普瑞巴林可通過(guò)抑制TRPV1以緩解神經(jīng)病理性疼痛

華璐 郭楊 馬麗 傅佳 邱玲 趙姣妹 歐冊(cè)華

1西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院（四川瀘州646000）；2西南醫(yī)科大學(xué)（四川瀘州646000）；3成都市公共衛(wèi)生臨床醫(yī)療中心（成都610000）

疼痛是一種令人不愉快的情感體驗(yàn)，它與實(shí)際或潛在的組織損傷相關(guān)［1］，尤其慢性疼痛，嚴(yán)重困擾著人們的生活［2］。慢性疼痛性疾病包括神經(jīng)病理性疼痛（neuropathic pain，NP）、脊柱源性疼痛、癌性疼痛、炎性相關(guān)性疼痛等［3］。據(jù)調(diào)查研究，在美國(guó)，慢性疼痛影響著25% ～30%的人口，其中65 歲以上人群疼痛發(fā)病率達(dá)60%左右［4］。與此同時(shí)，慢性疼痛性疾病通常與代謝性疾病、精神性疾病（包括抑郁和焦慮）相并存［4-5］，嚴(yán)重影響人們的生存質(zhì)量。NP 為直接損傷神經(jīng)組織引起的慢性疼痛，是慢性疼痛中最為常見(jiàn)的一種，其導(dǎo)致疼痛時(shí)間可持續(xù)到組織傷愈后數(shù)月乃至數(shù)年［5］。據(jù)有關(guān)報(bào)道，NP 在普通人群中的患病率高達(dá)7% ～10%［6-7］。因此，慢性疼痛對(duì)患者的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)、精神、身體健康產(chǎn)生較大影響，是一種較為普遍的公共衛(wèi)生問(wèn)題，探討慢性疼痛特別是NP的治療方法及其機(jī)制具有重要的意義。普瑞巴林（pregabalin，PGB）是應(yīng)用于臨床治療NP 的一線(xiàn)用藥［8］，據(jù)報(bào)道，經(jīng)PGB 治療后睡眠干擾指數(shù)減少，VAS、NRS 評(píng)分結(jié)果均降低。PGB 可作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中與疼痛密切相關(guān)的電壓門(mén)控鈣離子通道蛋白，但這些作用機(jī)制尚未明確。因此，本研究首先構(gòu)建了常用的神經(jīng)病理性疼痛模型——CCI大鼠模型，并給予PGB 治療，同時(shí)進(jìn)一步檢測(cè)與疼痛正相關(guān)的電壓門(mén)控鈣離子通道激活蛋白——瞬時(shí)陽(yáng)離子通道亞家族V 成員1 蛋白受體（the transient receptor potential cation channel subfamily V member 1，TRPV1）在CCI 大鼠脊髓中的表達(dá)，以探討PGB 對(duì)CCI 大鼠模型的鎮(zhèn)痛效果及其機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組與CCI 模型鼠的建立

1.1.1 動(dòng)物分組SPF 級(jí)雄性8 周SD 大鼠72 只，購(gòu)自西南醫(yī)科大學(xué)城北動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，并在西南醫(yī)科大學(xué)忠山校區(qū)動(dòng)物中心飼養(yǎng)。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)都經(jīng)過(guò)西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理管理委員會(huì)的批準(zhǔn)，并根據(jù)西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有關(guān)的規(guī)定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。72 只大鼠隨機(jī)分為6 組：Sham 組（n= 12）為對(duì)照組，手術(shù)操作同CCI組，但不結(jié)扎神經(jīng)；CCI 組（n= 12）：結(jié)扎大鼠右側(cè)坐骨神經(jīng)復(fù)制慢性坐骨神經(jīng)縮窄損傷模型；CCI +PGB 組（n= 12）：復(fù)制CCI 動(dòng)物模型，術(shù)后7 d 進(jìn)行痛閾測(cè)定后給予普瑞巴林灌胃30 mg/（kg·d），連續(xù)7 d；CCI + CPZ 組（n= 12）：復(fù)制CCI 動(dòng)物模型，術(shù)后7 d 進(jìn)行痛閾測(cè)定后給予TRPV1 拮抗劑辣椒平腹腔注射2 mg/（kg·d），連續(xù)7 d；CCI + CPZ +PGB 組（n= 12）：復(fù)制CCI 動(dòng)物模型，術(shù)后7 d 進(jìn)行痛閾測(cè)定后先給予TRPV1 拮抗劑辣椒平腹腔注射2 mg/（kg·d），30 min 后再給予普瑞巴林灌胃30 mg/（kg·d），連續(xù)7 d；CCI+PGB+CP組（n=12）：復(fù)制CCI 動(dòng)物模型，術(shù)后7 d 進(jìn)行痛閾測(cè)定后先給予TRPV1 激動(dòng)劑辣椒素腹腔注射30 μg/（kg·d），30 min 后再給予普瑞巴林灌胃30 mg/（kg·d），連續(xù)7 d。

