益生菌治療對慢性乙肝患者腸道菌群、肝功能及肝纖維化指標水平的影響

王杏雨，汪根良，倪 凱

(金華市婺城區第一人民醫院 內科，浙江 金華 321075)

慢性乙型肝炎(以下簡稱乙肝)是指機體感染乙型肝炎病毒而引起的肝臟壞死和炎癥反應，是全球重大的公共衛生問題之一[1]。中國為乙肝中流行區，慢性乙肝患者約為8 600萬人，占全球慢性感染者的30%[2-3]。乙肝感染可改變人體腸道菌群結構，減少慢性乙肝患者腸道菌群的多樣性，使雙歧桿菌、羅氏菌屬及類桿菌等益生菌數量顯著降低，而腸球菌、腸桿科細菌及酵母菌等條件致病菌顯著增多[4]。腸道菌群的失調使有毒代謝產物增加，導致肝臟的炎癥損傷，加重肝臟病變并促進慢性乙肝向肝硬化的發展，嚴重影響患者預后[5]。益生菌作為常用的腸道微生態制劑，在調節腸道菌群中具有重要作用。以往研究指出改善腸道菌群結構在提高乙肝患者的肝功能及預后中具有重要作用[6]。對此，本研究旨在探討益生菌治療對慢性乙肝患者腸道菌群、肝功能及肝纖維化指標的影響，為臨床干預提供依據。

1 對象與方法

1.1 病例選擇 選擇2018年4月—2019年3月在我院就診的慢性乙肝患者130例作為研究對象。納入標準：①符合2015版《慢性乙型肝炎防治指南》[7]中對慢性乙肝的診斷標準；②未服用影響腸道黏膜通透性的藥物及制劑；③對本研究內容及目的知情，并自愿參與本次研究。排除標準：①其他病毒性肝炎感染患者；②存在炎癥性腸炎，近期出現消化道出血、感染等消化系統疾病；③失代償期肝硬化患者、肝癌患者；④嚴重心腎功能障礙、肝性腦病患者；⑤處于妊娠或哺乳期婦女。根據電腦產生的隨機數字將納入的患者分為對照組和觀察組，每組65例。觀察組男45例、女20例，年齡22～65歲，病程6月～4年；對照組男39例、女26例，年齡26～69歲，病程8月～5年；2組患者的一般資料差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。本研究通過本院倫理委員會批準。

表1 患者一般資料情況

1.2 治療 所有患者給予保肝、營養支持等常規治療。觀察組另給予益生菌治療，加服雙歧桿菌四聯活菌片(杭州龍達新科生物制藥有限公司，國藥準字S20060010)。于餐后口服服藥，一次3片，每天3次，療程為3個月。服藥期間囑患者忌食辛辣等刺激性食物。

1.3 觀察指標及檢測方法

1.3.1 腸道菌群 治療前及治療后3個月后，收集2組患者的新鮮糞便樣本，采用Linegene 9600型熒光定量PCR儀(杭州博日科技有限公司)，采用熒光定量PCR技術檢測腸桿菌、腸球菌、雙歧桿菌屬、乳酸桿菌、梭菌的數目。

1.3.2 肝功能 治療前及治療3個月后，分別取2組患者清晨空腹肘靜脈血5 mL，離心后檢測肝功能指標。采用全自動生化分析儀(日立7600)檢測2組患者治療前后的谷草轉氨酶(aspartate transaminase, AST)、丙氨酸轉氨酶(ALT)及總膽紅素(total bilirubin, TBIL)水平。

1.3.3 肝纖維化指標 治療前及治療3個月后，采用化學發光免疫分析法檢測2組患者的肝纖維化指標，包括透明質酸酶(hyaluronidase, HA)，層粘蛋白(laminin, LN)，III型前膠原(procollagen, PCIII)、IV型膠原(IV-C)。試劑盒選自北京綁定泰克生物公司，實驗步驟均嚴格按照說明書執行。

2 結果

2.1 治療前后患者腸道菌群數量的比較 治療前，2組患者腸道菌群含量差異無統計學意義(P>0.05)。治療后，觀察組患者的雙歧桿菌及乳酸桿菌數量顯著高于對照組，腸桿菌、腸球菌數量顯著低于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)；治療后2組患者梭菌數量無顯著改變(P>0.05)。見表2。

2.2 治療前后2組患者肝功能的比較 治療前，2組患者肝功能各項指標差異無統計學意義(P>0.05)。治療后，觀察組患者AST、ALT、TBIL均低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

2.3 治療前后2組患者肝纖維化指標的比較 治療前，2組患者肝纖維化各項指標差異無統計學差異(P>0.05)。治療后，觀察組患者的HA、LN、PCIII及IV-C均低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表2 治療前后2組患者腸道菌群數量比較

