賴氨酸磷酸氫鈣片中磷酸氫鈣的含量測定

薛維麗，姜群英，咸瑞卿，鞏麗萍，陳曉

(1.山東省食品藥品檢驗研究院，山東濟南250101；2.費縣中醫(yī)醫(yī)院，山東臨沂273400)

賴氨酸磷酸氫鈣片是由鹽酸賴氨酸、磷酸氫鈣和適宜輔料制成的復(fù)方制劑，20世紀(jì)80年代開始最早在吉林省注冊生產(chǎn)，曾用名為強靈助長片，臨床上主要用于促進幼兒生長發(fā)育以及兒童及孕婦補充鈣質(zhì)。磷酸氫鈣的含量直接影響該藥品的質(zhì)量與療效，大多數(shù)生產(chǎn)企業(yè)均執(zhí)行國家藥品標(biāo)準(zhǔn) WS-10001-(HD-0388)-2002-2012，該標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定磷酸氫鈣的含量測定方法為返滴定法，該方法存在專屬性不強的問題。

磷酸氫鈣的含量測定方法除了國家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的返滴定法[1-4]外，還有采用以三氯化鐵為沉淀劑，除去溶液中的磷干擾，用EDTA直接滴定法[5]；高錳酸鉀滴定法[6]；電位滴定法[7]；電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法[8]等，本研究采用原子吸收分光光度法，該方法相比其他方法專屬性強、準(zhǔn)確度高，且操作簡單，特別適合大批量樣品的快速檢測。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 iCE3000原子吸收分光光度計(賽默飛公司)；XSE205電子天平(瑞士梅特勒托利多公司)。

1.2 試劑 磷酸氫鈣(含量100.0%，廣西嘉進藥業(yè)股份有限公司)；鹽酸(分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司)；氧化鑭(分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司)；片劑輔料(硬脂酸鎂、鹽酸賴氨酸、蔗糖、阿司帕坦、甘露醇等，企業(yè)提供)；賴氨酸磷酸氫鈣片(修正藥業(yè)集團股份有限公司、浙江金華康恩貝生物制藥有限公司、廣西嘉進藥業(yè)股份有限公司、白求恩醫(yī)科大學(xué)制藥廠、貴州圣都藥業(yè)有限公司)。

1.3 溶液的制備

1.3.1 供試品溶液的制備 取本品細粉適量(約相當(dāng)于磷酸氫鈣25 mg)，精密稱定，置50 mL量瓶中，加適量0.1 mol·L-1鹽酸溶液超聲使磷酸氫鈣溶解，用0.1 mol·L-1鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，置50 mL量瓶中，加5%鑭溶液(取氧化鑭6.6 g，加鹽酸10 mL使溶解，加水稀釋至 100 mL，搖勻)1 mL，用 0.1 mol·L-1鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的制備 取磷酸氫鈣對照品約25 mg，精密稱定，置 50 mL量瓶中，加 0.1 mol·L-1鹽酸溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取 4.0、5.0、6.0 mL，分別置 50 mL 量瓶中，各加5%鑭溶液1 mL，用0.1 mol·L-1鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。

1.3.3 空白干擾溶液的制備 取片劑輔料適量(約相當(dāng)于磷酸氫鈣25 mg的處方量)，精密稱定，按“1.3.1”項下同法制備，作為空白干擾溶液。

1.3.4 空白溶液的制備 量取5%鑭溶液1 mL，置50 mL量瓶中，用0.1 mol·L-1鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，作為空白溶液。

1.3.5 樣品測定 取空白溶液、標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液、供試品溶液，照原子吸收分光光度法[《中國藥典》2015年版(四部)通則0406第一法][9]，在422.7 nm波長處測定吸光度，根據(jù)線性方程計算，即得。

2 方法與結(jié)果

2.1 專屬性試驗 取空白溶液、空白干擾溶液分別在422.7 nm波長處測定吸光度，結(jié)果空白干擾溶液與空白溶液的吸光度值相當(dāng)。結(jié)果表明片劑輔料對磷酸氫鈣的含量測定基本無干擾。

2.2 精密度試驗 取標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液中間濃度溶液連續(xù)測定6次，6次吸光度值的RSD值為0.92%。結(jié)果表明該方法的儀器精密度良好。

