鹽度對虎斑烏賊幼體存活、生長及免疫的影響

沈曄 劉碧海 王興強 崔春輝 秦傳新

摘 要：虎斑烏賊（Sepia pharaonis）是熱帶和亞熱帶海區的頭足類軟體動物，具有重要的經濟價值。通過開展鹽度對虎斑烏賊幼體存活、生長及免疫的影響試驗，結果表明，虎斑烏賊幼體能夠適應的鹽度范圍很大，但當鹽度（鹽度17）過低時，幼體幾乎不能生存，活力不高、反應遲鈍直至死亡;鹽度對虎斑烏賊幼體的體重增長具有顯著的影響（P<0.05），幼體在高鹽（鹽度26～32）時的生長率較高，低鹽（鹽度20～23）環境下生長比較緩慢;不同鹽度對虎斑烏賊幼體的免疫調節也具有顯著的影響。當鹽度為20～23時，幼體超氧化物歧化酶的活性最高，鹽度29時相對較低;推測虎斑烏賊幼體的最適鹽度為26～28。

關鍵詞：虎斑烏賊;鹽度;存活率;生長率;免疫

中圖分類號 S917.4 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2020）07-0076-04

Abstract： Sepia pharaonis is a cephalopod of tropical and subtropical seas， which has important economic value. In this study， the effects of salinity on the survival， growth and immunity of squid larvae were studied. The results showed that the range of salinity that the larvae could adapt to was very large， but when the salinity was too low （salinity 17）， the larvae could hardly survive， with low activity， slow response and even death. Salinity had a significant effect on the growth of body weight（P<0.05）. The growth rate of larva was higher in high salt （salinity 26-32）， and slower in low salt （salinity 20-23）. Different salinity also had a significant effect on the immune regulation of larva. The activity of superoxide dismutase（SOD） was the highest when salinity was 20-23， and it was relatively low when salinity was 29. It is suggested that the optimum salinity of the larva is 26-28.

Key words： Sepia pharaonis; Salinity; Survival Rate; Growth Rate; Immune

虎斑烏賊（Sepia pharaonis）屬于頭足綱、烏賊科的軟體動物，因胴背具許多虎斑而得名，分布于印度洋和太平洋等海域[1]。在我國，臺灣和南海沿海地區也是虎斑烏賊正常的棲身場所。虎斑烏賊具有生長迅速、耐擁擠、耐運輸、抗病性強、營養價值較高等特點，是具有極大養殖前景的經濟頭足類[2-4]。通常生活在水層底部，喜靜置，以節省能量消耗，前端能發出觸腕來獵取食物，且具有殘食現象，其幼體可能遭到攻擊，導致生長受到抑制[5-6]。大部分烏賊都是廣鹽品種，而虎斑烏賊適應的鹽度范圍更大一些，適應溫度范圍較小，也無性早熟的特點。然而，受過度捕撈和環境污染等多重因素的影響，虎斑烏賊的自然資源量已逐漸減少。在國外如泰國等地，虎斑烏賊的人工養殖已有了一定的基礎，而我國烏賊養殖技術仍相對落后。當前，對于烏賊的研究主要涉及生長、行為、胚胎發育、攝食、營養成分等領域[7-11]。虎斑烏賊受精卵的孵化率以及幼體存活率在不同的海水鹽度中變化較大。虎斑烏賊能夠適應的鹽度范圍變化很大，但對烏賊幼體生存具有一定的影響，當鹽度過分低時，幼烏幾乎不能夠生存[12];當鹽度為15左右時，虎斑烏賊的受精卵幾乎不會存活;當鹽度大于22、低于33時，鹽度對烏賊受精卵的影響趨勢變小，幾乎無變化[13]。本研究通過為期30d的不同鹽度試驗，探討了鹽度對虎斑烏賊幼體存活率、生長率及免疫調節的影響，以期得到虎斑烏賊幼體的適宜生長鹽度，為虎斑烏賊的幼體繁育提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗生物 試驗在連云港市農業農村局大板橋養殖基地進行。試驗生物是來自廣東空運過來的虎斑烏賊，取其受精卵，先在室內育苗池內孵化一段時間，孵化完畢之后，在其中選取體格健康，活力旺盛的烏賊幼體作為試驗試體。

