LncRNA SNHG6表達(dá)水平與腫瘤患者預(yù)后關(guān)系的Meta分析

李才弘 劉長(zhǎng)路 劉婭 黃婷 李亞軍 龔玲 劉代順

遵義醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院（遵義市第一人民醫(yī)院）1呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，2腫瘤科（貴州遵義563000）

癌癥是全世界人類的主要死因之一，是重要的公共衛(wèi)生問題。近年來癌癥的研究突飛猛進(jìn)，但其臨床結(jié)局仍不樂觀，主要原因是癌癥未能得到早期診斷及有效的治療，導(dǎo)致其臨床療效并不理想［1］，嚴(yán)重影響患者的預(yù)后。因此，迫切需要尋找能提示腫瘤患者早期診斷和預(yù)后評(píng)價(jià)的生物標(biāo)記物。部分長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）在腫瘤組織中表達(dá)明顯增高，是早期診斷和預(yù)后評(píng)價(jià)的潛在靶標(biāo)，可篩選作為腫瘤標(biāo)記物［2-3］。小核仁RNA 宿主基因6（small nucleolar RNA host gene 6，SNHG6）已被證明是一種潛在的致癌性lncRNA，最先在肝細(xì)胞癌研究中發(fā)現(xiàn)其表達(dá)異常［4-5］；隨后在胃癌的研究中證實(shí)，SNHG6在胃癌組織中表達(dá)增高，且其增高水平與胃癌的浸潤(rùn)深度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)，提示患者預(yù)后較差［6］；研究［7］發(fā)現(xiàn)，SNHG6 通過調(diào)節(jié)miR-26a-5p/E2F7 軸促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞侵襲、增殖和遷移，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化。越來越多研究表明，SNHG6 在各種腫瘤組織中表達(dá)升高，提示預(yù)后不良，如結(jié)直腸癌、骨肉瘤、膠質(zhì)瘤等。但由于大多數(shù)針對(duì)SNHG6 的研究樣本量較小，故本研究擬對(duì)納入文獻(xiàn)采用Meta 分析，評(píng)估SNHG6與腫瘤患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 檢索策略系統(tǒng)檢索PubMed、EMbase、Cochrane Library、Web of science、Ovid、Medline、中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方等數(shù)據(jù)庫(kù)，收集2019年11月之前國(guó)內(nèi)外發(fā)表的關(guān)于LncRNA SNHG6 的表達(dá)與腫瘤預(yù)后相關(guān)性的研究文獻(xiàn)。檢索詞包括：“small nucleolar RNA host gene 6”“l(fā)ong noncoding RNA SNHG6”“l(fā)ncRNA SNHG6”“l(fā)incRNA SNHG6”“SNHG6”“l(fā)ong intergenic noncoding RNA SNHG6”“cancer”“tumor”“carcinoma”“neoplasm”“prognosis”“prognostic”“survival”“clinical outcome”“mortality”“長(zhǎng) 鏈 非 編碼RNA SNHG6”“核仁小RNA 宿主基因6”“癌癥”“腫瘤”“生存”“預(yù)后”，采用擴(kuò)展檢索的方式，對(duì)納入文獻(xiàn)進(jìn)行檢索，此過程由兩名研究者獨(dú)立進(jìn)行。外文數(shù)據(jù)庫(kù)檢索式為［（small nucleolar RNA host gene 6）OR（long noncoding RNA SNHG6）OR（lncRNA SNHG6）OR（lincRNA SNHG6）OR（SNHG6）OR（long intergenic noncoding RNA SNHG6）］AND［（cancer）OR（tumor）OR（carcinoma）OR（neoplasm）］AND［（prognosis）OR（prognostic）OR（survival）OR（clinical outcome）OR（mortality）］；中文數(shù)據(jù)庫(kù)檢索式為［（長(zhǎng)鏈非編碼RNA SNHG6）OR（核仁小RNA 宿主基因6）］AND［（癌癥）OR（腫瘤）〕AND〔（生存）OR（預(yù)后）］。

1.2 文獻(xiàn)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)（1）在各種人類腫瘤中檢測(cè)SNHG6 的表達(dá)水平；（2）評(píng)估了LncRNA SNHG6 與腫瘤患者總生存期（overall survival，OS），無(wú)病生存期（disease-free survival，DFS），無(wú)復(fù)發(fā)生存期（relapse-free survival，RFS）或無(wú)進(jìn)展生存期（progressionfree survival，PFS）之間的關(guān)系；（3）可直接提取或從原始文件中估算風(fēng)險(xiǎn)比（hazard ratio，HR）及其95%CI（95%confidence interval，95%CI）；（4）患者在手術(shù)前未經(jīng)過任何抗腫瘤治療。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)（1）病例報(bào)告，綜述，專家意見，信件，會(huì)議記錄，評(píng)論和非人體試驗(yàn)；（2）重復(fù)出版；（3）缺乏HR及其95%CI，或者無(wú)法估計(jì)這些參數(shù)；（4）樣本量＜30；（5）患者在手術(shù)前未經(jīng)過抗腫瘤治療。兩位研究者對(duì)所有選定的研究進(jìn)行評(píng)估，以排除無(wú)關(guān)研究。