1.1.2 CCI 模型鼠的建立腹腔注射6%水合氯醛（3 mg/kg）麻醉大鼠，右側(cè)大腿備皮，俯臥位固定于手術(shù)臺(tái)，術(shù)區(qū)消毒鋪巾，平行于股骨下方3 ～4 mm處做一約1 cm 左右的皮膚切口，游離皮膚，鈍性分離，暴露坐骨神經(jīng)，游離坐骨神經(jīng)干大約10 mm，將4 根浸泡于生理鹽水的4-0 絲線(xiàn)從坐骨神經(jīng)下方穿過(guò)，打四個(gè)雙節(jié)，每個(gè)節(jié)間隔約1 mm。節(jié)的松緊度以可以看到肌肉短暫的抽搐、線(xiàn)不會(huì)在坐骨神經(jīng)上滑動(dòng)為宜，后逐層縫合肌肉、皮膚。Sham組只是分離暴露坐骨神經(jīng)但不進(jìn)行結(jié)扎，余操作相同。大鼠模型復(fù)制成功后可見(jiàn)大鼠手術(shù)側(cè)活動(dòng)時(shí)出現(xiàn)跛行，休息時(shí)足不接觸地面，足內(nèi)收，外翻，震顫等。Sham 組大鼠術(shù)后未見(jiàn)異常活動(dòng)、運(yùn)動(dòng)障礙等表現(xiàn)。

1.2 大鼠機(jī)械痛閾測(cè)定通過(guò)Von Frey Filament感覺(jué)測(cè)試器測(cè)定大鼠足部機(jī)械痛閾，測(cè)定3 次，取均值。當(dāng)發(fā)生模糊反應(yīng)（如出現(xiàn)行走、梳理毛發(fā)等情況），則使用相同的刺激力進(jìn)行重復(fù)刺激。于術(shù)前、術(shù)后3、5、7、14 d 每組隨機(jī)抽取6 只大鼠進(jìn)行痛閾測(cè)定，該操作由同一位實(shí)驗(yàn)員進(jìn)行，但其對(duì)動(dòng)物分組情況不明。

1.3 免疫組化檢測(cè)各組大鼠中TRPV1 蛋白的表達(dá)在14 d 完成痛閾測(cè)定后，每組隨機(jī)抽取6 只大鼠麻醉后予4%多聚甲醛灌注組織，提取腰膨大段脊髓置于4%多聚甲醛中固定，制成石蠟切片。嚴(yán)格按照SP 法免疫組化試劑盒（南京凱基）說(shuō)明檢測(cè)大鼠脊髓中TRPV1 蛋白的表達(dá)。每張免疫組化切片隨機(jī)拍攝3 張以上照片，對(duì)采集的圖片使用Image-pro Plus 6.0 軟件進(jìn)行分析。

