馬尾藻巖藻聚糖分離純化及其對(duì)小鼠黑尾血栓的效果

劉海韻，王維民，諶素華,*，呂佳桐，陳華英，廖森泰

（1.廣東海洋大學(xué)食品科技學(xué)院，廣東省水產(chǎn)品加工與安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 湛江 524088;2.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，廣東 廣州 510610）

馬尾藻屬于大型經(jīng)濟(jì)褐藻。研究表明褐藻含有巖藻聚糖[1]、褐藻多酚[2]、巖藻黃素[3]等多種生物活性成分，尤其是巖藻聚糖，具有保濕[4]、鎮(zhèn)痛[5]、抗菌[6]、抗血小板聚集[7]、抗氧化[8]、抗腫瘤[9]、抗癌[10]、抗獲得性免疫缺陷綜合征[11]、抗脂肪生成[12]、保肝[13]、保護(hù)神經(jīng)[14]、治療胃潰瘍[15]及肺結(jié)核[16]、免疫調(diào)節(jié)[17]等多種功效，具有較高的開(kāi)發(fā)價(jià)值。血栓是一種常見(jiàn)的血管疾病，血栓的形成與凝血系統(tǒng)息息相關(guān)。目前有不少關(guān)于巖藻聚糖抗血栓及抗凝血活性的報(bào)道，多集中在海帶、萱藻、裙帶菜等食用型褐藻[18-25]，對(duì)馬尾藻的研究報(bào)道甚少，廖敏等[26]通過(guò)體外溶栓實(shí)驗(yàn)、小鼠肺栓塞實(shí)驗(yàn)以及出血實(shí)驗(yàn)對(duì)馬尾藻巖藻聚糖初級(jí)純化組分F和次級(jí)純化組分F1進(jìn)行抗血栓活性評(píng)價(jià)，結(jié)果表明兩種純化組分均能降低肺栓塞模型小鼠的死亡率且顯著延長(zhǎng)出血時(shí)間。在此基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)擬采用DEAE C-52和Sepharose CL-6B柱層析法制得多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高的不同巖藻聚糖組分，建立小鼠黑尾模型以探究馬尾藻巖藻聚糖對(duì)黑尾長(zhǎng)度的抑制效果，并通過(guò)毛細(xì)管法測(cè)定凝血時(shí)間，為研究馬尾藻巖藻聚糖抗血栓活性提供進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論支持，同時(shí)為馬尾藻資源利用及巖藻聚糖生物活性深度開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

SPF級(jí)雄性KM小鼠，體質(zhì)量（18±2）g，日齡21～28 d，購(gòu)于北京華阜康生物科技股份有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2014-0004，購(gòu)回后自由攝食，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周。

亨氏馬尾藻，采摘于廣東省湛江市硇洲島附近海域。將采摘的新鮮馬尾藻除去爛葉、黃葉、根等不可食部分，反復(fù)用自來(lái)水沖洗干凈，用烘箱在50 ℃溫度烘干后粉碎，過(guò)80 目篩，干燥后裝袋貯藏備用。

巖藻糖等7 種單糖（分析標(biāo)準(zhǔn)品）、角叉菜膠（生化試劑）、Sepharose CL-6B瓊脂糖上海源葉生物科技有限公司;DEAE C-52纖維素北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限公司;質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.9% NaCl注射液 湖南科倫制藥有限公司;阿司匹林 江蘇平光制藥有限責(zé)任公司;氯吡格雷 樂(lè)普藥業(yè)股份有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

UX42OH電子天平、ATY1124電子分析天平 日本島津公司;Evolution300紫外分光光度計(jì) 美國(guó)熱電公司;1200高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）儀 美國(guó)安捷倫公司。

1.3 方法

1.3.1 不同馬尾藻巖藻聚糖組分的制備

初級(jí)純化組分（F）的制備：參考蔡璐[27]的方法，略有改動(dòng)。將干燥的馬尾藻粉用80 ℃熱水浸提，350 W超聲輔助，磷酸鹽緩沖液將pH值調(diào)節(jié)至6.0。粗提物使用乙醇沉淀，丙酮洗去雜質(zhì)，Sevag試劑脫蛋白，最后透析除去有機(jī)溶劑，45 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷凍干燥后得到馬尾藻巖藻聚糖硫酸酯的粗多糖，命名為F。

