采用超高效液相色譜法測定飲料中的苯甲酸和山梨酸的研究

黃文愷

摘 要：實驗采用超高效液相色譜法測定飲料中的苯甲酸、山梨酸含量，選用ZORBAX Eclipse XDB-C18色譜柱，以甲醇、0.02 mol/L乙酸銨溶液為流動相進行等度洗脫，在2 min內完成進樣分析。檢測發現苯甲酸和山梨酸在5、20、40 μg/ L濃度時，得出被測樣品回收率為92.2%～98.2%，說明該方法具備實用價值。

關鍵詞：超高效液相色譜法；苯甲酸；山梨酸

苯甲酸、山梨酸是食品加工業常用的食品防腐劑，過量食用含有這兩種食品添加劑的食品將削弱人體對于鈣、維生素的吸收效果，加重肝臟負擔，甚至引發毒性反應、增加致癌率。本文采用超聲與水提法提取飲料中的苯甲酸與山梨酸，運用超高效液相色譜法測定兩種物質的具體含量，為食品檢測提供參考價值。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

選取Agilent1200超高效液相色譜儀、KQ218超聲波清洗器、600 r/min的低速離心機作為檢測儀器，配備0.2μm微孔濾膜。在試劑制備上，試驗稱取1.54 g乙酸銨，加入純水進行稀釋溶解，定容至1 000 mL；稱取適量苯甲酸、山梨酸標準品，分別加入無水乙醇配制成1 mg/mL苯甲酸標準溶液與山梨酸標準溶液，結合實際檢測需要加入純水配制成相應質量濃度的標準溶液。

1.2 色譜條件與標準曲線

在色譜條件設置上，選取ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 mm×50 mm×1.8 μm）色譜柱；柱溫為30℃；進樣量為1 μL；流動相為甲醇和0.02 mol/L乙酸銨溶液，流速為2 mL/min；檢測器為全波長掃描，檢測波長為230 nm[1]。在標準曲線設置上，分別配置濃度為0.5、1、2、5、10、20 μg/L與40 μg/L的苯甲酸、山梨酸混合標準溶液，置入自動進樣器1μg/L，并基于色譜條件進行檢測，選取兩種物質的保留時間與峰面積分別進行不同濃度的線性回歸。

2 結果與分析

2.1 樣品處理方法

選取碳酸飲料、乳飲料兩種飲料作為待測樣品，分別進行樣品的前處理。在碳酸飲料處理上，取適量樣品置于超聲波清洗器中脫氣15 min，隨后稱取10 g樣品裝入25 mL具塞試管內，加入氨水使其pH值近似中性，并加入純水定容至25 mL，利用0.2 μm水相微孔濾膜進行混合液的過濾處理，留出濾液待測定。在乳飲料處理上，稱取10 g樣品置于25 mL具塞試管內，依次加入2 mL亞鐵氰化鉀溶液與乙酸鋅溶液進行搖勻，形成蛋白質沉淀，加入純水定容至25 mL后，以4 000 r/min離心處理10 min，提取上清液利用0.2 μm水相微孔濾膜進行過濾處理，留出濾液待測定[2]。

2.2 波長與流動相的選擇

通過觀察兩種物質混合標準溶液的色譜圖可以發現，苯甲酸、山梨酸的最大吸收波長分別為230 nm和261 nm，且兩種食品添加劑均以230 nm為最佳吸收波長且基線穩定，因此選取230 nm作為檢測波長，選取甲醇-水、甲醇-乙酸銨溶液-乙腈-水、乙腈-乙酸銨溶液作為流動相，進行待測樣品的分離處理，當甲醇與0.02 mol/L乙酸銨溶液的配比為3∶97時，苯甲酸、山梨酸達到最佳分離效果，僅耗時2 min。

2.3 線性范圍與檢出限

通過觀察苯甲酸、山梨酸在0.5～40 μg/L濃度范圍內的標準曲線可以發現，其線性關系良好。苯甲酸的回歸方程為y=1.60550x+0.489519，r值為0.999 91，檢出限為0.15 mg/L；山梨酸的回歸方程為y=2.78926x+ 0.179118，r值為1.000 0，檢出限為0.18 mg/L。

2.4 精密度與回收率測定

選取6份飲料樣品分別加入0.5 mL苯甲酸、山梨酸混合標準溶液，經由處理后實行平行測定，計算出其峰面積的相對標準偏差（RSD），得出苯甲酸、山梨酸峰面積的RSD分別為1.4%和2.1%。選取6份飲料樣品進行加標回收率的測定，添加水平分別設為5、20 、40 mg/L，測得苯甲酸的平均測定值分別為4.61、19.21、39.28 mg/L，平均回收率保持在92.2%～98.2%區間內；山梨酸的平均測定值分別為4.67、19.28、39.11 mg/L，平均回收率保持在93.4%～97.8%。

3 結語

本文采用的超高效液相色譜法具有易于操作、高效率、準確度高以及靈敏度高等優勢，適用于測定碳酸飲料與蛋白質含量較高的飲品，可在2 min時間內完成樣品的測定分析，且其相對標準偏差均未超過5%，平均回收率保持在92.2%～98.2%，使檢測效率得到大幅提升，實現對大批量飲料的有效檢測。

參考文獻

[1]衛星華.高效液相法同時測定飲品中8種食品添加劑[J].食品研究與開發，2017（24）：137-140.

[2]朱斐全，安小寧，黃鳳君，等.加入沉淀劑對高效液相色譜法測定果汁中苯甲酸、山梨酸含量結果的影響[J].食品安全質量檢測學報，2018（12）：3192-3196.