1.4 免疫印跡檢測(cè)各組大鼠中TRPV1 蛋白的表達(dá)在14 d 完成痛閾測(cè)定后，每組隨機(jī)抽取6 只大鼠，斷頭處死后，取腰膨大段脊髓，凍存于-80 ℃冰箱。提取腰膨大段脊髓背角組織的總蛋白，經(jīng)SDS-PAGE 電泳、轉(zhuǎn)模、孵育一抗（抗體稀釋度為1∶500，兔多克隆抗體，Invitrogen，美國(guó)）和二抗后，按ECL 試劑盒說(shuō)明進(jìn)行化學(xué)發(fā)光、顯影、定影。用image-J 軟件圖像分析系統(tǒng)對(duì)各條帶進(jìn)行灰度測(cè)定，目標(biāo)條帶TRPV1 與內(nèi)參β-actin 比較，以矯正蛋白定量、上樣過(guò)程中存在的實(shí)驗(yàn)誤差。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差表示，組內(nèi)、組間比較采用單因素方差分析和LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PGB 可減低CCI 模型大鼠機(jī)械痛閾為研究PGB 的鎮(zhèn)痛機(jī)制，首先構(gòu)建了CCI 大鼠模型，隨后予PGB、CPZ 治療以了解PGB 對(duì)CCI 模型大鼠機(jī)械痛閾的療效。研究結(jié)果表明：各組大鼠CCI 造模術(shù)前痛閾差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；Sham 組大鼠術(shù)前術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)痛閾比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；CCI 組、CCI+PGB 組、CCI+CPZ 組、CCI + CPZ + PGB 組大鼠術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)痛閾低于術(shù)前（P＜0.05）。術(shù)后14 d，CCI 組（3.78±1.80）g、CCI + PGB 組（5.56 ± 1.62）g、CCI + CPZ 組（7.67 ±1.57）g、CCI+CPZ+PGB組（8.00±1.37）g 大鼠痛閾低 于Sham 組（18.72 ± 6.17）g（P＜0.05）；CCI +PGB組、CCI+CPZ組、CCI+CPZ+PGB組大鼠痛閾高于CCI 組（P＜0.05）；CCI + CPZ + PGB 組、CCI+CPZ組大鼠痛閾高于CCI+PGB組（P＜0.05）；CCI +CPZ + PGB 組大鼠痛閾高于CCI + CPZ 組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組大鼠造模術(shù)前后痛閾變化詳見(jiàn)圖1。

圖1 PGB 可減低CCI 模型大鼠機(jī)械痛閾Fig.1 PGB reduces mechanical pain threshold in CCI model rats

各組大鼠CCI 造模術(shù)前、術(shù)后3 d、術(shù)后5 d、術(shù)后7 d 及術(shù)后14 d 的機(jī)械痛閾比較顯示：各組大鼠術(shù)前痛閾差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；Sham 組大鼠術(shù)前后各時(shí)間點(diǎn)痛閾比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；CCI 組、CCI + PGB 組、CCI + CPZ 組、CCI+CPZ+PGB 組大鼠術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)痛閾低于術(shù)前（P＜0.05）；術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)CCI 組、CCI+PGB 組、CCI + CPZ 組、CCI + CPZ + PGB 組大鼠痛閾低于sham 組（P＜0.05）；術(shù)后14 d，CCI + PGB 組、CCI +CPZ 組、CCI + CPZ + PGB 組大鼠痛閾高于CCI 組（P＜0.05）；CCI+CPZ+PGB 組、CCI+CPZ 組大鼠痛閾高于CCI+PGB 組（P＜0.05）。

2.2 PGB 可減低CCI 模型大鼠TRPV1 蛋白的表達(dá)既往研究表明電壓門(mén)控鈣離子通道激活蛋白TRPV1 的激活會(huì)引起疼痛反應(yīng)增強(qiáng)，其在多種炎性和神經(jīng)病理性疼痛模型中表達(dá)上調(diào)，抑制TRPV1 時(shí)疼痛減輕；而PGB 可作用于CNS 中電壓門(mén)控鈣離子通道（VGCC）的α2δ亞基蛋白。因此，為探討PGB 提高CCI 模型大鼠機(jī)械痛閾的機(jī)制，我們檢測(cè)了各組大鼠中TRPV1 蛋白的表達(dá)。免疫組化研究結(jié)果顯示（圖3、4）：造模術(shù)后14 d，CCI 組（光密度值為0.177 6 ± 0.004 2）、CCI +PGB 組（0.160 3 ± 0.005 6）、CCI + CPZ 組（0.143 3± 0.004 1）、CCI + CPZ + PGB 組（0.140 4 ± 0.005 6）大鼠的TRPV1 蛋白表達(dá)高于Sham 組（0.124 8 ±0.008 5）大鼠（P＜0.05）；但經(jīng)治療后，CCI + PGB組、CCI + CPZ 組、CCI + CPZ + PGB 組大鼠TRPV1蛋白的表達(dá)比CCI 組低（P＜0.05），CCI + CPZ 組、CCI + CPZ + PGB 組大鼠TRPV1 蛋白的表達(dá)比CCI + PGB 組低（P＜0.05）；CCI + CPZ + PGB 組與CCI + CPZ 組大鼠的TRPV1 蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