2.3 線性關(guān)系試驗 取磷酸氫鈣對照品約25 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1鹽酸溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、7.5 mL，分別置50 mL 量瓶中，各加5%鑭溶液1 mL，用0.1 mol·L-1鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，作為磷酸氫鈣對照品系列溶液，在422.7 nm波長處測定吸光度。以磷酸氫鈣濃度C為橫坐標(biāo)，以吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表1，表明磷酸氫鈣在25.88～77.63μg·mL-1濃度范圍內(nèi)與吸光度值呈良好的線性關(guān)系。

表1 磷酸氫鈣濃度與吸光度值線性關(guān)系

2.4 重復(fù)性試驗 取同一批供試品(樣品編號為P0163)，同法重復(fù)測定6次，6次測定的結(jié)果見表2，表明該方法的重復(fù)性良好。

表2 磷酸氫鈣含量測定重復(fù)性試驗結(jié)果

2.5 加標(biāo)回收率試驗 精密稱取本品細粉適量(約相當(dāng)于磷酸氫鈣25 mg)，置100 mL量瓶中，共9份，分別精密加入磷酸氫鈣對照品20、25、30 mg，每個質(zhì)量濃度各加3份，按照“1.3.1”項下方法處理，共制得9份加標(biāo)供試品溶液。按“1.3.5”項下方法測定，計算加標(biāo)回收率，結(jié)果磷酸氫鈣的平均回收率為99.39%，RSD為1.2%(n＝9)，結(jié)果見表3，表明該方法的準(zhǔn)確度良好。

表3 磷酸氫鈣含量測定加標(biāo)回收率試驗結(jié)果

2.6 樣品測定 取不同生產(chǎn)企業(yè)的賴氨酸磷酸氫鈣片按“1.3.1”項下方法制備供試品溶液，按“1.3.5”項下方法測定，并與按照現(xiàn)行國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-(HD-0388)-2002-2012中磷酸氫鈣的含量測定方法(滴定法)的結(jié)果進行比較，結(jié)果見表4。

表4 兩種不同方法磷酸氫鈣含量測定結(jié)果

3 討論與結(jié)論

賴氨酸磷酸氫鈣片現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-(HD-0388)-2002-2012，該標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定磷酸氫鈣的含量測定方法為樣品加適量稀鹽酸溶解后，加入過量的EDTA滴定液，再加氨試液調(diào)節(jié)pH＝10，用鋅滴定液滴定過量的EDTA，然后根據(jù)消耗的鋅滴定液計算磷酸氫鈣的含量。賴氨酸磷酸氫鈣片的輔料中通常含有硬脂酸鎂作為潤滑劑，在pH＝10時，鈣離子和鎂離子均可與EDTA生成穩(wěn)定的絡(luò)合物，因此，輔料中鎂離子會帶來干擾導(dǎo)致鈣含量測定結(jié)果偏高。此外，采用返滴法測定時終點顏色變化不明顯且終點顏色容易褪色，導(dǎo)致滴定終點不易判斷，從而影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

有文獻報道，郭國寧[5]磷酸氫鈣中鈣含量的測定方法首先采用三氯化鐵為沉淀劑，除去溶液中的磷，用三乙醇胺作掩蔽劑，調(diào)節(jié)溶液pH值至13，用EDTA直接滴定法測定鈣的含量。該方法調(diào)節(jié)pH＝13，可使鎂離子沉淀，消除其對鈣離子測定的干擾，但該法需要嚴(yán)格控制三氯化鐵的加入量和沉淀磷時溶液的pH值，否則將會影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，因賴氨酸磷酸氫鈣片中磷酸氫鈣含量測定時，樣品取樣量少，且輔料較多，調(diào)節(jié)pH時不宜控制，同樣會影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。該法與高錳酸鉀法均操作煩瑣，試驗時間長，不適于大量樣品的檢測。

本研究采用原子吸收分光光度法，前處理過程中將不溶性的輔料濾除，減少了干擾，過濾后僅存在少量鎂離子，在422.7 nm波長處不干擾鈣離子的測定，樣品測定結(jié)果顯示，原子吸收分光光度法測定的結(jié)果與法定標(biāo)準(zhǔn)測定的結(jié)果偏低，說明原子吸收分光光度法可以消除硬脂酸鎂的干擾。

該方法與國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-(HD-0388)-2002-2012中規(guī)定的磷酸氫鈣含量測定方法相比，專屬性更強，準(zhǔn)確度更高，并且樣品分析快速，特別適合大批量樣品的快速檢測。該方法經(jīng)過詳細的方法學(xué)驗證及大批量樣品分析，證明該方法的檢測結(jié)果可靠，可用于賴氨酸磷酸氫鈣片中磷酸氫鈣的含量測定。