，放出高壓鍋內冷氣，讓指針回落到零位，然后再關閉放氣閥，繼續加熱。當壓力重新上升到0.7 kg/cm2時，鍋內溫度已達到115 ℃，可控制電源開關維持鍋內的壓力和溫度，使恒溫恒壓維持半小時，然后打開放氣閥緩慢放氣，使指針回落到零位，最后打開鍋蓋，取出稀釋液冷卻備用。

4 稀釋液檢測

消毒稀釋液檢測合格后方能使用。檢測方法有二種：

4.1 pH 值測定 稀釋液pH 值的變化對精子的活力和代謝有很大影響。18～20 ℃條件下，pH值為6.4 的精子處于可逆的“休眠”狀態，所以稀釋液的pH值宜在6.4～6.5之間。

稀釋液pH值應在稀釋液消毒后溫度降至室溫時測定。可用pH 6～8的精密試紙測定稀釋液pH值，稀釋液滴在試紙上半秒鐘內與標準比色板比較，得出pH值。有條件的可用酸度計測定，用酸度計測定時要注意校正溫度并正確進行酸度計的標定，以免引起誤差。

4.2 滲透壓測定 通常要求稀釋液與精液保持等滲，滲透異常會影響精子的代謝和活力，低滲比高滲的危害大。

用貝克曼溫度計（示差溫度計）來測定稀釋液的冰點下降度（△t），再除以常數1.86，計算出克分子濃度（即滲透壓）。純水在0 ℃開始結冰，0 ℃是純水的冰點，但水中溶有其他物質時，其在0 ℃以下的某個溫度開始結冰，隨溶質濃度升高，結冰的溫度逐步降低，純水冰點與溶液冰點的差為冰點下降度，常用“△t”表示。

用貝克曼溫度計測定豬精液稀釋液滲透壓的操作步驟如下：

4.2.1 器材準備 需準備的器材有貝克曼溫度計，滴定臺，1 000 mL 量杯，冰若干，粗鹽若干，鐵絲圈，20×15試管若干支。

4.2.2 溫度計調整 貝克曼溫度計是長56 cm 的玻璃管制成的，玻璃內部上下各有一個水銀泡，中間有0～5 的刻度，每一刻度又分成100 等份，上端水銀泡為—U狀細管，內有貯備水銀，通過球狀閥與下端水銀泡相通，以便調節下端水銀泡水銀的多少。

調整時手握溫度計，使溫度計傾斜呈倒置狀態，同時轉動溫度計，使U型管中的水銀與溫度計頂端的球形閥相接，然后另一手握住下端水銀泡（溫度計處于倒置狀態，此時下端水銀泡在上方），借助手溫使水銀柱上升并通過球形閥與U型管中的貯備水銀接通。水銀的多少調節好后，左手握溫度計的上部，右手中指輕擊溫度計，使U型管中的水銀與球狀閥連接點斷開。

4.2.3 溫度計安裝 溫度計調整好后固定在滴定架上。溫度計的下方裝有一個可以上下移動的1 000 mL量杯，量杯中放置冰塊，冰塊上撒些粗鹽，將20×15試管置于冰塊中待用。

4.2.4 測定純水冰點 試管中加入待測的蒸餾水，水量以能浸沒溫度計下端水銀泡為度。將鐵絲圈放入試管中，并將溫度計下端水銀泡插入試管的水中浸沒。隨后用鐵絲圈上下攪動試管中的蒸餾水，使溫度均勻下降。

溶液結冰的瞬間會釋放出能量，因此，當試管中的水開始結冰時，水銀柱會停止下降而突然上升。水銀柱停留在某一刻度不再上升時，讀取的數值即為純水的冰點。

貝克曼溫度計上的刻度不是實際溫度，而是所測溶液冰點的相對刻度值（即貝克曼溫度計零點），而其零點與下端水銀泡中的水銀多少有關，所以每進行一批次測定都要重新調整溫度計。連續測定三次純水冰點，讀數末位之差不超過3時，取其平均值，超過3時應重做。

4.2.5 測定精液與稀釋液 測得純水冰點后，進行稀釋液（或精液）的測定，測定方法同上。測定完畢取出貝克曼溫度計時，往往試管中的溶液已結冰，此時要待冰融化后再將溫度計取出，切勿硬拉。每測完一種溶液后，需將溫度計下端擦拭干凈，所用試管應先用被測溶液沖洗一下，以免影響測定結果。貝克曼溫度計使用完畢，應擦拭干凈并倒置，使下端水銀泡中的水銀向U型管中回流一些，然后置盒中保存。

4.2.6 計算冰點下降度 純水三次冰點平均值：t，所測溶液三次冰點平均值：t′，冰點下降度△t＝t-t′。