類(lèi)似的，免疫印跡結(jié)果也顯示（圖4）：造模術(shù)后14 d，Sham 組、CCI 組、CCI+PGB 組、CCI+CPZ 組、CCI + CPZ + PGB 組大鼠脊髓的TRPV1 的蛋白表達(dá)分別為0.124 8 ± 0.008 5、0.177 6 ± 0.004 2、0.160 3±0.005 6、0.143 3±0.004 1、0.140 4±0.005 6。CCI 組、CCI + PGB 組、CCI + CPZ 組、CCI + CPZ +PGB 組大鼠脊髓的TRPV1 的蛋白表達(dá)比sham 組大鼠明顯升高（P＜0.05）；CCI+PGB 組、CCI+CPZ組、CCI + CPZ + PGB 組大鼠的TRPV1 蛋白表達(dá)比CCI 組低（P＜0.05）；CCI+CPZ 組TRPV1 蛋白表達(dá)比CCI + PGB 組低（P＜0.05）；CCI + CPZ 組（0.93 ±0.02）大鼠TRPV1 蛋白表達(dá)與CCI +CPZ+PGB 組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。因此，以上免疫組化和免疫印跡結(jié)果充分表明PGB 可減低CCI模型大鼠TRPV1 蛋白的表達(dá)。

圖2 免疫組化檢測(cè)各組大鼠術(shù)后14 d 脊髓TRPV1 蛋白的表達(dá)情況Fig.2 Immunohistochemical detection of TRPV1 protein expression in the spinal cord of rats in each group at 14 days after surgery

圖3 免疫組化檢測(cè)各組大鼠術(shù)后14 d 脊髓TRPV1 蛋白的表達(dá)的定量分析Fig.3 Quantitative analysis of the expression of TRPV1 protein in the spinal cord of rats in each group at 14 days after immunohistochemical detection

各組大鼠免疫組化染色TRPV1 蛋白后光密度定量分析結(jié)果顯示：造模術(shù)后14 d，CCI 組、CCI +PGB 組、CCI + CPZ 組、CCI + CPZ + PGB 組大鼠的TRPV1 蛋白表達(dá)高于Sham 組（P＜0.05）；但經(jīng)治療后，CCI + PGB 組、CCI + CPZ 組、CCI + CPZ + PGB組大鼠TRPV1 蛋白的表達(dá)比CCI 組低（P＜0.05），CCI + CPZ 組、CCI + CPZ + PGB 組大鼠TRPV1 蛋白的表達(dá)比CCI+PGB組低（P＜0.05）。

免疫印跡結(jié)果顯示：造模術(shù)后14 d，CCI 組、CCI+PGB 組、CCI+CPZ 組、CCI+CPZ+PGB 組大鼠脊髓的TRPV1 的蛋白表達(dá)比Sham組大鼠明顯升高（P＜0.05）；CCI + PGB 組、CCI + CPZ 組、CCI +CPZ + PGB 組大鼠的TRPV1 蛋白表達(dá)比CCI 組低（P＜0.05）；CCI + CPZ 組TRPV1 蛋白表達(dá)比CCI +PGB組低（P＜0.05）。

2.3 PGB可通過(guò)抑制TRPV1蛋白的表達(dá)而減輕神經(jīng)病理性疼痛為進(jìn)一步研究PGB 的鎮(zhèn)痛機(jī)制，同樣構(gòu)建了CCI 大鼠模型，予PGB 治療CCI 大鼠后，再予TRPV1 激動(dòng)劑辣椒素CP 干預(yù)。研究結(jié)果（圖4）表明：術(shù)后14 d，CCI 組（3.60 ± 1.14）g、CCI+PGB 組（8.40±1.14）g 大鼠痛閾低于Sham 組（18.00 ± 1.58）g（P＜0.05）；予PGB 治療CCI 大鼠后，CCI + PGB 組大鼠痛閾比CCI 組升高了（P＜0.05）；同時(shí)給予PGB 和TRPV1 激動(dòng)劑辣椒素CP干預(yù)CCI 大鼠后，CCI + PGB + CP 組（4.2 ± 1.30）g痛閾低于CCI+PGB 組（P＜0.05），且與CCI 組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。這些結(jié)果表明PGB 可通過(guò)抑制TRPV1 蛋白的表達(dá)而減輕神經(jīng)病理性疼痛。

