響應面法優化提取南方紅豆杉黃酮的工藝研究*

王昱霽 朱婉萍

1 浙江中醫藥大學 浙江 杭州 310053

2 浙江省中醫藥研究院 浙江 杭州 310007

本研究利用微波輔助法，提取南方紅豆杉枝葉中的黃酮類化合物，在單因素試驗的基礎上采用響應面法優化提取工藝，以期獲得較高的提取得率。為后續研究南方紅豆杉中的黃酮類化合物或其他有效成分，為提高南方紅豆杉資源的綜合利用率提供實驗基礎和參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器：南方紅豆杉枝葉（寧波泰康紅豆杉生物工程有限公司提供），清洗曬干粉碎并過50目篩；蘆丁對照品（中國食品藥品檢定研究院）；無水乙醇、亞硝酸鈉、氫氧化鈉等試劑，均為分析純級。MAS-II PLUS微波萃取工作站（寧波新芝生物科技股份有限公司）；UV1800型可見紫外分光光度計（島津）；MS204分析天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]。

1.2 蘆丁標準曲線的繪制：采用NaNO2-Al(NO3)3比色法[1]繪制標準曲線。稱取在105℃下干燥至質量恒定的10mg蘆丁標準品，置于25ml容量瓶中，用65%乙醇溶液溶解并定容，配制成濃度為0.4mg/ml的蘆丁標準溶液。準確移取蘆丁標準溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分別置于10ml容量瓶中，各加65%乙醇至5ml，依次加入 5%NaNO2溶液 0.3ml，搖勻，放置 6min；加 10%Al(NO3)3溶液0.3ml，搖勻，放置6min；加入4%NaOH溶液4ml，搖勻，放置15min，再定容至10ml。以不加蘆丁對照品溶液同法操作得到的溶液作為空白對照，全波段掃描，找到吸收度最大波長，在最大波長處測定吸收度。

1.3 南方紅豆杉總黃酮的提取和吸光度測定：稱取粉碎并過50目篩的南方紅豆杉粉末5g，裝入四頸瓶，加入不同濃度的乙醇溶液為溶劑，在不同提取條件下，利用微波萃取工作站進行微波輔助提取，提取后離心（2500 r/min，10min），取上清，補足加入溶劑的量后，得到南方紅豆杉總黃酮待測液。……