一例種鴨場沙門氏菌和大腸桿菌混感的臨床診治

劉存霞 張華 盛媛 劉麗萍 劉娜 田雪 路曉 吳靜 劉玉山 王林 宋敏訓

摘? 要：雛鴨沙門氏菌病是由沙門氏菌感染引起的一種急性流行性傳染性疾病，具有很高的致死率。某種鴨場臨床上出現雛鴨零星死亡，采食量下降，剖檢可見漿膜炎、包心包肝、肝臟腫大出血、脾臟出血壞死，送檢樣品經細菌分離、鏡檢、PCR檢測，鑒定為沙門氏菌、大腸桿菌混合感染，根據藥敏試驗結果，聯合使用頭孢曲松鈉、氟苯尼考治療，效果顯著。

關鍵詞：鴨;沙門氏菌;大腸桿菌;混感

中圖分類號：S858.32???? 文獻標識碼：C???? 文章編號：1673-1085（2020）3-0040-03

沙門氏菌?。⊿almonellosis）是由腸桿菌科一個重要菌屬沙門氏菌屬（Salmonella）感染人和各種動物引起的慢性和急性疾病的總稱[1，2]。被沙門氏菌污染的家禽及其他產品可以經食物鏈傳播給人，造成人的食物中毒，嚴重者甚至死亡[3]。沙門氏菌在成年家禽體內主要以隱性感染存在，通常不表現出明顯的臨床癥狀而長期帶菌垂直傳播，目前，我國防控沙門氏菌的核心方法仍是種群凈化，以防止病原進入種禽場生產鏈導致后代禽群受感染[4，5]。近年來隨著種鴨養殖產業不斷向集約化、規?；较虬l展，易發生沙門氏菌及大腸桿菌混感，給養殖企業造成不可挽回的經濟損失。

1? 材料與方法

1.1? 試劑? Simply P病毒DNA/RNA共提取試劑盒購自杭州博日科技有限公司，HiScript II One Step RT-PCR Kit購自Vazyme公司（南京諾唯贊生物科技有限公司），藥敏試劑片購自溫州市康泰生物科技有限公司，雞白痢血清平板凝集標準抗原購自青島易邦生物工程有限公司。

1.2? 臨床癥狀及剖檢? 2019年11月，某種鴨場的雛鴨自7日齡免疫鴨黃病毒及鴨肝炎疫苗后出現大面積死亡，采食量略有下降，伴有少量呼吸道癥狀，同場父母代種蛋鴨產蛋量由90%下降至80%，孵化率下降。送檢10日齡病死鴨，雛鴨瘦弱，剖檢可見漿膜炎、包心包肝、脾臟出血壞死，肝臟腫大有出血，見圖1、圖2、圖3。

1.3? 樣品采集與處理? 采集病死雛鴨的病變肝臟、腦組織，孵化器中的死胚和飲水進行細菌分離。取病死鴨的肝臟、脾臟、腦組織按體積1：4加入無菌生理鹽水研磨，加入終濃度1000U雙抗，4℃作用2h，凍融3次，8000rpm/min離心10min取上清-20℃保存備用。另外采集種鴨、雛鴨血液分離血清，4℃保存備用。

1.4? 細菌分離培養? 取病變肝臟、脾臟無菌條件下用接種環挑取組織涂5%血清LB平板;鴨腦無菌剝離頭蓋骨，挑取腦中組織涂于5%血清LB平板;死亡胚胎外表用75%酒精消毒，無菌取卵黃液，接種于5%血清LB平板，37℃培養過夜，取200μL水樣涂5%血清LB平板，分離的細菌進行鏡檢及PCR檢測。

1.5? 血清學檢測? 將采集分離的種鴨、雛鴨血清樣本利用平板凝集試驗檢測沙門氏菌抗體。

1.6? PCR檢測

1.6.1? 病料檢測? 取處理勻漿液200μL，按Simply P病毒DNA/RNA共提取試劑盒操作說明提取核酸，用實驗室設計合成的檢測引物分別檢測鴨肝炎病毒、鴨黃病毒、鴨呼腸孤病毒、腺病毒、鴨圓環病毒、鴨瘟病毒。

1.6.2? 細菌檢測? 利用PCR方法對分離的細菌進行沙門氏菌、鴨疫里默氏桿菌和大腸桿菌檢測。

1.7? 藥敏試驗? 取細菌分離培養的單菌落，以生理鹽水稀釋后涂布于5%血清LB平板上，選取克林霉素、林可霉素、丁胺卡那、恩諾沙星、氟苯尼考、頭孢噻肟、頭孢曲松、紅霉素藥敏片貼于平板上，37℃培養過夜，用游標卡尺量取抑菌圈直徑。