次級(jí)純化組分（FD1）的制備：參考廖敏[28]的方法，將DEAE C-52纖維素依次用0.5 mol/L NaOH溶液、0.5 mol/L HCl溶液、0.5 mol/L NaCl溶液進(jìn)行活化處理，蒸餾水反復(fù)洗滌除鹽后裝入層析柱（80 cm×2.6 cm），在距離柱口約10 cm處時(shí)停止裝柱，蒸餾水平衡24 h。將粗多糖F配制成15 mg/mL溶液，上樣量為20 mL，上樣后先用蒸餾水洗脫，流速為1 mL/min，流出的組分是中性多糖，棄去。接著用1.3 mol/L NaCl溶液洗脫，對(duì)應(yīng)洗脫出的組分命名為FD1。

次級(jí)純化組分（FS1）的制備：將Sepharose CL-6B瓊脂糖凝膠經(jīng)過(guò)蒸餾水反復(fù)洗滌干凈，用0.1 mol/L NaCl溶液攪拌均勻，裝入層析柱（100 cm×1.6 cm），在距離柱口約10 cm處停止裝柱，洗脫液（0.1 mol/L NaCl溶液）平衡24 h。將粗多糖F配制成3 mg/mL溶液，上樣量為10 mL，洗脫流速為1 mL/min，每2 min收集一管。苯酚硫酸法對(duì)糖洗脫峰進(jìn)行跟蹤監(jiān)測(cè)，以吸光度為縱坐標(biāo)，洗脫管數(shù)為橫坐標(biāo)，作洗脫曲線，將第一個(gè)洗脫峰對(duì)應(yīng)的組分命名為FS1。

1.3.2 馬尾藻巖藻聚糖化學(xué)組分質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定

多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定采用苯酚-硫酸法[29];巖藻糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定采用半胱氨酸鹽酸鹽法[30];硫酸基質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定采用氯化鋇-明膠比濁法[31];糖醛酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定采用咔唑比色法[32]。

1.3.3 馬尾藻巖藻聚糖單糖組成測(cè)定

HPLC條件：色譜柱ZORBAX Eclipse XDB-C18;紫外檢測(cè)波長(zhǎng)245 nm;柱流量1 mL/min;柱溫30 ℃;進(jìn)樣量10 μL;流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液（pH 6.74）-乙腈（83∶17，V/V）;pH 6.74。

1.3.4 角叉菜膠誘導(dǎo)小鼠黑尾實(shí)驗(yàn)

小鼠分組及操作：將適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后的130 只小鼠隨機(jī)分成13 組：空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥物（阿司匹林和氯吡格雷）組以及巖藻聚糖硫酸酯F、FD1和FS1各3 個(gè)濃度組，每組各10 只，分別給各組小鼠做好標(biāo)記，分組情況如表1所示。每次給藥100 μL/10 gmb，連續(xù)灌胃7 d，每天一次。灌胃期間每隔2 d給小鼠稱(chēng)一次體質(zhì)量。

表 1 小鼠分組及操作方式Table 1 Mouse grouping and operation procedure

試劑的配制：將阿司匹林和氯吡格雷用研缽研磨至粉末狀，參考趙偉等[33]的方法確定最終給藥量，分別稱(chēng)量好后用蒸餾水配制成30 mg/kg和11 mg/kg。準(zhǔn)確稱(chēng)量冷凍干燥后得到的馬尾藻巖藻聚糖F、FD1和FS1各個(gè)劑量所需的質(zhì)量后用蒸餾水溶解。角叉菜膠用生理鹽水配成質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。注射量為100 μL/10 g。

血栓模型的制備：第7天灌胃給藥1 h后，除空白組外其他各組小鼠腹腔注射質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%角叉菜膠。注射角叉菜膠后將動(dòng)物置于（17±2）℃環(huán)境中，因?yàn)樾∈箅y以在高于20 ℃的環(huán)境下出栓。期間正常進(jìn)食，之后觀察、測(cè)量和記錄小鼠注射角叉菜膠24、48、72 h后小鼠的黑尾長(zhǎng)度[34]。

