豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體水平測定與分析

（福建省寧德市動物疫病預防控制中心，福建寧德 352100）

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS），是一種由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）誘發(fā)的急性、高度接觸性傳染病，也稱為“豬藍耳病”，該病主要引起妊娠母豬繁殖障礙以及仔豬的呼吸道癥狀[1]。PRRS于1987年在美國首次被發(fā)現(xiàn)，于1991年在荷蘭首次分離出病毒，世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為B類傳染病；在我國于1996年首次被發(fā)現(xiàn)，并于2006年在全國20多個省份呈暴發(fā)式流行，我國將該病列為一類動物傳染病，在2008年將其列入我國強制免疫接種病種。

自從2017年國家取消對豬藍耳病的強制免疫以及2018年8月非洲豬瘟傳入我國之后，由于疫苗費用及生物安全等因素，大部分豬場工作重心都有所轉移，致使豬藍耳病有抬頭的趨勢。

鑒于豬藍耳病為免疫抑制性疾病，感染該病的豬群極易繼發(fā)細菌性疾病，導致死亡率驟升，從而造成很大的經濟損失。為了解在取消強制免疫之后豬藍耳病的免疫狀況，準確掌握豬群的豬藍耳病免疫抗體水平，筆者對福建省寧德市2017年秋至2019年春季豬藍耳病免疫抗體進行監(jiān)測，同時對結果進行分析，以便及時發(fā)現(xiàn)工作中存在的問題，為今后更好地開展疫病防控工作提供參考依據。現(xiàn)將免疫抗體監(jiān)測結果作如下報告。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源

在福建省寧德市9縣（市、區(qū)）規(guī)模豬場內隨機抽取78場（次），共采集1 230份豬全血，冷藏送至實驗室，分離血清，4℃保存待檢。豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗，由齊魯動物保健品有限公司及上海海利生物技術股份有限公司生產；豬繁殖與呼吸綜合征弱毒疫苗，由勃林格殷格翰動物保健品有限公司及哈爾濱維科生物技術開發(fā)公司生產。

1.1.2 檢測試劑

豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體ELISA檢測試劑盒，購自北京愛德士元亨生物科技有限公司。

1.1.3 主要設備

高速臺式冷凍離心機，SW-CJ凈化工作臺，電熱恒溫培養(yǎng)箱，酶標儀，可調微量移液器。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法

按照GB/T 18090-2008，使用間接ELISA方法進行檢測，結合檢測試劑盒使用說明書進行。

1.2.2 結果判定

試驗成立條件，即陽性對照平均OD650－陰性對照平均OD650≥0.150，而且陰性對照平均OD650≤0.150。結果用S/P表示，S/P＝[（樣品OD650－陰性對照平均OD650）]/[（陽性對照平均OD650－陰性對照平均OD650）]＊100。S/P＜0.4表示陰性，S/P≥0.4表示陽性。

2 結果與分析

2.1 豬藍耳病整體免疫抗體陽性率

由表1可以看出，自2017年秋至2019年春，從9個縣（市、區(qū)）共采集樣品1 230份，其中陽性樣品1 045份，平均陽性率為84.96%。G縣的陽性率最高，為93.33%；陽性率最低的是H縣，為70.00%。各縣（市、區(qū)）免疫抗體陽性率均達到國家規(guī)定的陽性率（70%）以上，說明該病整體免疫水平較為良好，但各縣（市、區(qū)）之間的抗體水平差異較為明顯。

表1 2017年秋至2019年春各縣 （市、區(qū)）豬藍耳病免疫抗體陽性率

2.2 各縣 （市、區(qū)）豬藍耳病免疫抗體陽性率

自2017年秋至2019年春，共采集血液樣品4次，分別為270份、270份、420份、270份；除2018年秋以外，每個縣（市、區(qū)）采集的樣品均為30份。由圖1可以看出，這4批樣品中，不同縣（市、區(qū)）檢測得到的陽性率均不盡相同；部分縣（市、區(qū)）4次檢測所得抗體合格率也存在明顯差異，這說明了其免疫水平不夠穩(wěn)定，而且C、E、H 3縣的免疫抗體合格率均有低于國家規(guī)定標準（70%）的情況出現(xiàn)，需要引起重視。

2.3 4批次豬藍耳病病毒免疫抗體檢測結果

由表2可以看出，2017年秋豬藍耳病免疫抗體陽性率為87.41%；2018年春豬藍耳病免疫抗體陽性率為86.67%；2018年秋豬藍耳病免疫抗體陽性率為85.00%；2019年春豬藍耳病免疫抗體陽性率為80.74%。4批次抗體均達到農業(yè)農村部規(guī)定的70%以上合格率的標準。

表2 2017年秋至2019年春豬藍耳病免疫抗體檢測結果

2.4 豬藍耳病一免與二免抗體陽性率比較

根據采樣單，此4批次共1 230份豬血清樣品中，有745份僅免疫1次，剩余485份免疫2次。一免樣品的豬藍耳病抗體平均陽性率為77.72%，二免樣品的豬藍耳病抗體平均陽性率為96.08%。可以看出，免疫2次后豬藍耳病抗體平均陽性率高于免疫1次，而且二者的抗體平均陽性率差異極顯著（＜0.01） （表 3）。

2.5 豬藍耳病滅活苗與弱毒苗免疫效果比較

在1 230份豬血清樣品中，有410份豬血清樣品來自采用滅活苗免疫的豬只，剩余的820份血清樣品來源的豬只采用弱毒苗免疫。滅活苗免疫的樣品豬藍耳病抗體平均陽性率為83.41%，弱毒苗免疫的樣品豬藍耳病抗體平均陽性率為86.59%。可以看出，滅活苗免疫后豬藍耳病抗體平均陽性率略高于弱毒苗免疫后豬藍耳病抗體平均陽性率，二者的抗體平均陽性率差異不顯著（＞0.05） （表 4）[2]。

