茶多酚對牙齒的著色效果觀察

金晨曦 陳偉亮 陳肖伊 沈振宇 鄭沛

茶多酚又名茶單寧、茶鞣質，是一類存在于茶葉中的多羥基酚性化合物，包括兒茶素、黃酮醇、酚酸和縮酚酸類以及其他多酚類。茶多酚具有抗氧化、抗腫瘤、抗動脈粥樣硬化、抗齲護齒、抑菌等多種藥理作用，逐漸被應用于口腔疾病的防治[1]。例如，茶多酚與維生素C聯合應用可治療口源性口臭；根管充填材料加入茶多酚能抑制白色念珠菌生物膜的生成；茶多酚可作為治療慢性牙周炎的輔助用藥等。飲茶雖然有益健康，但是茶湯中的茶色素易沉積于牙齒的表面，引起牙外源性著色，進而影響牙面的美觀，影響患者的社交和心理。那么，茶多酚應用于牙科領域是否會引起牙齒染色這一隱患，目前似乎并沒有明確的結論。本研究利用影像證據來確定牙齒表面顏色變化情況，以研究茶多酚是否存在染色牙齒的能力，探討其應用于牙科領域的可行性，現報道如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 牙齒準備 選取新鮮拔除的牛切牙24顆，牙冠釉質面平均長寬比為2.5。每顆牙的唇面釉質使用2 000目砂紙、金相試樣磨拋機（中國蔚儀公司，型號：M-1）拋光處理；使用體式顯微鏡（中國速邁公司，型號：OMS2350）觀察，確保牙表面平整，對光反射均勻，避免過度拋光而使牙本質暴露。牙齒準備好后于0.9%氯化鈉溶液中浸泡保存。

1.1.2 溶液配制 茶多酚溶液：用茶葉濃縮粉（杭州怡倍嘉茶業科技有限公司，茶多酚含量為98.37%）與純凈水分別配制濃度為1、2.5、5和7.5mg·ml-1的茶多酚溶液，配置過程中避免發生氧化反應。溶液配置前充分清洗實驗器皿達到洗滌標準，配置過程在較暗環境中進行，輕揉攪拌，盡量縮短配置時間，得到澄清透明溶液后倒入廣口瓶中避光保存于4℃冰箱中。

1.2 方法

1.2.1 分組、切牙與浸泡 將牙齒分為A、B、C、D 4組，每組 6顆，準備分別浸泡于 1、2.5、5和 7.5mg·ml-1的茶多酚實驗溶液中。每顆牙以英文字母+數字的方式命名，如A1表示浸泡于1mg·ml-1茶多酚溶液的第1顆牙，C2表示浸泡于5mg·ml-1茶多酚溶液的第2顆牙。用硬組織切片機（美國標樂公司，型號：IsoMet）將每顆牙縱向切為兩半，切面使用自酸蝕粘接劑（美國登士柏公司，型號：XENO-V Plus）進行牙本質封閉。左半部分為實驗側，浸泡于實驗溶液中，右半部分為對照側，浸泡于純凈水中（水溫均為37℃恒溫）。組別標記見圖1。

圖1 組別標記圖

1.2.2 顏色變化記錄 實驗過程中，在保留表面水分即避免脫水的前提下，每隔30min取出牙齒并在30s之內拍攝照片1次，共8次。采用閃光燈作為照明光源，雙側45°對稱照明。拍攝環境由黑色亞克力板和黑色絨布組合，實現拍攝環境的最低反射干擾。使用照相機（日本佳能公司，型號：700D）的原始格式及標準灰卡校準，共同確保影像的采集和還原結果的一致性。拍照時將同一顆牙齒的左右兩半合并同時拍攝，以方便軟件對照分析。

1.2.3 顏色對比分析 本研究采用口腔醫學最常用的國際照明委員會1976 L*a*b*標準色度系統。其中L*代表明度，a*表示紅綠色相，b*表示黃藍色相。色差ΔE*ab=（[ΔL*）2+（Δa*）2+（Δb*）2]1/2。色差ΔE*ab是用數量來描述的兩種顏色之間的差別，ΔE*ab值越大表明顏色的差異越明顯。本研究以色差值ΔE*ab＞2.3視為肉眼可見的顏色差異，反之則無顏色差異。

1.3 觀察指標 （1）肉眼觀察牙齒浸泡后顏色的變化；（2）觀察并比較A、B、C、D組牙齒浸泡后左右兩側色差；（3）分析牙齒著色程度與茶多酚浸泡時間的相關性；（4）分析牙齒著色程度與茶多酚溶液濃度的相關性。