1.3 資料與數(shù)據(jù)提取由兩位研究人員對(duì)納入文獻(xiàn)進(jìn)行信息提取，如遇分歧則通過協(xié)商討論解決。提取內(nèi)容包括：第一作者、出版時(shí)間、研究地點(diǎn)、腫瘤類型、樣本量、性別、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、樣本來源、檢測(cè)方法、臨界值、SNHG6 高表達(dá)率、觀察指標(biāo)、OS、DFS、RFS、HR及其95%CI。若HR不能從原始文獻(xiàn)中直接獲取，研究人員會(huì)通過郵件求助該研究的作者，若無(wú)回應(yīng)，則從生存曲線中提取數(shù)據(jù)。

1.4 質(zhì)量評(píng)價(jià)對(duì)符合標(biāo)準(zhǔn)的納入文獻(xiàn)采用紐卡斯?fàn)?渥太華量表（Newcastle-Ottawa scale，NOS）進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估，該評(píng)價(jià)清單包括3 個(gè)類別（選擇、可比性和暴露）共計(jì)8 個(gè)條目，采用星級(jí)系統(tǒng)的半量化原則對(duì)文獻(xiàn)質(zhì)量進(jìn)行評(píng)分，滿分為9 分，0 ～4分為低質(zhì)量文獻(xiàn)，5 ～9 分為高質(zhì)量文獻(xiàn)。此評(píng)分過程由兩名研究人員獨(dú)立進(jìn)行，通過協(xié)商討論或者第3 人解決分歧。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法統(tǒng)計(jì)分析采用Stata 12.0 軟件進(jìn)行，匯總的HR和95%CI用于評(píng)價(jià)SNHG6 高表達(dá)對(duì)各種癌癥的預(yù)后價(jià)值。當(dāng)HR＞1 時(shí)，具有SNHG6高表達(dá)的組被認(rèn)為預(yù)后不良；相反，當(dāng)HR＜1 時(shí)，具有SNHG6 低表達(dá)的組被認(rèn)為預(yù)后不良。采用Q檢驗(yàn)和I2檢驗(yàn)測(cè)試研究之間的異質(zhì)性，存在顯著異質(zhì)性時(shí)（I2≥50%或P≤0.05），采用隨機(jī)效應(yīng)模型；不存在異質(zhì)性時(shí)（I2＜50%或P＞0.05），采用固定效應(yīng)模型。分析研究之間的異質(zhì)性來源，必要時(shí)進(jìn)行亞組分析或敏感性分析。使用比值比（odds ratio，OR）對(duì)二分類數(shù)據(jù)予以評(píng)估。文章最后采用Begg′s和Egger′s檢驗(yàn)進(jìn)行發(fā)表偏倚檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)檢索結(jié)果初步檢索共獲得241 項(xiàng)研究，包括166 篇英文文獻(xiàn)，75 篇中文文獻(xiàn)。其中160 篇重復(fù)文獻(xiàn)通過EndNote X7 篩查排除。在閱讀文章標(biāo)題及摘要后，33 篇文獻(xiàn)被排除在外。進(jìn)一步審查全文后，32 篇文獻(xiàn)被排除在外，最終納入16 個(gè)研究，共計(jì)1 240 例患者（圖1）。

2.2 納入文獻(xiàn)的基本特征及質(zhì)量評(píng)分共納入16 項(xiàng)研究，發(fā)表于2016 至2019年，以近3年發(fā)表文獻(xiàn)居多，共計(jì)1 240 例患者。納入的文獻(xiàn)均為英文，全部來自中國(guó)，包括9 種不同類型的癌癥，其中結(jié)直腸癌5 篇［8-12］，骨肉瘤［13-14］、膠質(zhì)瘤［15-16］和肝細(xì)胞癌各2 篇［4-5］，胃癌［6］、卵巢癌［17］、肺腺癌［7］、食管鱗癌［18］、腎細(xì)胞癌［19］各1 篇。除了一項(xiàng)研究檢測(cè)SNHG6 的表達(dá)采用原位雜交（in situ hybridization，ISH），其余均采用即時(shí)聚合酶鏈鎖反應(yīng)（quantitative real time polymerase chain reaction，qRT-PCR）檢測(cè)。對(duì)16 篇納入文獻(xiàn)使用NOS 進(jìn)行質(zhì)量評(píng)分，質(zhì)量評(píng)分為6 ～8 分，均為高質(zhì)量文獻(xiàn)。納入研究的基本特征及質(zhì)量評(píng)分見表1。

