UPLC-MS/MS法測定杜仲茶中3種農藥殘留量

何宗桃 鄧軍 肖成忠 黎秀鳳

摘 要：應用超高效液相色譜-串聯質譜法（UPLC- MS/MS）建立了啶蟲脒、吡蟲啉、氯蟲苯甲酰胺3種農藥在杜仲茶中的殘留分析方法。樣品用乙腈勻漿提取，石墨化碳黑復合氨基柱（Carbon/NH2）凈化，UPLC-MS/MS檢測，外標法（ESTD）定量。在0.005～0.500 mg/L質量濃度范圍內，3種農藥的儀器響應值與質量濃度呈良好線性關系（線性回歸系數R>0.998）;在3個添加水平下（0.01、0.05和0.10 mg/kg）的平均回收率為90.0%～99.5%，相對標準偏差（n=5）為3.29%～10.57%，定量限為0.5 μg/kg。該方法簡便快速、靈敏度高、重復性好，適用于檢測杜仲茶中3種農藥的殘留量。

關鍵詞：超高效液相色譜-串聯質譜法;杜仲茶;啶蟲脒;吡蟲啉;氯蟲苯甲酰胺;農藥殘留

中圖分類號：S481.8文獻標識碼：A文章編號：1006-060X（2020）03-0071-03

Abstract： An analytical method using ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry （UPLC-MS/MS） was developed for analysis of 3 kinds of pesticide residues i.e.， acetamiprid， imidacloprid and chlorantraniliprole， in Eucommia ulmoides tea. The samples were extracted by acetonitrile homogenate， purified by Carbon/NH2， detected by UPLC-MS/MS and quantified by external standard method （ESTD）. In the range of 0.005-0.500 mg/L， there was a good linear relationship between the instrument response value and the mass concentration of three pesticides （linear regression coefficient R > 0.998）; the average recovery obtained from 3 spiked concentrations （0.01，0.05 and 0.10 mg/kg） was 90.0% ～ 99.5%， the relative standard deviation （n = 5） was 3.29%-10.57%， and the quantitative limit was 0.5 μg/kg. The method is simple， rapid， sensitive and reproducible， and is suitable for the determination of three pesticide residues in Eucommia ulmoides tea.

Key words： UPLC-MS/MS; Eucommia ulmoides tea; acetamiprid; imidacloprid; chlorantraniliprole; pesticide residues

杜仲是第四紀冰川侵襲后殘留下來的古老珍稀樹種，是我國名貴的滋補中藥材，被譽為“植物黃金”，有補益肝腎、強筋壯骨、調理沖任、固經安胎的功效[1]。杜仲茶是以杜仲葉為原料，經傳統茶葉加工及中藥飲片加工方法制作而成的健康飲品，品味微苦而回甜上口，其有效成分、藥理作用與杜仲皮相似[2]。近年來，張家界慈利縣大力發展杜仲產業，利用杜仲木材、樹皮、葉、花、果等生產高附加值產品，被譽為“中國杜仲之鄉”，種植面積已達1萬hm2以上[3-4]。伴隨著杜仲產業規模化發展，大面積集中連片種植導致病蟲草害日漸嚴重，種植過程中農藥等化學藥劑用量逐年上升，杜仲的產量和品質受到一定的影響[5-6]。目前，杜仲中農藥殘留的測定通常采用氣相色譜法，測定的農藥種類主要為有機氯和擬除蟲菊酯類[7-10]，利用超高效液相色譜串聯質譜法（UPLC- MS/MS）測定杜仲茶中農藥殘留的報道較少見。為此，筆者建立一種利用UPLC- MS/MS測定杜仲茶中啶蟲脒、吡蟲啉、氯蟲苯甲酰胺等殺蟲劑基質效應和殘留量的方法。該方法操作簡單，準確度和精密度均符合殘留分析要求，可以作為杜仲茶企業生產過程中質量控制和農產品質量安全質檢機構農殘檢測的方法之一。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試杜仲茶由慈利縣江埡鎮茶葉專業合作社提供。主要試劑有啶蟲脒、吡蟲啉、氯蟲苯甲酰胺標準品，均由環境保護部標準樣品研究所提供，濃度均為100 mg/L;乙腈、甲醇、甲苯，均為色譜純。主要儀器設備有超高效液相色譜三重四級桿串聯質譜儀（Waters UPLC-Xevo TQD，Maslynx;ESI源;C18柱2.1 mm×100 mm，1.7 μm）;TG20M高速離心機，RE-2000A旋轉蒸發儀，TP2200電子天平，FA25高速組織搗碎機，Carbon/NH2柱（Aglilent， 500/500 mg，6 mL），微孔濾膜（尼龍，13 mm×0.2 μm）。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準品配置 （1）標準溶液配置：取1個5 mL容量瓶，將濃度為100 mg/L的3種農藥標準品用甲醇定容配置成10 mg/L的混合儲備液。（2）標準工作液配置：分別用甲醇和基質液將混合儲備液逐級稀釋成濃度為5、10、50、100、500 μg/L的溶劑標準工作液和基質標準工作液。