1.4 統計學處理 采用SPSS 19.0統計軟件。計量資料以表示，組內比較采用重復測量數據的方差分析，組間比較采用單因素分析方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。相關性分析采用Spearman秩相關。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 牙齒顏色變化的肉眼觀察 從各組選擇有代表性的牙齒照片見圖2（插頁）。

圖2 各組牙齒顏色變化的肉眼觀察可見

由圖2可見，A、B、C、D組牙齒左側對比右側，均出現了肉眼可見的釉質著色。

2.2 4 組牙齒浸泡后左右兩側色差比較 見表1。

由表1可見，組內比較，A、B、C、D組牙齒不同浸泡時間左右兩側色差比較差異均有統計學意義（均P＜0.05）。隨著浸泡時間的延長，A、B組牙齒左右兩側在第3次拍攝時出現肉眼可見的色差，C、D組牙齒左右兩側分別在第2、1次拍攝時出現肉眼可見的色差。組間比較，各時間點4組牙齒浸泡后左右兩側色差比較差異均有統計學意義（均P＜0.05）。

2.3 A、B、C、D組牙齒著色程度與茶多酚浸泡時間的相關性分析 A、B、D組牙齒著色程度與茶多酚浸泡時間呈正相關（r=0.684、0.742、0.783，均 P＜0.05），即浸泡時間越長，著色越深。但C組牙齒著色程度與茶多酚浸泡時間無相關性（r=0.314，P＞0.05）。

2.4 不同浸泡時間下牙齒著色程度與茶多酚溶液濃度的相關性分析 浸泡于不同濃度茶多酚溶液的A、B、C、D 組牙齒，除第 4、7 次（r=0.216、0.195）外，其余每次（r=0.895、0.873、0.882、0.583、0.748、0.875）的牙齒著色程度與茶多酚溶液濃度均呈正相關（均P＜0.05），即濃度越高，牙齒著色程度越深。

表1 4組牙齒浸泡后左右兩側色差比較（ΔE*ab）

3 討論

天然牛牙的釉質在組成、粗糙度、表面親疏水性以及表面剪切力等方面與人牙非常接近，有學者曾通過附著力和口腔潤滑測試證明，發育成熟的天然牛牙釉質和人牙釉質的理化性質非常相似[2]。首先，兩者有非常相似的晶體排列方向，并且釉質基質蛋白的氨基酸組合物也非常相似；其次，兩者鈣含量也非常接近，天然人牙釉質鈣含量為37.9，天然牛牙釉質鈣含量為36.8，從表面向釉牙本質界逐漸減少，并且天然牛牙的釉質厚度是天然人牙的1.7倍（63nm：36nm），唇側表面積大，被認為是天然人牙建模的理想替代品[3]。因此，本研究選擇天然牛牙釉質建模。

李鳴宇等[4]曾采用體外實驗的方法比較了茶多酚對口腔主要致病菌的抑制作用，結果發現茶多酚溶液對變形鏈球菌的最低抑菌濃度為2.5mg/ml。本研究設計的4種濃度的茶多酚溶液是根據其最小抑菌濃度而制定的。本研究結果顯示，A、B、C、D組均出現肉眼可見的色差，且牙齒著色程度隨溶液濃度的增加而加深，這說明茶多酚溶液對牙齒的結構產生了影響；其次，A、B、D組牙齒著色程度與茶多酚浸泡時間呈正相關，即著色程度隨浸泡時間的增加而加深，C組牙齒著色程度與茶多酚浸泡時間無相關性，這說明茶多酚導致牙外源性著色的程度存在差異，但這種差異目前還沒有明確的原因，需進一步探究。

馬夢君等[5]曾從色差、透光率、pH值等方面探討質量濃度和溫度對茶多酚水溶液穩定性的影響，結果發現不同質量濃度的茶多酚溶液穩定性差異都較大，且質量濃度低的茶多酚溶液較穩定。因此，在臨床應用時仍應選擇適宜濃度的茶多酚溶液來治療口腔疾病，如配制茶多酚漱口液時要選取適量的茶多酚粉末，濃度過高、在口腔中停留時間較長均有可能不會抑制或減少牙菌斑的數量及其在牙面上的黏附，反而導致牙齒著色。長期飲濃茶的人最好在飲完后及時用清水漱口，避免多酚類氧化物附著在牙間縫隙和其他隱蔽部位，造成著色。根據實驗結果，建議使用低濃度的茶多酚溶液避免牙齒著色。

綜上所述，本研究結果顯示茶多酚可能會使牙齒著色，且與其濃度、浸泡時間有一定相關性。