骨康靈液在動物骨折愈合中對VEGF 影響的研究

王瓊仙

（昆明醫(yī)科大學實驗動物學部，云南 昆明）

0 引言

骨康靈液是昆明醫(yī)學院科研中試中心的院內制劑，其生產(chǎn)得到了云南省藥監(jiān)局的批準。骨康靈液的主要藥物組成有續(xù)斷、桃仁、當歸、三七等，將所有藥物進行炮炙加工，并將其粉碎，并過篩120 目，之后使用濃度為70%-95%的酒精進行浸泡過濾，將其中的有效成分進行提取制備出，該藥是一種外用的藥液[1,2]。骨康靈液的制備充分顯示了傳統(tǒng)醫(yī)學與現(xiàn)代醫(yī)學的結合，將中西醫(yī)充分結合起來。其效果主要是接骨生新，能夠有效地促進骨折的愈合，發(fā)揮出活血化瘀、消腫止痛、舒筋壯骨的作用，同時有清心安神及行氣止痛的功效[3,4]。該藥的適用范圍較廣，對于外傷性閉合骨折、跌打損傷、關節(jié)紅腫等癥狀均有顯著的效果，能夠有效地促進筋絡的疏通，促進骨組織生新[5,6]，骨康靈液的批準文號為滇藥制字(z)05A02434 號。

骨折需要進行骨修復治療，其修復與重建是需要新的毛細血管生成，血管內皮細胞生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)對于內皮細胞增殖有促進作用，能夠誘導血管的生成與生長，其參與骨折后組織變化過程[7,8]。中醫(yī)經(jīng)典理論云：“肢體傷于外而氣血傷于內”，發(fā)生骨折后局部的氣血出現(xiàn)瘀滯，從而導致全身血液運行不暢，出現(xiàn)淤堵。骨康靈液的主要功能是活血化瘀、消腫止痛，對外傷性閉合骨折及跌打損傷、關節(jié)紅腫疼痛等有較好的療效。骨康靈液能夠促進筋絡疏通，促進骨折軟組織生新，利于骨折愈合[9,10]。為了探究骨康靈液在動物骨折愈合中對VEGF 的影響，本研究展開了動物分組實驗的對照研究，從而總結出骨康靈液對VEGF 表達的影響及對骨折的修復作用。

1 材料與方法

1.1 儀器與藥品

儀器：本部門實驗室或是本校校醫(yī)院提供的普通醫(yī)用診斷X 攝線機，以及手術需要的一些器械等。

藥品：本院原制劑室提供，骨康靈液的批準文號為滇藥制字(z)05A02434 號。

1.2 動物的分組

30 只成年SD 大鼠，雌雄各半，隨機分為兩組。對照組(骨折+95%酒精)與實驗組(骨折+骨康靈液)。所用的實驗動物均從昆明醫(yī)科大學實驗動物學部購買取得，實驗動物質量合格證號：SYSK( 滇)2005-0004，許可證號SCXK( 滇) 2011-0004。

1.3 大鼠動物模型建立與藥物治療

骨折模型的制備：30 只SD 大鼠體重（200±20）g，隨機選擇右側股骨逆行穿克氏針固定后造模支架制造股骨中段骨折，以對側進行對照，對患肢進行X 線照射并觀察。對傷口進行縫合，注意在手術后根據(jù)大鼠的體重進行青霉素的注射，并進行抗感染治療，連續(xù)治療3d。

分組及給藥：骨折造模成功后，將30 只模型大鼠隨機分為兩組，對照組( 骨折+95% 酒精)15 只，實驗組( 骨折+ 骨康靈液)15 只，骨康靈液治療組在患處使用藥棉或是紗布進行包裹，之后使用小木板進行固定處理，再使用骨康靈液將藥棉浸濕，每日的浸濕次數(shù)為4 次，保證骨折處的藥棉處于濕潤狀態(tài)，這樣能夠將毛孔充分地打開，促進藥物的吸收。分別于骨折給藥后第7、15、21、30、42d 各組每次處死動物3只；對處死大鼠的雙側股骨進行完整的解剖，并將骨折周圍的軟組織及骨痂取出，同時將對側同水平的股骨組織取出，使用10%甲醛固定，進行組織學觀察。

1.4 觀察指標

檢測VEGF 的表達情況，使用的方法為免疫組織化學方法，將切片的陽性細胞數(shù)進行記錄。陽性細胞胞漿呈棕色染色，計算高倍視野內染色陽性細胞，計算陽性率。

1.5 統(tǒng)計學分析

2 結果

各組大鼠各時間點骨痂組織VEGF 表達陽性細胞率，見表1、圖1。

表1 各組大鼠各時間點骨痂組織VEGF 表達陽性細胞率

表1 各組大鼠各時間點骨痂組織VEGF 表達陽性細胞率

注：*表示實驗組與對照組比較具有顯著性差異，P＜0.05

圖1 各組大鼠各時間點骨痂組織VEGF 表達陽性細胞率

3 討論

3.1 骨康靈液中的血竭、三七、續(xù)斷、當歸促進骨折愈合的現(xiàn)代藥理研究

骨折愈合的修復過程較為復雜，且是一個連續(xù)的過程，同時在修復的過程中受到多種因素的影響。有相關的研究顯示，在骨折的修復過程中，在早期骨建單位的轉換周期縮小，有利于骨痂的再建，增加了骨痂量，從而促進骨痂的生長，在后期對骨細胞的活性有很大的提高作用，使得新的骨痂生成，其原因與其中含有豐富的錳元素及鋅元素有很大的 關系。當歸在中醫(yī)接骨方藥中運用得較多，在現(xiàn)代藥理學中證明其具有顯著的活血化瘀的效果，能夠改善骨折斷端的血液循環(huán)情況，加快局部血腫的吸收，從而促進骨折的愈合。

本研究結果顯示，對兩組大鼠進行X 線照射，分別在第15d、21d、30d、42d 出現(xiàn)差異，且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，在21d 時差異達到最大，這種差異隨著時間的延長越來越大。這就表明，在骨折的中后期骨康靈液能夠促進軟骨鈣化，促進骨細胞的增殖，增加了骨痂量，提高了骨強度，對骨折的愈合有很好的促進作用。

3.2 骨康靈液的中醫(yī)認識

中醫(yī)學認為，骨折需要經(jīng)過瘀去—新生—骨合的過程[11,12]。主要的理論支撐包括“腎主骨”和“有傷必有瘀”，與現(xiàn)代藥理研究相結合總結出該藥治療骨折的原則：以傳統(tǒng)的骨傷理論為指導思想，不斷篩選和優(yōu)化常用的藥物。骨康靈液使用的主藥為血竭、三七、續(xù)斷、當歸，所要達到的目的為補中寓通、補而不滯，該組方注重補腎，同時還在活血上進行調整。這一組方能夠充分體現(xiàn)出中醫(yī)學的整體觀念及標本兼治的思想。其藥物組成簡單，臨床療效肯定，符合臨床用藥特點。在臨床尤其是基層醫(yī)院中具有很大的應用價值。