圖1 文獻(xiàn)篩選流程圖Fig.1 Flow chart of literature screening

2.3 SNHG6 表達(dá)與腫瘤患者預(yù)后的關(guān)系有15項(xiàng)研究報(bào)道了SNHG6 表達(dá)水平與OS 的關(guān)系，各研究結(jié)果間無(wú)異質(zhì)性（I2= 0%，P= 0.682），采用固定效應(yīng)模型；共有6 項(xiàng)研究報(bào)道了DFS/PFS/RFS，各研究結(jié)果間無(wú)異質(zhì)性（I2= 0%，P= 0.693），采用固定效應(yīng)模型。結(jié)果顯示，腫瘤組織中SNHG6 表達(dá)水平與患者總體存活率之間存在顯著相關(guān)性，SNHG6高表達(dá)者OS較低表達(dá)者差（HR=2.30，95%CI：1.91 ～2.77，P＜0.001，圖2），其中，對(duì)腫瘤類型進(jìn)行亞組分析，結(jié)果顯示SNHG6 高表達(dá)與消化系統(tǒng)腫瘤患者、非消化道腫瘤患者的不良預(yù)后相關(guān)（HR= 2.36，95%CI：1.81 ～3.08，P＜0.001，圖2），（HR= 2.24，95%CI：1.73 ～2.91，P＜0.001，圖2）。對(duì)DFS/PFS/RFS 進(jìn)行合并分析，結(jié)果表明SNHG6表達(dá)水平與腫瘤進(jìn)展正相關(guān)（HR= 2.36，95%CI：1.69 ～3.29，P＜0.001，圖3）。因此，SNHG6 在腫瘤中的上調(diào)提示患者預(yù)后不良。

表1 納入研究基本信息及質(zhì)量評(píng)價(jià)Tab.1 Information and quality of studies included

2.4 SNHG6 表達(dá)與腫瘤患者臨床特征的關(guān)系進(jìn)一步評(píng)估納入研究SNHG6 表達(dá)與癌癥患者臨床特征的關(guān)系，結(jié)果顯示，癌組織中SNHG6 的高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（OR= 2.84，95%CI：1.63 ～4.93，P＜0.001）和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（OR= 4.62，95%CI：2.96 ～7.22，P＜0.001）相關(guān)，SNHG6 高表達(dá)的患者分期更晚（Ⅲ，Ⅳ/Ⅰ，Ⅱ）（OR= 2.93，95%CI：2.16 ～3.97，P＜0.001），但與性別（OR= 1.21，95%CI：0.94 ～1.56，P=0.139）、腫瘤大小（OR=1.59，95%CI：0.83～3.06，P= 0.166）及年齡（OR= 1.01，95%CI：0.74～1.38，P=0.941）均無(wú)關(guān)。

圖2 SNHG6 表達(dá)與腫瘤患者OS 關(guān)系的Meta 分析森林圖Fig.2 Forest plots for the associaion between SNHG6 expression and overall survival

圖3 SNHG6 表達(dá)與腫瘤患者DFS/PFS/RFS 關(guān)系的Meta分析森林圖Fig.3 Forest plots for the associaion between SNHG6 expression and disease-free survival/progression-free survival/relapse-free survival

2.5 發(fā)表偏倚采用Begg和Egger檢驗(yàn)法對(duì)納入研究進(jìn)行發(fā)表偏倚評(píng)估，結(jié)果顯示，OS 發(fā)表偏倚Begg法P= 0.692，Egger法P= 0.886，均提示無(wú)明顯發(fā)表偏倚（圖4）。

3 討論

失調(diào)的lncRNA 圖譜廣泛參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展全程，包括腫瘤細(xì)胞的侵襲，增殖，遷移，凋亡，上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）和腫瘤耐藥［20］。研究［21-22］表明，LncRNA 在某些癌癥患者的血液、尿液、腫瘤組織或其他組織中表達(dá)失調(diào)，可以作為癌癥診斷的潛在生物標(biāo)記物。SNHG6 是目前研究較多的LncRNA 之一。