圖4 免疫印跡檢測(cè)各組大鼠術(shù)后14 d 脊髓TRPV1 蛋白的表達(dá)Fig.4 TRPV1 protein expression in the spinal cord of rats in each group at 14 days after immunoblot detection

圖4 PGB 通過(guò)抑制TRPV1 蛋白的表達(dá)而提高CCI 模型大鼠機(jī)械痛閾Fig.4 PGB increases the mechanical pain threshold of CCI model rats by inhibiting the expression of TRPV1 protein

術(shù)后14 d CCI 組、CCI + PGB 組、CCI + PGB +CP 組大鼠痛閾均低于Sham 組（P＜0.05）。術(shù)后14 d，CCI+PGB 組大鼠痛閾高于CCI組（P＜0.05），CCI + PGB + CP 組大鼠痛閾與CCI 組大鼠痛閾差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），小于CCI+PGB組大鼠（P＜0.05）。

3 討論

疼痛是與實(shí)際或者潛在的組織損傷相關(guān)的令人不愉快的情感體驗(yàn)［1］，在一定程度上疼痛是一種自我保護(hù)機(jī)制［1，9］，但NP 疼痛可持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間，甚至數(shù)月乃至數(shù)年［5］。慢性疼痛性疾病包括NP、脊柱源性疼痛、癌性疼痛、炎性相關(guān)性疼痛等［3］。據(jù)調(diào)查研究，中國(guó)北京慢性疼痛在社區(qū)的患病率為8.91%［10-11］。此外，慢性疼痛性疾病常常與代謝性疾病、精神性疾病（包括焦慮和抑郁）等相伴隨［4，12］。總之，慢性疼痛對(duì)患者的精神、經(jīng)濟(jì)、身體健康產(chǎn)生較大影響，是一種較為普遍公共衛(wèi)生問(wèn)題。因此，探討慢性疼痛特別是NP 的治療方法及其機(jī)制具有重要的意義。

本研究中，為研究NP 的機(jī)制，首先構(gòu)建了CCI大鼠模型，隨后予PGB 或TRPV1 抑制劑CPZ 治療以了解他們對(duì)CCI 模型大鼠機(jī)械痛閾的療效。研究結(jié)果表明PGB 和CPZ 都能有效地提高CCI 大鼠模型的痛閾。為進(jìn)一步研究PGB 的鎮(zhèn)痛機(jī)制，檢測(cè)了與疼痛正相關(guān)的電壓門(mén)控鈣離子通道激活蛋白TRPV1 在CCI 大鼠脊髓中的表達(dá)，免疫組化和免疫印跡結(jié)果均充分表明PGB 可減低CCI 模型大鼠脊髓中TRPV1 蛋白的表達(dá)；同時(shí)給予PGB 和TRPV1 激動(dòng)劑CP 干預(yù)CCI 大鼠后，其痛閾比CCI+PGB 組大鼠降低了，且與CCI 組大鼠比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這表明PGB 可通過(guò)下調(diào)脊髓中TRPV1 蛋白的表達(dá)來(lái)對(duì)神經(jīng)病理性疼痛產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。

PGB 是一種抗癲癇藥物，是目前治療NP 的一線(xiàn)用藥［8］。孫卓浩等［9］通過(guò)對(duì)1 625 例PHN 患者的研究表明，經(jīng)PGB 治療后患者睡眠干擾指數(shù)減少，VAS、NRS 評(píng)分均降低。PGB 可減少谷氨酸為主的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)釋放，從而抑制神經(jīng)元的過(guò)度興奮以達(dá)到鎮(zhèn)痛的目的［10］。但PGB治療NP的作用機(jī)制目前尚未被完全闡明。本研究中，為研究PGB 的鎮(zhèn)痛機(jī)制，首先構(gòu)建了常用的神經(jīng)病理性疼痛模型——CCI 大鼠模型，隨后予PGB 治療，結(jié)果顯示PGB 可有效地提高CCI 大鼠模型的痛閾。