1.3.5 馬尾藻巖藻聚糖對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響

作為衡量藥物體內(nèi)抗凝血活性的重要指標(biāo)之一，凝血時(shí)間是指血液離開(kāi)血管后在體外凝固所需的時(shí)間。

測(cè)定方法：采用毛細(xì)玻管法，待角叉菜膠注射72 h后，于室溫（15 ℃）下將除空白組外的其他組小鼠用毛細(xì)管（內(nèi)徑1 mm）于小鼠內(nèi)眥框后眼靜脈叢取血，至毛細(xì)管內(nèi)血柱達(dá)到5 cm開(kāi)始計(jì)時(shí)。每隔30 s將毛細(xì)玻管折斷約5～10 mm，觀察有無(wú)血凝絲出現(xiàn)。凝血時(shí)間即從毛細(xì)玻管采血到凝血出現(xiàn)的時(shí)間[35]。凝血時(shí)間延長(zhǎng)率按下式計(jì)算。

式中：ti為給藥組平均凝血時(shí)間/s;t0為模型對(duì)照組平均凝血時(shí)間/s。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 粗多糖F Sepharose CL-6B洗脫曲線

將粗多糖F經(jīng)過(guò)Sepharose CL-6B瓊脂糖凝膠柱，苯酚-硫酸法對(duì)洗脫管數(shù)的多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行跟蹤檢測(cè)，繪制的洗脫曲線如圖1所示。

圖 1 粗多糖Sepharose CL-6B洗脫曲線Fig. 1 Elution curve of the crude polysaccharide F on Sepharose CL-6B column

由圖1可以看出，粗多糖F經(jīng)過(guò)柱層析后，被分離成兩個(gè)不同的組分，分離度較好，從峰面積可以看出各組分的回收率差異明顯。考慮到后續(xù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)原料的消耗巨大，所以只對(duì)第一個(gè)峰所對(duì)應(yīng)的管數(shù)進(jìn)行合并收集，并命名為FS1。

2.2 馬尾藻巖藻聚糖化學(xué)組成分析結(jié)果

由表2可知，粗多糖F經(jīng)過(guò)DEAE C-52纖維素純化后得到的FD1多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)、硫酸基質(zhì)量分?jǐn)?shù)、糖醛酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)均有所提高，分別上升了4.827%、16.068%、5.493%，硫酸基質(zhì)量分?jǐn)?shù)提高十分明顯，而巖藻糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)則下降了8.954%。F經(jīng)過(guò)Sepharose CL-6B瓊脂糖凝膠層析后（FS1）多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)有明顯提高，提升了15.002%，硫酸基質(zhì)量分?jǐn)?shù)和巖藻糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)略有提高，分別為0.556%、4.419%，而糖醛酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)則明顯地下降了19.600%。F、FD1、FS1 3 個(gè)組分經(jīng)過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，采用柱層析的方式進(jìn)行次級(jí)純化均能提高巖藻聚糖多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)，即提高了純度，且瓊脂糖凝膠層析比纖維素離子交換層析的純化效果更為顯著。由于巖藻聚糖的主要成分是L-巖藻糖-4-硫酸酯，所以除了純度指標(biāo)外，對(duì)于巖藻糖和硫酸基的保護(hù)/破壞效果也是評(píng)價(jià)一種巖藻聚糖純化方式是否優(yōu)良的重要指標(biāo)。DEAE C-52纖維素的純化雖然能明顯提高巖藻聚糖硫酸基質(zhì)量分?jǐn)?shù)，但對(duì)巖藻聚糖的巖藻糖鏈破壞較為嚴(yán)重。而Sepharose CL-6B瓊脂糖凝膠對(duì)硫酸基的純化效果不明顯，但對(duì)巖藻糖鏈的保護(hù)很好，巖藻糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)略有提升，并且能極其明顯地降低糖醛酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)，綜合純化效果更好。

