膚陰凈洗劑揮發油提取工藝的研究

藍曉步，許崇遙，董思喆，周 剛，梁穎娥，黃興振

（1.南寧市第一人民醫院藥學部，南寧，530022；2.廣西醫科大學藥學院，南寧，530022）

膚陰凈洗劑是南寧市第一人民醫院根據婦科陰部炎癥的病因和治療原則制定的一種中草藥制劑，主要含有苦參、小葉桉、黃柏、蛇床子、白鮮皮、蒼術、薄荷腦、艾葉等，洗劑工藝為先提取揮發油，再水提醇沉最后而得到。臨床證實膚陰凈洗劑具有清熱解毒，殺蟲止癢，祛風除濕等功效，被廣泛應用于陰道炎、外陰瘙癢、濕疹、體股癬、痱子等。為進一步實現膚陰凈陰凈洗劑的產業化，在不對原生產工藝進行質的改變的前提下，逐步完善細化工藝參數。而提取揮發油作為膚陰凈洗劑制備工藝的關鍵，其中含揮發油成分的藥材小葉桉、蒼術、蛇床子及艾葉，為了后續產業化關鍵技術開展研究，本實驗進行了膚陰凈洗劑揮發油最佳提取工藝條件的優選。

1 相關材料

1.1 藥材及相關材料

蒼術、蛇床子、艾葉（南寧生源中藥飲片有限責任公司），執行標準：《中國藥典》2015年版一部。從吳圩采摘的小葉桉經過廣西醫科大學中藥學教研室老師鑒別確定為小葉桉。對照品：桉油精（成都德思特生物技術有限公司）。色譜純乙腈（成都市科隆化學品有限公司）

1.2 實驗條件

色譜條件：色譜柱：Dikma Kromasil C18（250 mm×4.5 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（64:36）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：203 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：1 μL。

1.3 相關溶液

①實驗溶液：精密稱取L9（34）正交表所得揮發油50 mg作為供試品，置于10 mL棕色容量瓶中，加入色譜乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。②對照品溶液：稱取桉油精對照品適量，精密稱定，置于10 mL容量瓶中，加色譜乙腈至刻度，搖勻，成濃度為3.018 mg/mL的溶液。

2 揮發油提取工藝

2.1 高效液相線性關系考察

取配置好的桉油精對照品溶液（3.018 mg/ml）按照“1.5”項下色譜條件進樣，進樣體積分別為4 μl，5 μl，6 μl，7 μl，8 μl，9 μl，10 μl，記錄揮發油中桉油精的峰面積。以桉油精峰面積Y對進樣濃度進行線性回歸，得到回歸方程為：Y=83764X+15.798，r=0.9999。

2.2 精密度試驗

取配好的桉油精對照品溶液（2.113mg/ml），高效液相連續進樣6次，數據顯示6次測定出提取揮發油中桉油精峰面積的RSD為0.84%。

2.3 重復性試驗

取同批供試品，按照“1.6”項下制備6份供試品溶液，分別進樣分析，記錄峰面積，結果RSD值為0.67%，表明提取重復性好。

2.4 穩定性試驗

取配好的揮發油供試品溶液，制備后0、4、6、8小時進樣測定提取揮發油中桉油精的峰面積，結果0到8小時的桉油精鋒面積的RSD值為1.8%，說明供試品溶液在8小時內穩定。

2.5 揮發油提取時間的選擇

小葉桉、蒼術、蛇床子、艾葉的主要有效成分為揮發油，本發明采用原工藝水蒸氣蒸餾法提取揮發油，并以正交試驗法L9（34）進行試驗研究，篩選揮發油最佳提取工藝。

按照膚陰凈洗劑處方量的3/10稱取小葉桉150份，蒼術30份，以及艾葉和蛇床子各22.5份，加入12倍水，浸泡時間為1小時，進行水蒸氣蒸餾，記錄4到8小時不同提取時間的揮發油量，并計算提取率，研究對揮發油提取率變化的影響。結果見表1：

表1 不同提取時間揮發油的提取率

結果表明，揮發油的提取率首先隨著時間增加逐漸變大，6小時提取的揮發油的提取率最高為1.023%，4小時是0.976%，然后隨著提取時間變長揮發油的提取率相應減少，產出的揮發油的顏色由開始的淡黃色加深為金黃色，并且提取時間超過6小時后容易焦鍋，影響產品質量，為了保證收油率和產品質量，提取時間選定的上限為4小時，下限為6小時。

2.6 揮發油提取的正交試驗

2.6.1 按照處方膚陰凈洗劑中含揮發油的4位藥材處方量的3/10稱取，即小葉桉150份，蒼術30份，艾葉和蛇床子各22.5份，然后加水浸泡1小時后開始進行水蒸氣蒸餾，提取4位藥材所含總的揮發油，量取揮發油體積，計算揮發油提取率，同時按照“1.6”項測定揮發油中桉油精的含量，并計算各試驗號中揮發油中桉油精的總量。按L9（34）正交設計表進行以下試驗（見表2），考察以下三個因素A（加水倍數）、B（浸泡時間）、C（提取時間）對提取的影響，以揮發油提取率和桉油精量為評價指標，篩選出揮發油提取最佳工藝條件。

2.6.2 正交試驗結果 本實驗以揮發油提取率和桉油精量為評價指標，講兩者的權重系數定為50%和50%，結果見表3。方差分析的結果見表4，影響提取效果的主次因素順序為：A＞C＞B。結合正交分析結果和生產實際，最優方案為加14倍水，浸1 h，提取時間6 h，即A3B2C3。

表2 揮發油提取工藝的因素和水平表

表3 揮發油提取工藝正交試驗結果

表4 揮發油提取工藝正交實驗方差分析表

2.6.3 驗證試驗 為了驗證工藝的穩定性，按篩選的最佳提取工藝提取3次，結果見表5.驗證結果表明，所篩選的提取工藝條件穩定可行。

表5 驗證試驗結果

3 討 論

水蒸氣蒸餾法是目前實驗室最常見的揮發油提取方法[1]，具有設備簡單，容易操作，成本便宜等優點。在膚陰凈洗劑工藝提取揮發油步驟過程中藥材要注意控制干燥程度，尤其小葉桉藥材的干燥程度盡量保持水分含量在5 %左右提取揮發油的量才能保持一定的穩定并且要時刻注意提取溫度，不要過高，玻璃儀器要洗凈，否則提取出的揮發油會變少顏色變金黃色，嚴重影響揮發油質量。

本研究發現加水倍數對于揮發油提取的量提高有顯著意義，但是因素B、因素C對揮發油提取的量提高沒有顯著意義。在桉油精含量實驗結果中表明在一定程度和結果上上，選擇A1、B1、C1三個條件能使提取的揮發油中桉油精的含量提高。

膚陰凈洗劑制備工藝中揮發油提取的最佳工藝條件為A3B2C3，即加水倍數為14 倍水，浸泡時間為1 小時，提取時間為6 小時，最后的揮發油量以及所含的桉油精的量相比較最好。