TRPV1 又稱(chēng)辣椒素受體，是一種非選擇性陽(yáng)離子通道，其主要作用于周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)傷害性感受神經(jīng)元中。TRPV1 可通過(guò)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，進(jìn)而激活酪氨酸激酶受體（RTKs）和G 蛋白耦聯(lián)受體（GPCRs）而致敏。TRPV1 也可被內(nèi)源性的配體，酸性環(huán)境、高于42 ℃的溫度等外源性所激活，進(jìn)而激活電壓門(mén)控鈣離子通道，引發(fā)一系列的生物學(xué)效應(yīng)。TRPV1 的致敏與激活均可增強(qiáng)疼痛反應(yīng)。在多種疼痛模型中TRPV1 表達(dá)上調(diào)，疼痛減輕［13-15］，表明TRPV1 是疼痛信號(hào)傳導(dǎo)的關(guān)鍵整合者。大鼠坐骨神經(jīng)慢性縮窄性損傷（chronic constriction injury，CCI）模型是神經(jīng)病理性疼痛常用模型［16-17］。研究［18-20］表明在CCI 模型中，脊髓里的TRPV1 會(huì)上調(diào)。辣椒素（capsaicin，CAP）是TRPV1 的激動(dòng)劑，其可誘導(dǎo)CCI 模型脊髓中的P 物質(zhì)、降鈣素基因相關(guān)肽等神經(jīng)肽的釋放增加而導(dǎo)致TRPV1 致敏，進(jìn)而參與到神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生和（或）維持［20］。因此為進(jìn)一步研究PGB 的鎮(zhèn)痛機(jī)制，本文檢測(cè)了與疼痛正相關(guān)的蛋白TRPV1在CCI 大鼠脊髓中的表達(dá)，免疫組化和免疫印跡結(jié)果均充分表明PGB 可減低CCI 模型大鼠脊髓中TRPV1 蛋白的表達(dá)。此外本研究結(jié)果還顯示TRPV1 抑制劑CPZ 組對(duì)CCI 鼠的鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)于PGB，CCI + CPZ 組TRPV1 蛋白表達(dá)比CCI + PGB組低（P＜0.05），CCI + CPZ 組大鼠TRPV1 蛋白表達(dá)與CCI + CPZ + PGB 組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。即抑制TRPV1 蛋白的表達(dá)后，PGB 不能通過(guò)進(jìn)一步抑制TRPV1 的表達(dá)以提高機(jī)械痛閾。同時(shí)給予PGB 和TRPV1 激動(dòng)劑CP 干預(yù)CCI大鼠后，CCI + PGB + CP 組大鼠的痛閾比CCI +PGB 組大鼠降低了，且與CCI 組大鼠比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這些結(jié)果表明PGB 可通過(guò)下調(diào)脊髓中TRPV1 蛋白的表達(dá)，從而緩解神經(jīng)病理性疼痛。

綜上所述，NP 是一種較為普遍公共衛(wèi)生問(wèn)題，探討NP 的治療方法及其機(jī)制具有重要的意義。本研究中，為研究NP 的機(jī)制，首先構(gòu)建了常用的神經(jīng)病理性疼痛模型——CCI 大鼠模型，隨后予PGB 或TRPV1 抑制劑CPZ 治療，結(jié)果表明PGB和CPZ 都能有效地提高CCI 大鼠模型的痛閾。為進(jìn)一步研究PGB 的鎮(zhèn)痛機(jī)制，檢測(cè)了與疼痛正相關(guān)的TRPV1 蛋白在CCI 大鼠脊髓中的表達(dá)，免疫組化和免疫印跡結(jié)果都顯示PGB 可減低CCI 模型大鼠脊髓中TRPV1 蛋白的表達(dá)；同時(shí)給予PGB 和TRPV1 激動(dòng)劑CP 干預(yù)CCI 大鼠后，其痛閾比CCI+PGB 組大鼠降低了，且與CCI 組大鼠比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這表明PGB 可通過(guò)抑制TRPV1 蛋白表達(dá)來(lái)緩解神經(jīng)病理性疼痛。這為NP 的治療提供了新的思路。

NP 是一種較為普遍公共衛(wèi)生問(wèn)題，探討NP的治療方法及其機(jī)制具有重要的意義。本研究結(jié)果表明PGB 可通過(guò)抑制TRPV1 蛋白表達(dá)來(lái)緩解神經(jīng)病理性疼痛，但仍需在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)、甚至人體實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步驗(yàn)證，同時(shí)TRPV1 蛋白的上下游靶點(diǎn)的作用也仍需進(jìn)一步探討。