核致密斑點型抗核抗體的臨床應用

戴 蕾，臧福宇，朱文波，鄭齊鍶，寧明哲，陶 月

0 引 言

抗核抗體(antinuclear autoantibodies，ANA)是臨床診斷系統性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)、干燥綜合征(Sj?gren′s syndrome)等自身免疫病重要的參考指標之一[1-3]。目前利用以人喉癌上皮細胞(HEp-2)為基質的間接免疫熒光法(IIF)檢測抗核抗體仍然是國內外公認的檢測抗核抗體的“金標準”[4-6]。研究人員于2014年在巴西召開的第12屆國際自身抗體及自身免疫學術會議上第一次制定了ANA熒光模型國際共識(international consensus on antinuclear antibody pattern,ICAP)，并明確提出了核致密斑點型(nuclear dense fine speckled，AC-2)。但目前AC-2的臨床意義仍未得到具體的闡述。本研究對我院檢出的AC-2及其臨床意義做簡要探討。

1 資料與方法

1.1 標本來源收集2019年1-3月在南京鼓樓醫院收治的門診或住院或體檢中心患者的抗核抗體檢測報告顯示為核致密斑點型的血清標本，共計19例，其中女18例，男1例，年齡25～73歲，中位數年齡29歲。血清標本在采集后2 h內送至檢驗科進行檢測。臨床診斷：不孕癥6例，肝損傷、妊娠、關節炎、體檢各2例，橋本甲狀腺炎、胃炎、發熱待查、腎功能受損、貧血各1例。

1.2 試劑抗核抗體譜(IgG)檢測試劑盒(歐蒙印跡法)、抗核抗體IgG試劑盒(間接免疫熒光法)、抗DFS-70抗體(IgG)試劑盒(歐蒙印跡法)均購自杭州歐蒙醫學科技有限公司。

1.3 實驗方法實驗均參照試劑盒說明書完成。 抗核抗體譜(IgG)和抗DFS-70抗體(IgG)試劑盒檢測完成后，將檢測膜條放置在結果判定模板中，風干后判讀結果。抗核抗體(間接免疫熒光法)檢測后，用EUROStar III Plus 熒光顯微鏡下(40×物鏡)觀察檢測結果,間接免疫熒光法以HEp-2和猴肝作為檢測基質。激發濾片：488 nm，分光濾鏡：510 nm，阻擋濾鏡：520 nm。

2 結 果

2.1 抗核抗體譜(IgG)檢測結果19例標本的抗核抗體譜(IgG)檢測結果中，無特異性抗體陽性的結果標本為17例，占89.47%。出現陽性結果的標本為2例，占10.53%，其中1例表現為抗多發性肌炎/硬皮病抗體(PM-Scl)陽性，另1例表現為抗著絲點蛋白B(CenpB)和抗合成酶抗體(Jo-1)陽性。見圖1。

圖1 2例抗核抗體譜陽性標本膜條結果

2.2 抗核抗體IgG檢測結果(HEp-2 IFA)19例患者標本HEp-2 IFA核型檢測結果均為AC-2，選取其中2例患者的抗核抗體IgG檢測結果(Hep-2 IFA)，見圖2a、圖2b。另選取一張細胞核細顆粒型(AC-4)和一張細胞核均質型(AC-1)作比對，見圖2c、圖2d。AC-2在猴肝基質片中無特殊熒光表現，見圖3a、圖3b，選取AC-4和AC-1的猴肝基質片圖像作比對，見圖3c、圖3d。

a-b：藍色箭頭所指的分裂期細胞在中間板層上呈致密顆粒分布，橙色箭頭所指的間期細胞呈顆粒樣分布且熒光不均勻；c：藍色箭頭所指的分裂期細胞中間板層無熒光染色；d：藍色箭頭所指的分裂期細胞中間板層呈均勻玻璃樣染色，橙色箭頭所指的間期細胞均勻染色圖2 AC-2、AC-4和AC-1在HEp-2細胞基質上的熒光表現

a-b：猴肝基質上未見明顯細胞特征；c：黃色箭頭示細胞核呈顆粒樣熒光；d：黃色箭頭示猴肝細胞呈均勻塊狀熒光圖3 AC-2、AC-4和AC-1在猴肝細胞基質上的熒光表現

2.3 抗DFS-70 抗體(IgG)檢測結果19例患者標本中，抗DFS-70 抗體(IgG)檢測結果均為陽性。見圖4。

圖4 抗DFS-70 抗體(IgG)檢測結果

3 討 論

抗核抗體AC-2，即核致密斑點，在ICAP的抗核抗體熒光模型命名和分類樹中，歸屬于抗核抗體細胞核型中的斑點型，其在IIF法檢測ANA的初期并未引起重視。隨著對ANA研究的不斷深入，研究人員發現并明確了這種和均質型及粗、細斑點型相似但存在差異的熒光模型。并在隨后的研究中發現了特定的自身抗體抗DFS70抗體，這進一步明確了核致密斑點型是一種獨立的熒光模型。

致密斑點型的典型形態特征為：間期細胞核呈現大小不一、熒光強弱不同、分布不均勻的熒光斑點。這些熒光斑點在間期細胞的某些地方分布密集，而在其它地方則分布疏松。細胞分裂中期，細胞中央板塊區則呈現強發光的斑點，并且呈粗顆粒狀[7-8]。值得注意的是，致密斑點型的間期形態容易與粗顆粒斑點型混淆，因為兩者在間期細胞內均有廣泛分布的顆粒熒光。同時，致密斑點型的分裂中期形態還易與均質型混淆，因為兩者均表現出分裂期細胞染色體發出強的濃縮熒光。由于以上的熒光模型特征，致密斑點型同均質型、粗顆粒斑點型，尤其是兩者混合的熒光模型不易分辨、容易混淆。

同時，根據本實驗研究結果，我們對核致密斑點型的熒光特征做如下補充：①間期細胞中顆粒分布相對均勻，但發光強度不均勻；②間期細胞核充滿顆粒且有清晰邊界；③核仁呈顆粒熒光，但是不會出現空洞；④猴肝片上不呈現熒光等。并且，ICAP官網中提供了四張圖譜，其中的三張圖譜的試劑盒來源為美國INOVA公司。本實驗室的ANA IgG抗體(IIF法)試劑盒來源為德國歐蒙公司，且有猴肝細胞基質片協助判斷，為實驗室工作人員學習AC-2的特征提供了參考。

在發現和命名AC-2致密斑點型后，研究人員開始嘗試明確致密斑點型ANA與自身免疫病的相關性，并探討該熒光模型與其他自身免疫病血清學指標的相關性[9-11]。目前，有國外報道存在AC-2核型ANA的人群不易患自身免疫病，其5年內自身免疫病的發病率低于其他ANA陽性的人群[12-15]。在本研究中，19例AC-2核型的患者，有6例均因不孕癥而就診。因此我們提出假說，AC-2核型與不孕不育有一定相關性。但受制于本研究的樣本數過少，此猜測尚需更多樣本量及臨床數據支持。目前，對于該熒光模型的臨床意義還未達成廣泛的共識。

綜上可以看出，致密斑點型的形態學不典型，在ICAP中，該核型雖然被規定為一級必報核型，但不同于均質型、粗顆粒斑點型以及細顆粒斑點型等常見熒光模型，致密斑點型對于檢驗人員的經驗有著更高要求。實驗室工作人員應加強讀片的訓練，為臨床提供準確及時的報告。