圖4 檢驗(yàn)發(fā)表偏倚的漏斗圖Fig.4 Funnel plot for publication bias

在肝癌中，SNHG6 首次被證實(shí)可通過調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞中ZEB1 的表達(dá)來誘導(dǎo)EMT 過程。SNHG6作為一種競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源性RNA，可通過競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-101-3p 上調(diào)ZEB1 的表達(dá)，從而誘導(dǎo)EMT 和抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖、侵襲和遷移。臨床研究結(jié)果表明，高SNHG6 表達(dá)的肝癌患者比低SNHG6 表達(dá)的肝癌患者具有更短的OS 和更高的復(fù)發(fā)率，這些結(jié)果表明SNHG6 上調(diào)在肝癌的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用［4］。隨后的研究發(fā)現(xiàn)，雖然有五種SNHG6 轉(zhuǎn)錄本在肝癌組織中差異表達(dá)，但是只有SNHG6-003 具有致癌功能，可促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)耐藥，SNHG6-003 的高表達(dá)與靜脈癌栓、肝癌分期和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示肝癌患者預(yù)后不良［5］。同樣，SNHG6 在結(jié)直腸癌細(xì)胞系中表達(dá)增高，并促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖和侵襲，與癌癥患者更高的分期和淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［12］。此外，RUAN 等［13］研究發(fā)現(xiàn)，SNHG6 的表達(dá)水平在骨肉瘤中明顯升高，其通過調(diào)節(jié)p21和KLF2的表達(dá)來抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖。來自于MENG 等［16］的研究表明，在膠質(zhì)瘤組織中，SNHG6 的表達(dá)高于正常腦組織，SNHG6 的表達(dá)與腫瘤的惡性程度及患者的預(yù)后不良呈正相關(guān)。另外，其他一些研究也提示SNHG6 明顯的致癌作用及其高表達(dá)與患者預(yù)后不良相關(guān)，如胃癌、卵巢癌、肺腺癌、食管鱗癌、腎細(xì)胞癌等。這些研究提示，SNHG6 可能成為判斷腫瘤患者預(yù)后的潛在標(biāo)志物。但是，由于這些腫瘤研究的樣本量較小，且缺乏系統(tǒng)性的研究，因此本Meta 分析系統(tǒng)地探索了SNHG6 表達(dá)水平與癌癥患者預(yù)后的關(guān)系。

本研究通過Meta 分析，評(píng)估SNHG6 表達(dá)與腫瘤患者預(yù)后的關(guān)系，結(jié)果顯示，與SNHG6 低表達(dá)的患者相比，SNHG6 高表達(dá)的患者OS 縮短，匯總的DFS/PFS/RFS 縮短，對(duì)腫瘤類型進(jìn)行亞組分析后發(fā)現(xiàn)，在消化系統(tǒng)腫瘤和非消化系統(tǒng)腫瘤中，SNHG6高表達(dá)的患者OS 縮短。此外，本研究表明SNHG6高表達(dá)可能與癌癥患者更早的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P＜0.001），遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（P＜0.001）相關(guān)，與性別、腫瘤大小、年齡無(wú)關(guān)。這些研究結(jié)果顯示，SNHG6 高表達(dá)是腫瘤患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素，可用于癌癥患者的早期診斷及預(yù)后判斷，作為腫瘤的潛在生物標(biāo)志物。

本研究雖然按照嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)篩選文獻(xiàn)，但仍然存在一些不足及局限性：（1）一些納入研究的樣本量相對(duì)較小，可能會(huì)降低研究效果；（2）所有納入的研究均來自中國(guó)，因此所獲數(shù)據(jù)可能缺乏全球性推斷依據(jù)；（3）由于納入研究采用的判定方法存在差異，缺乏統(tǒng)一的臨界值界定標(biāo)準(zhǔn)，這可能會(huì)影響SNHG6 預(yù)測(cè)腫瘤預(yù)后的有效性；（4）部分HR及95%CI是通過對(duì)生存曲線進(jìn)行提取后間接得到，可能會(huì)對(duì)匯總的HR帶來較小的統(tǒng)計(jì)偏差；（5）納入文獻(xiàn)的質(zhì)量評(píng)估存在差異，這可能導(dǎo)致偏倚；（6）由于大部分研究?jī)H發(fā)表陽(yáng)性結(jié)果，陰性結(jié)果很少被發(fā)表，因此這可能導(dǎo)致SNHG6 高表達(dá)與癌癥預(yù)后之間的關(guān)聯(lián)被評(píng)價(jià)過度。

綜上所述，SNHG6 的高表達(dá)與腫瘤患者較短的總生存期和不良的臨床病理特征相關(guān)。然而，由于目前對(duì)于SNHG6 的研究文獻(xiàn)相對(duì)較少且腫瘤類型局限，導(dǎo)致本研究可能存在較高偏倚風(fēng)險(xiǎn)，因此，關(guān)于SNHG6 高表達(dá)與腫瘤預(yù)后及臨床特征的關(guān)系，需要規(guī)模更大質(zhì)量更高的研究來進(jìn)行證實(shí)，以期獲得更多更可靠的數(shù)據(jù)來指導(dǎo)臨床決策。