1.1.2 試驗裝置 （1）在虎斑烏賊幼體孵化出來之后，用培養池來贍養烏賊幼苗。培養池采用的是6個直徑1.6m，高1m的圓形塑料池子。（2）試驗用水是天然海水，經紗濾后，加入淡水以調節適當的鹽度，達到實驗要求。需要注意的是鹽度的調節不能過快，緩慢調節用水鹽度的下降，每隔2d換2/3水。（3）室內育苗池一般會配備相應的蓄水池（水源來自后屋的海水中），蓄水池的規格一般為底面積12m2、深3m。這種蓄水池基地準備了5個，用以換水沉淀，沉淀的海水通常用漂白粉消毒，每1m3海水加入20～30g的漂白粉，隨后讓水池靜置沉淀以及曝氣1～2d。靜置沉淀過的海水還需去除其中的氯，向其中加入適量的硫代硫酸鈉（Na2S2O3），劑量與漂白粉成1∶1的比例。（4）試驗使用功率1.1kW，風壓17.6kPa，風量180m2/h的增氧機。每個池子的兩邊均勻分布著6個排氣孔連著6根氣石，但由于水體壓強以及氧氣供應量的要求，關閉了部分排氣孔，以保證其他出氣孔有足夠的壓強輸出氧氣。

1.1.3 餌料來源 烏賊幼體剛孵化出世的3d內，可以由其自身免疫來維持營養需求。但隨著時間的延長，烏賊幼體攝食量日漸增加，必須從外界攝取食物。撓足類、輪蟲和豐年蟲均是烏賊幼體的主要餌料[14]。其中，撓足類可以從基地外的塘口里捕獲，塘口與外界海水是相通的，海水中富含糠蝦以及撓足類，這是本次烏賊幼體前期頗為重要的餌料來源。每天傍晚時分，用聚光燈照射水面，糠蝦、撓足類因其趨光習性會聚集在聚光燈下，然后用80～100目的網撈取后投入培養池中，期間不需要投入其他餌料。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗設計 試驗在6個相同規格的培養池中進行，分別設17、20、23、26、29和32等6個鹽度梯度，每個處理設3個重復，即在每個培養池中放置3個相同規格的塑料筐（40×30×20cm），并用繩子系著幾塊泡沫使其懸浮于池中。每個筐放入40只虎斑烏賊幼體（胴長：1.41±0.05cm，體重：0.62±0.04g）。試驗周期為30d，試驗期間水體溫度在20～25℃，pH維持在7.50～8.00，連續充分曝氣。30d后每筐取存活烏賊幼體各10尾，去除墨囊，全程低溫操作。加入3mL生理鹽水，勻漿，4℃、3000r/min條件下冷凍離心機離心20min，取上清液用于酶活測定。

1.2.2 試驗步驟 （1）將烏賊幼體分置養殖30d，處于6個鹽度環境，記錄烏賊幼體初始投入量（只），經過一段時間的養殖后記錄烏賊幼體存活量（只），算出存活率（%）;（2）在養殖不同鹽度下虎斑烏賊幼體30d的同時，記錄初始烏賊體重（g），實驗結束后，測量烏賊幼體末的體重（g），最終根據烏賊幼體的特定生長率公式計算出烏賊的生長率SGR（%）：

（3）研究烏賊的免疫調節機制，探究6種不同鹽度梯度下的環境對虎斑烏賊幼體的免疫影響。本次試驗通過超氧岐化酶活性（Superoxide Dismutase，SOD）來反映鹽度對其免疫調節的影響，采用購自南京建成生物工程研究所的試劑盒進行總SOD活力（U/mgprot）測定，其定義每mg組織蛋白在1mL反應液中SOD抑制率達50%時反應的SOD量為1個活力單位（U）[15-16]。

最后，利用IBM SPSS Statistics統計學軟件分析、Turkey多重比較等進行所得數據的一系列處理，作出不同鹽度與虎斑烏賊幼體存活率、特定生長率和SOD活性的散點圖，用Excel表格做出相對應的柱狀圖并標上誤差，運用SPSS軟件分析各組所得數據，以a-d作為標簽表示平均值組間的差異（P<0.05）。