表 2 馬尾藻巖藻聚糖化學(xué)組成Table 2 Chemical composition of fucoidans from Sargassum

2.3 馬尾藻巖藻聚糖單糖組成分析結(jié)果

表 3 馬尾藻巖藻聚糖硫酸酯各組分單糖組成Table 3 Monosaccharide composition of fucoidans from Sargassum

圖 2 混合標(biāo)準(zhǔn)單糖HPLC圖Fig. 2 HPLC chromatogram of mixed monosaccharide standards

結(jié)合表3和圖2、3可以看出，3 種巖藻聚糖組分均不含阿拉伯糖。F經(jīng)過(guò)DEAE C-52纖維素層析后，F(xiàn)D1中的甘露糖、鼠李糖、木糖以及巖藻糖的比例明顯提高，而葡萄糖和半乳糖所占比例則分別下降了21.700%和8.652%。F經(jīng)過(guò)Sepharose CL-6B瓊脂糖凝膠純化后得到的FS1中的葡萄糖占比下降25.423%，巖藻糖占比上升23.569%。FS1與FD1相比，除了半乳糖和巖藻糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)有提升以外，其余種類(lèi)的單糖均有不同程度的下降。綜合分析，由于巖藻糖為巖藻聚糖的主要特征單糖，半乳糖為第二特征單糖，所以可以看出FS1是3 種巖藻聚糖中最純凈的組分。對(duì)比3 種組分的色譜圖，F(xiàn)D1的巖藻糖峰高和峰面積均小于其他2 種組分，說(shuō)明FD1的巖藻糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)最低，這和化學(xué)組成測(cè)定的結(jié)果一致。

圖 3 各巖藻聚糖組分HPLC圖Fig. 3 HPLC chromatogram of three fucoidans

2.4 馬尾藻巖藻聚糖硫酸酯對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響

表 4 實(shí)驗(yàn)前后小鼠體質(zhì)量的變化（n＝ 10）Table 4 Changes in body mass of mice (n= 10)

由表4可以看出，在7 d的灌胃期間，各組平均體質(zhì)量一直處在增長(zhǎng)狀態(tài)。其中，給藥各組體質(zhì)量增長(zhǎng)都稍低于空白組和模型對(duì)照組，但差異不明顯。在實(shí)驗(yàn)正式開(kāi)始前，各組間體質(zhì)量無(wú)明顯差異（P＞0.05）。灌胃7 d蒸餾水、陽(yáng)性藥物或馬尾藻巖藻聚糖后，各組體質(zhì)量都顯著增加（P＜0.05）。在最后一次給小鼠稱(chēng)體質(zhì)量時(shí)，給藥組的小鼠體質(zhì)量與空白組、模型對(duì)照組這兩組的體質(zhì)量沒(méi)有顯著性差異，說(shuō)明巖藻聚糖對(duì)小鼠的正常生長(zhǎng)不會(huì)造成影響。

2.5 馬尾藻巖藻聚糖硫酸酯對(duì)小鼠黑尾長(zhǎng)度的影響

表 5 巖藻聚糖硫酸酯對(duì)角叉菜膠引起的小鼠黑尾長(zhǎng)度的影響（n＝10）Table 5 Effect of fucoidans on carrageenan-induced black tail length of mice (n= 10)