表3 治療前后2組患者肝功能指標對比

表4 治療前后2組患者肝纖維化指標對比

3 討論

乙型肝炎病毒感染是全球重大的公共衛生問題之一。據世界衛生組織統計，全球約有20億以上的人感染過乙肝，其中2.57億人為慢性乙肝感染者，每年約78萬人死于乙肝感染相關的并發癥，包括肝硬化和肝細胞癌[8]。在中國，每年因乙肝感染相關肝硬化或肝癌死亡人數近30萬人，占全球乙肝感染相關死亡的37%～50%。盡管我國實施了以預防為主的綜合性防控策略，使乙肝新發感染率顯著下降，得到國際社會的普遍肯定[9]，但我國乙肝患者基數大，慢性乙肝相關的醫療問題仍較為突出。其中，乙肝病毒感染導致的肝纖維化是慢性乙肝管理的主要問題之一。乙肝感染后，在各種致病因素的作用下可促進肝星狀細胞的激活，通過旁分泌及自分泌機制促進炎癥介質的釋放和細胞外基質的大量沉積，在炎癥損傷及修復反應的共同作用下可最終導致肝硬化[10-11]。而肝硬化是不可逆的嚴重性肝臟疾病，大大增加了乙肝相關疾病負擔[12]。

近年來，隨著腸-肝軸理論的建立，研究指出肝纖維化的發展和腸道菌群間存在密切關系。鄭婷婷等[13]的研究探討了慢性乙肝及肝硬化患者的腸道菌群結構差異，研究采用糞便細菌基因組DNA提取試劑盒提取糞便腸道菌群DNA，同時應用16SrDNA測序技術檢測腸道菌群，研究顯示慢性乙肝患者中擬桿菌門豐度顯著高于健康人，肝硬化患者中變形菌門豐度顯著高于健康人，而普氏菌屬、噬膽菌屬、Blautia屬豐度相比健康人減少。目前研究認為，腸道菌群失調致肝纖維化機制主要和腸道屏障功能破壞，腸壁通透性增加及內毒素生成增多有關[14-15]。當腸道菌群失衡后，細菌及其產物易移位至門靜脈，激活肝細胞中的Toll樣受體信號，進而導致炎癥和氧化應激反應，促進了肝纖維化的發展。同時，腸道菌群失活后導致內毒素生成增多，而過多的內毒素需要肝臟解毒，因此，當超過肝臟自身的代償能力后便會引起肝臟損傷。同時，過多的內毒素可通過腸源性感染促進肝纖維化的發展。

以往研究指出，益生菌可維持、恢復胃腸道屏障的完整性，增強腸道黏膜屏障功能，降低腸黏膜通透性，以阻止內毒素入血，減輕對肝功能的損害。對此，本研究探討了益生菌治療在改善慢性乙肝患者腸道菌群、肝功能及肝纖維化中的作用，并發現3個月的益生菌治療可提高慢性乙肝患者腸道有益菌含量，包括雙歧桿菌及乳酸桿菌，并使條件致病菌含量下降。此外，干預前，2組患者肝功能均受到不同程度的影響，可能由于本研究納入的慢性乙肝患者平均病程為(2.49±1.37)年，隨著感染時間的延長，導致被感染的肝細胞逐漸增多，而相應宿主對受感染細胞的免疫反應導致肝臟受損范圍擴大，廣泛肝細胞損傷、修復等最終導致慢性乙肝患者肝功能的異常[16]。在進行益生菌治療后，觀察組患者肝功能指標(AST、ALT、TBIL)及肝纖維指標(HA、LN、PCIII、IV-C)均顯著下降，肝功能得到改善。以往研究得到了和本研究相似的結論。例如，Xia等[17]的研究將益生菌(丁酸梭菌聯合嬰兒雙歧桿菌)應用于肝硬化患者中，共持續3個月，結果指出益生菌治療組患者腸道優勢菌顯著增多，包括梭狀牙孢桿菌及雙歧桿菌，而腸球菌及腸桿菌則顯著減少。此外，Wang等[18]的研究中指出益生菌治療可降低丙氨酸及天冬氨酸水平，改善患者的肝功能。這可能由于益生菌可減少由于腸道菌群紊亂對肝功能造成的損害，改善肝纖維化過程；同時益生菌也可有效地改善腸道菌群構成，改善患者的新陳代謝，減少內毒素對肝臟造成的損害，從而減緩或阻止慢性乙肝患者的肝纖維化過程，并最終改善肝功能[19]。

綜上所述，益生菌治療在改善慢性乙肝患者腸道菌群、肝功能及肝纖維化中具有重要作用，可在臨床中進行進一步應用。