2 結果與分析

2.1 鹽度對存活率的影響 由圖1可知，烏賊幼體在低鹽度17以下時不能生存，隨著鹽度的提升，烏賊能夠存活的數量越來越多。烏賊幼體的存活率隨鹽度的變化明顯波動，當鹽度范圍處于26～32時，幼體的存活率最高，說明此時烏賊處于最適的鹽度范圍。經回歸分析發現，最適鹽度為28.89。

2.2 鹽度對生長率的影響 由圖2可知，隨著鹽度的升高，烏賊幼體末體重呈現先增長后下降的趨勢;當鹽度在23度以下時，烏賊體重顯著降低，在鹽度26～29時烏賊的體重達到頂峰;回歸分析發現，最適鹽度為28.17。不同鹽度對烏賊幼體的體重影響顯著（P<0.05）。

由圖3可知，烏賊幼體的生長率SGR（%）隨鹽度的上升呈現出先高后低的趨勢，烏賊的生長率在26和29鹽度時到達峰值，高達5.0左右。因此，可以推斷出鹽度范圍26～29滿足幼烏的最佳生長要求。經回歸分析發現，最適鹽度為27.97。

2.3 鹽度對SOD活性的影響 由圖4可知，隨著鹽度的變化，烏賊幼體的免疫調節也隨之下降。鹽度對虎斑烏賊幼體內SOD值影響顯著（P<0.05）。可以看出，在鹽度范圍20～32內，鹽度20～23時，測得的SOD值最高，此時幼烏的免疫強度達到最高;鹽度29時，虎斑烏賊幼體內SOD酶的活性較低。

3 討論與結論

鹽度脅迫對烏賊的生長免疫具有重要的影響。鹽度過低時，烏賊幼體在進食時較易出現旋轉、噴墨等輕微抽搐現狀，逐漸死亡;當鹽度處于正常時，出現的噴墨等現狀也趨于正常，可以通過自我免疫進行調節[17-18]。不同的烏賊對鹽度的適應范圍也有所不同，如虎斑烏賊適應的鹽度為17～30，曼氏無針烏賊（Sepiella maindroni）適應的鹽度范圍為12～32，擬目烏賊（Sepia lycidas）的適應鹽度為21～33等[19]。本次試驗結果得出，鹽度對虎斑烏賊幼體生存具有一定制約，幼體能夠適應的鹽度范圍變化很大，當鹽度過低（鹽度17）時，幼烏幾乎不能夠生存，活力不顯，反應遲鈍直至死亡;鹽度在26～32時，30d后虎斑烏賊幼體的存活率為90.83%左右。文菁等[12]研究發現，在鹽度為23、28、33條件下，虎斑烏賊幼體48h內存活率較高，均愈80%。

試驗結果表明，鹽度會影響虎斑烏賊的特定生長率，當鹽度處于20以下時，30d后烏賊的生長率顯著下降，幼體很難存活與生長。樂可鑫等研究發現，21d后鹽度21組的虎斑烏賊幼體特定生長率處于最低值[18]。本次研究發現，經不同鹽度實驗30d后，在鹽度20～30范圍內，虎斑烏賊幼體末體重及特定生長率（SGR）均呈現先升后降的趨勢;當鹽度在26～29時，烏賊的體重達到頂峰，特定生長率為5.15～5.20%，產量最高。由SGR隨鹽度變化曲線圖可以看出，鹽度28左右，其生長率達到最大值。

本次試驗中，鹽度脅迫對虎斑烏賊免疫調節的影響是通過超氧化物歧化酶活性來反映的。超氧化物歧化酶是一種抗氧化金屬酶，能夠防御氧毒性[20]。本研究發現，不同的鹽度層次下虎斑烏賊幼體的SOD酶活性的變化明顯。鹽度對SOD酶活性的影響與其對特定生長率的影響不同，其變化趨勢呈現先下降后上升，鹽度在26～32時，SOD酶活性較低;在20～23時，SOD酶活性為62.53%～62.74%，幼體免疫抵抗最高。

本次試驗結果表明，不同鹽度試驗后30d，在鹽度20～30范圍內，虎斑烏賊幼體的存活率、末體重及特定生長率（SGR）皆在鹽度26～29時達到頂峰。并且由存活率、SGR隨鹽度變化的曲線得出，鹽度為28左右時，存活率和生長率到達最高點;鹽度29時，烏賊幼體內SOD酶活性較低。由此推測，虎斑烏賊幼體的最適鹽度在26～28。

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（責編：張宏民）