由表5可以看出，注射角叉菜膠后，各組小鼠的黑尾長(zhǎng)度隨時(shí)間延長(zhǎng)略有增加，高劑量FD1組的小鼠黑尾長(zhǎng)度略有縮短，但縮短的程度不明顯。從表5中明顯可以看出注射角叉菜膠后的24、48 h和72 h不同組分的馬尾藻巖藻聚糖各劑量組的小鼠黑尾長(zhǎng)度均短于模型對(duì)照組，說(shuō)明馬尾藻巖藻聚糖可以抑制小鼠體內(nèi)血栓的形成并有預(yù)防作用。純化后的FD1和FS1抑制小鼠血栓的效果均比粗多糖顯著（P＜0.05或P＜0.01），F(xiàn)S1抑制血栓的效果優(yōu)于FD1，但差異不明顯。其中，F(xiàn)各劑量組的結(jié)果表明：隨著劑量的增加，小鼠黑尾的長(zhǎng)度有所縮短，表現(xiàn)出劑量依賴(lài)性，但無(wú)統(tǒng)計(jì)意義（P＞0.05）;FD1各組中，高劑量FD1組抑制效果極顯著（P＜0.01）;而FS1各劑量組抑制效果都極顯著（P＜0.01），其中，低劑量組的抑制效果最佳。另外陽(yáng)性藥物組中的氯吡格雷極顯著地縮短了小鼠的黑尾長(zhǎng)度，而阿司匹林抑制血栓的效果不明顯。FD1和FS1抗血栓的作用較粗多糖F的強(qiáng)，可能與其純度更高有關(guān)。

2.6 馬尾藻巖藻聚糖硫酸酯對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響

表 6 巖藻聚糖硫酸酯對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響（n＝ 10）Table 6 Effect of fucoidans on coagulation time of mice (n= 10)

由表6可以看出，與模型對(duì)照組相比較，不同組分的馬尾藻巖藻聚糖硫酸酯各劑量組均可延長(zhǎng)小鼠的凝血時(shí)間。粗多糖F各劑量組和FD1各劑量組凝血時(shí)間呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性，但粗多糖F低、中劑量組與模型對(duì)照組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而FD1和FS1各劑量組與模型對(duì)照組間有極顯著差異（P＜0.01），延長(zhǎng)凝血時(shí)間的效果FS1＞FD1＞F（P＜0.01）。模型對(duì)照組的凝血時(shí)間為（250.50±15.41）s，阿司匹林組，氯吡格雷組，F(xiàn)低、中、高劑量組，F(xiàn)D1低、中、高劑量組，F(xiàn)S1低、中、高劑量組（15、30、60 mg/kgmb）的凝血時(shí)間延長(zhǎng)率分別為12.77%、42.12%、7.58%、15.37%、27.25%、32.29%、48.75%、51.20%、57.19%、76.00%、72.60%。阿司匹林和氯吡格雷這兩種藥物的作用原理都是抗血小板聚集，它們都使血液不易凝固。雖然說(shuō)氯吡格雷的安全性跟阿司匹林的類(lèi)似，但其效力高于阿司匹林的。而馬尾藻巖藻聚糖硫酸酯可以延長(zhǎng)小鼠的凝血時(shí)間，可能與影響凝血系統(tǒng)有關(guān)。

3 討 論

本研究采用DEAE C-52纖維素和Sepharose CL-6B瓊脂糖凝膠對(duì)粗多糖F進(jìn)行進(jìn)一步純化，與廖敏等[26]所制備的巖藻聚糖純化組分相比，多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)均有較大幅度的提升，所占比均超過(guò)60%，最純凈的FS11甚至達(dá)到了近79%。

胡三覺(jué)等[36]開(kāi)發(fā)出的角叉菜膠誘導(dǎo)鼠尾部血栓模型，是利用其致炎作用而使機(jī)體產(chǎn)生血栓，該模型制備方法簡(jiǎn)單易操作，所需用到的造模試劑（角叉菜膠）也容易購(gòu)買(mǎi)，造模時(shí)在適宜的環(huán)境下即可實(shí)現(xiàn)較高的成功率。相對(duì)來(lái)說(shuō)，這一模型對(duì)動(dòng)物自身傷害不大，因?yàn)樵炷＿^(guò)程中動(dòng)物不會(huì)被殺害。由于小鼠尾部是單血管供血，血栓會(huì)出現(xiàn)在尾部，這利于操作者的觀察和測(cè)量，也便于動(dòng)態(tài)觀察血栓的形成過(guò)程。由于該實(shí)驗(yàn)需要小鼠尾部產(chǎn)生血栓，而低溫環(huán)境會(huì)引起血管收縮，即更容易出栓;但是，過(guò)低的溫度會(huì)給小鼠健康帶來(lái)危害，以至于嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，所以，對(duì)溫度的調(diào)控是本實(shí)驗(yàn)的核心問(wèn)題之一。一般鼠尾血栓模型采用皮下注射[37-40]角叉菜膠的方式造模，但小鼠的皮膚很薄，稍微用力即可刺穿，所以皮下注射具有一定的技術(shù)難度。本實(shí)驗(yàn)參考劉彥霞等[41]的研究，采用相對(duì)容易的腹腔注射進(jìn)行造模，取得了良好效果。研究凝血時(shí)間的過(guò)程中，最初采用的是摘眼球取血挑絲的方法，但在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)此法弊端較多。一是摘眼球容易產(chǎn)生溶血現(xiàn)象，造成血液無(wú)法凝固而產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)誤差;二是摘眼球會(huì)致死小鼠，死亡的小鼠血流速變慢，易造成出血不足的現(xiàn)象，使實(shí)驗(yàn)進(jìn)展受阻。所以，參考武桂娟等[35]的研究，在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中變更為毛細(xì)管法眼眶靜脈叢取血，避免了各種問(wèn)題。