3 討論

豬藍耳病與豬瘟、口蹄疫一樣，是當前豬場流行的主要傳染病之一，對養(yǎng)殖業(yè)來說，該病極具毀滅性。2008—2017年，國家對豬藍耳病實行強制免疫。雖然2017年后該病退出強制免疫，但不代表著豬藍耳病消失，廣大養(yǎng)殖場（戶）切不可掉以輕心。豬藍耳病主要引起懷孕母豬的流產，及豬群整體（特別是仔豬）的呼吸系統(tǒng)疾病。豬藍耳病病原為豬藍耳病病毒，是一種易重組、變異頻率高的RNA病毒。該病毒極易引起豬群免疫抑制，從而引起繼發(fā)性感染，促使死亡率增高。在非洲豬瘟流行環(huán)境下，為提高豬群整體抵抗力，規(guī)模豬場更應當繼續(xù)按照早前國家制定的強制免疫計劃、方案進行免疫。

表3 豬藍耳病一免與二免抗體陽性率比較

表4 豬藍耳病滅活苗與弱毒苗免疫抗體陽性率比較

按照國家免疫計劃要求，我市于2017年開始取消了對豬藍耳病的強制免疫。本文選取2017年秋季以來我市規(guī)模豬場進行監(jiān)測及分析，用以了解強制免疫取消后我市豬藍耳病免疫情況。

從以上檢測及統(tǒng)計分析結果可以看出，對采集的1 230份豬血清樣品進行免疫抗體水平檢測，結果顯示全市豬藍耳病免疫抗體平均水平為84.96%，雖然達到農業(yè)農村部規(guī)定的免疫抗體合格率最低要求（70%），但E、H兩縣平均抗體合格率僅74%、70%，未達到我省早前所規(guī)定“春秋防期間，免疫抗體合格率需要達到80%”的要求。此外，各縣（市、區(qū)）陽性率參差不齊，存在一定差異。如C、E、H等3縣，豬藍耳病合格率最高時分別達到96.67%、96.67%、93.33%，最低時僅有46.67%、33.33%、53.33%，差異顯著，存在重大動物疫情漏洞，作為疫控工作人員，需引起注意，及時提醒相關養(yǎng)殖場（戶）人員，及時補免。

本研究對全市9個縣（市、區(qū)）從2017年秋至2019年春，分4批次抽血、檢測。雖然每次檢測所得豬藍耳病平均抗體合格率均在80%以上，但是通過觀察可以發(fā)現(xiàn)：豬藍耳病平均抗體合格率從2017年秋的87.41%，到2019年春的80.74%，一直處于下降狀態(tài)，且隨著時間的推移，下降的幅度越來越大。這可能與以下兩個方面的原因有關：一方面，隨著國家對豬藍耳病強制免疫取消的時間推移，部分養(yǎng)殖場（戶）人員思想上有所松懈，認為該病免疫不再重要，造成免疫效果不佳；另一方面，從2018年秋季開始，全國暴發(fā)非洲豬瘟疫情，使得各養(yǎng)殖場（戶）工作重心轉移至非洲豬瘟防控上，而無暇顧及豬藍耳病等疫病的防控與免疫。

就豬群豬藍耳病疫苗免疫次數而言，根據檢測結果分析可得，二免的血清樣品平均抗體陽性率比一免的血清樣品平均抗體陽性率高很多，差異極顯著。只免疫1次的血清樣品豬藍耳病平均抗體陽性率為77.72%，而進行2次免疫后平均抗體陽性率迅速提升至96.08%，這說明在豬場實際生產活動過程中，一免的豬群免疫抗體合格率較二免而言，有所差距。此次監(jiān)測還發(fā)現(xiàn)，我市進行豬藍耳病二免的數量僅為39.43%；雖然一免的合格率能達到70%以上，但為提高豬群抵抗力及群體保護力，我們應當向廣大養(yǎng)殖場（戶）大力推廣二免，以提高免疫抗體合格率。

根據采樣調查表可以發(fā)現(xiàn)，相比豬繁殖與呼吸綜合征滅活苗，豬繁殖與呼吸綜合征弱毒苗在我市的使用范圍更廣。此次所采集的1 230份血清樣品中，有三分之二使用的疫苗為弱毒苗。檢測結果顯示，弱毒苗及滅活苗二者所得平均抗體陽性率分別為86.59%、83.41%，弱毒苗使用效果會比滅活苗效果好一些，但二者差異不顯著。弱毒苗具有免疫力強、效果好、持續(xù)時間長等優(yōu)點，多用來對母豬進行免疫，使新生仔豬獲得較多的母源抗體，從而能夠提高仔豬成活率。與此同時，由于減毒的原因使得抗原性減弱，會導致其免疫原性受到限制；也會由于減毒不夠徹底，導致臨床感染、免疫抑制。此外，母源抗體極易對弱毒苗的免疫過程產生影響。滅活苗不會有散毒、毒力返強而造成新疫源地的風險，安全性高；母源抗體對滅活苗的免疫過程影響極少；但其效果較弱毒苗差，持續(xù)時間也較短。總而言之，豬場在實際生產中應該根據豬群的藍耳病病毒感染情況、豬群階段等因素，而選擇使用弱毒疫苗或者滅活疫苗免疫。