2? 結果與分析

2.1? 細菌分離及血清學檢測結果? 從肝臟、腦、死胚卵黃中均分離出細菌，見圖4。

其中從死胚卵黃中分離到兩種大小、形態不同的細菌，經革蘭氏染色，均為陰性桿菌。飲用水細菌分離為陰性。經過平板凝集方法檢測種鴨、雛鴨血清樣本均為陰性。

2.2? PCR檢測結果? 肝臟、脾臟和腦組織檢測鴨肝炎病毒、鴨黃病毒、鴨呼腸孤病毒、腺病毒、鴨圓環病毒、鴨瘟病毒均為陰性;死胚卵黃中分離到的兩種細菌經檢測分別為沙門氏菌和大腸桿菌陽性，病死雛鴨肝臟和腦中分離到的細菌經檢測均為大腸桿菌陽性。

2.3? 藥敏試驗? 取本實驗室分離到的沙門氏菌和大腸桿菌，分別用克林霉素、林可霉素、丁胺卡那、恩諾沙星、氟苯尼考、頭孢噻肟、頭孢曲松、紅霉素進行藥敏試驗。結果顯示，氟苯尼考、頭孢噻肟、頭孢曲松、丁胺卡那為高度敏感，見表1、表2所示。

2.4? 治療? 根據藥敏試驗結果，聯合使用頭孢曲松鈉、氟苯尼考進行治療，療效較顯著，病死率逐漸下降。推薦加強種蛋入孵前的消毒及孵化器清潔消毒，取得了很好的效果。

3? 討論

種禽場沙門氏菌病是一種危害非常嚴重的細菌性傳染性，因其是一種條件致病菌，且可垂直傳播也可水平傳播，給該病的防控帶來較大困難。目前，該病的防控主要通過持續不斷的檢疫和淘汰沙門氏菌陽性種禽來完成種禽場凈化。該種禽場一直嚴格按照標準化生產模式管理，此次雛鴨出雛后即出現大量弱雛，7日齡免疫后死亡率突然增高，經核酸檢測，鴨肝炎病毒、鴨黃病毒、鴨呼腸孤病毒、腺病毒、鴨圓環病毒、鴨瘟病毒均為陰性，從肝臟和腦中分離到大腸桿菌。進而對種鴨、孵化設施、飲水、死胚進一步檢測，結果從死胚中分離到沙門氏菌和大腸桿菌，推測孵化過程中存在沙門氏菌、大腸桿菌混合感染。根據藥敏試驗結果聯合使用頭孢曲松鈉和氟苯尼考，療效較顯著。通過加強種蛋入孵前的消毒及孵化器清潔消毒，使該病得到有效控制。

綜上所述，做好種禽場種源輸入檢疫、嚴格的生產管理及衛生消毒對防控鴨沙門氏菌傳播具有重要意義。

參考文獻：

[1]? 齊靜，王守榮，李蘭波，等.山東省肉鴨沙門氏菌的分離鑒定及敏感抗菌藥物的篩選[J].中國畜牧獸醫，2014，41（07）：216-220.

[2]? 曲歌，沙萬里，高雪，等.吉林地區規模化豬場大腸桿菌和沙門氏菌性仔豬腹瀉流行情況調查[J].安徽農業科學，2020，48（03）：89-90+100.

[3]? 王菲，張玲，楊佳怡，等.基于實時熒光定量PCR檢測的沙門氏菌標準物質驗證研究[J/OL].食品與發酵工業：1-9[2020-03-17].https：//doi.org/10.13995/j.cnki.11-1802/ts.022950.

[4]? 王紅寧.蛋雞沙門氏菌病凈化研究[J].中國家禽，2012，34（01）：37.

[5]? 盧國強.種雞場雞白痢沙門氏菌病的凈化[J].北方牧業，2019（16）：26-27.

基金項目：山東省農業科學院青年科研基金（2015YQN54）;山東省現代農業產業技術體系家禽產業創新團隊（SDAIT-11-01）;山東省農業科學院農業科技創新工程（CXGC2016A10）;山東省農業科學院農業科技創新工程學科團隊（CXGC2018E11）。

作者簡介：劉存霞（1980-），女，山東東營人，博士，副研究員，主要從事動物分子病毒學及流行病學研究，E-mail：liucunxia9@163.com。

通訊作者：宋敏訓（1963-），男，研究員，主要從事家禽免疫與防控技術研究，E-mail：mxsong@aliyun.com。