綜上，雖然有相關(guān)研究報(bào)道了巖藻聚糖的生物活性與硫酸基質(zhì)量分?jǐn)?shù)有關(guān)，且FD1的硫酸基質(zhì)量分?jǐn)?shù)遠(yuǎn)高于FS1，但動(dòng)物實(shí)驗(yàn)卻表明FD1的活性卻弱于FS1的，究其原因，除了FD1純度沒(méi)有FS1高以外，也可能與巖藻糖和硫酸基比例有關(guān)。FD1的巖藻糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)低，所以很可能其所含硫酸基很大一部分并未與巖藻糖結(jié)合形成L-巖藻糖-4-硫酸酯，而FS1雖然硫酸基質(zhì)量分?jǐn)?shù)并不是特別高，但巖藻糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)突出，可能結(jié)合形成的L-巖藻糖-4-硫酸酯總量是要高于FD1的，所以導(dǎo)致FS1表現(xiàn)出更好的活性。

本研究探究了馬尾藻巖藻聚糖對(duì)小鼠尾血栓的抑制活性，并進(jìn)行了凝血實(shí)驗(yàn)，結(jié)果具有一定的成效，但要對(duì)馬尾藻巖藻聚糖抗血栓活性下定論還為時(shí)尚早，需要進(jìn)行更多諸如頸動(dòng)脈血栓模型、下腔靜脈模型、血瘀模型等一系列的血栓模型實(shí)驗(yàn)共同論證，并且并不局限于動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，還需要從血管內(nèi)皮細(xì)胞的分泌情況入手，探究馬尾藻巖藻聚糖的抗血栓機(jī)制。

4 結(jié) 論

對(duì)于各組巖藻聚糖組分的攝入并不會(huì)影響小鼠的體質(zhì)量，說(shuō)明巖藻聚糖是安全的。角叉菜膠誘導(dǎo)小鼠尾血栓形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同組分的馬尾藻巖藻聚糖各劑量組的小鼠黑尾長(zhǎng)度均短于模型對(duì)照組，表明巖藻聚糖可以抑制小鼠體內(nèi)血栓的形成并有預(yù)防作用。且純化后的FD1和FS1抑制小鼠血栓的效果均比粗多糖F更好。通過(guò)比較F、FD1及FS1的化學(xué)組成、單糖組成及抗血栓效果，可以推測(cè)巖藻聚糖的抗血栓活性與其多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)、巖藻糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)、硫酸基質(zhì)量分?jǐn)?shù)和單糖組成情況有密切關(guān)聯(lián)。多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)和特征單糖（巖藻糖）的占比共同反映了巖藻聚糖組分的純度，而巖藻糖和硫酸基的質(zhì)量分?jǐn)?shù)與比例則影響巖藻聚糖組分的活性。本研究結(jié)果表明巖藻聚糖能夠有效縮短角叉菜膠引起小鼠尾部血栓的長(zhǎng)度和延長(zhǎng)凝血時(shí)間，且純化組分FD1和FS1抗血栓效果優(yōu)于粗多糖F，F(xiàn)S1為最佳組分。