1.2.2 基質效應分析 （1）基質效應測定：液相色譜質譜法檢測農藥殘留時普遍存在基質效應[11-13]，研究采用相對響應值法對基質效應進行評價，公式為ME（%）=（A/B）×100，式中，ME為基質效應，A為基質標準工作液響應值，B為甲醇中同濃度標樣工作液響應值。（2）基質效應評價：當ME為80%～120%時為弱基質效應;當ME為50%～80%或120%～150%時為中等基質效應;當ME≤50%或≥150%時為強基質效應;當ME<100%時表現為基質抑制效應，當ME>100%時表現為基質增強效應。

1.2.3 樣品處理 （1）預處理：將杜仲茶樣品放入粉碎機中粉碎，過425 μm網篩并混勻。（2）前處理：準確稱取10.00 g已處理好的杜仲茶樣品于100 mL離心管中，加入20 mL乙腈，在高速組織搗碎機上以15 000 r/min勻漿提取1 min，4 200 r/min離心5 min，移取5 mL上清液（相當于2.5 g樣品）于已預淋洗的Carbon/NH2柱上，用15 mL乙腈與甲苯的混合溶液（體積比為3∶1）分3次洗脫凈化柱，收集全部濾液于雞心瓶中，45℃水浴旋轉濃縮近干，用甲醇定容至2 mL，過0.22 μm微孔濾膜后待測。

1.2.4 色譜條件 色譜柱：C18柱;柱溫：40℃;流動相A：甲醇;流動相B：水;流速：0.25 mL/min;進樣體積：1 μL;洗脫條件見表1。

1.2.5 質譜條件 電噴霧離子源：ESI+;毛細管電壓：3.0 kV;離子源溫度：110℃;脫溶劑氣溫度：500℃;錐孔氣流量50 L/h;脫溶劑氣流量900 L/h;多反應監測模式（MRM）;采用手動調諧方式，對錐孔電壓和碰撞能量進行優化。

1.2.6 方法驗證 （1）基質標的線性范圍：在試驗色譜-質譜條件下，測定用杜仲茶基質配置的5、10、50、100、500 μg/L系列基質混標，以各種農藥的質量濃度（mg/L）為橫坐標，相對應的定量離子對峰面積為縱坐標繪制標準曲線。（2）方法的準確性和可靠性：以杜仲茶為材料，對3種農藥進行0.01、0.05、0.10 mg/kg這3個水平的添加回收試驗，每個水平5次重復，考察優化后檢測分析方法的準確性和可靠程度。

2 結果與分析

2.1 檢測條件優化

在ESI+模式下，完善毛細管電壓、離子源溫度、錐孔氣流量、脫溶劑氣流量、脫溶劑氣溫度等參數，以全掃描（MS）模式確定母離子峰，以子離子掃描（MSMS）模式確定子離子，采用手動調諧方式，對錐孔電壓和碰撞能量進行優化。最后在多反應監測（MRM）模式下對各項參數進行優化，達到最佳監測條件，最終確定質譜參數，具體詳見表2。

2.2 基質效應評價

3種農藥在杜仲茶中的基質效應均小于100%（見表3），按照1.2.2中的評價方法，其中啶蟲脒和氯蟲苯甲酰胺的基質效應在80.3%～84.5%之間，屬于弱基質抑制效應，吡蟲啉的基質效應在68.5%～70.16%之間，屬于中等基質抑制效應。需要采用基質匹配標液法補償基質效應的影響。

2.3 方法的穩定性

2.3.1 基質標的線性范圍 由表4可知，啶蟲脒、吡蟲啉和氯蟲苯甲酰胺3種農藥的出峰時間分別為5.36、5.04和7.07 min，基質標準曲線均具有良好的線性關系，相關系數（R）分別為0.998 5、0.999 5和0.998 3。

2.3.2 方法的回收率、精密度與定量限 由表5可知，3種農藥的加標回收率在90.0%～99.5%之間，RSD在3.29%～10.57%之間，滿足杜仲茶中3種農藥殘留量的定性定量分析要求。空白樣品、基質標液和添加回收樣品色譜圖見圖1，色譜圖的峰形良好，無雜質干擾。按色譜峰信噪比（S/N）的10倍計算出3種農藥在杜仲茶中理論上的定量限，再根據理論定量限進行相適應的添加回收率試驗，結果證實信噪比均大于10，3種農藥的定量限均為0.5 μg/kg。

3 結論與討論

研究建立了一種使用超高效液相色譜串聯質譜同時測定杜仲茶中3種農藥殘留量的方法，并對方法進行了優化和驗證。樣品用乙腈提取，Carbon/NH2小柱凈化，UPLC-MS/MS檢測。結果表明，在0.005～0.500 mg/L質量濃度范圍內，3種農藥的儀器響應值與質量濃度呈良好線性關系，線性回歸系數R為0.998 3～0.999 5;當3種農藥的添加水平為0.01～0.10 mg/kg時，回收率在90.0%～99.5%之間，RSD在3.29%～10.57%之間， 定量限均為0.5 μg/kg，符合農藥殘留分析要求。該方法簡便快速、靈敏度高、重復性好，可廣泛應用于杜仲茶中吡蟲啉、啶蟲脒和氯蟲苯甲酰胺等3種殺蟲劑殘留量的檢測。

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（責任編輯：成 平）