早期微量喂養(yǎng)早產(chǎn)兒腸道菌群變化特征與喂養(yǎng)不耐受發(fā)生的關(guān)系研究

李海燕 陳影宇 李玉琴 官銳明

【摘要】 目的：探究早期微量喂養(yǎng)早產(chǎn)兒腸道菌群變化特征與喂養(yǎng)不耐受發(fā)生的關(guān)系。方法：選取筆者所在醫(yī)院2019年1-6月收治的40例早期微量喂養(yǎng)早產(chǎn)兒，觀察組為喂養(yǎng)不耐受早產(chǎn)兒確診者，對(duì)照組為同時(shí)期喂養(yǎng)耐受早產(chǎn)兒，以喂養(yǎng)不耐受發(fā)生24 h內(nèi)（T1）和喂養(yǎng)不耐受恢復(fù)后（T2）為時(shí)間節(jié)點(diǎn)，采集各早期微量喂養(yǎng)早產(chǎn)兒的糞便標(biāo)本，利用PCR技術(shù)進(jìn)行菌群分析，對(duì)比其腸道菌群變化情況差異。結(jié)果：T1時(shí)，觀察組在腸道的肺炎克雷伯菌和大腸桿菌水平明顯高于對(duì)照組，乳酸桿菌和雙歧桿菌水平明顯低于對(duì)照組（P<0.05）;T2時(shí)，觀察組與對(duì)照組的上述腸道菌群水平比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：在早期微量喂養(yǎng)早產(chǎn)兒中，腸道菌群的變化參與喂養(yǎng)不耐受的發(fā)生，其中不耐受發(fā)生尤其與肺炎克雷伯菌和大腸桿菌水平增加有一定關(guān)系。

【關(guān)鍵詞】 早期微量喂養(yǎng)早產(chǎn)兒 腸道菌群 喂養(yǎng)不耐受 變化特征

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.10.062 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1674-6805（2020）10-0-03

Study on the Relationship between the Change Characteristics of Intestinal Microflora and the Incidence of Feeding Intolerance in Early Micro-feeding Premature Infants/LI Haiyan， CHEN Yingyu， LI Yuqin， GUAN Ruiming. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（10）： -150

[Abstract] Objective： To investigate the relationship between the change of intestinal microflora and the incidence of feeding intolerance in early micro-feeding premature infants. Method： This research selected 40 early micro-feeding premature infants admitted to our hospital from January to June 2019. The observation group were infants with feeding intolerance while the control group with feeding tolerance. Within 24 hours of the feeding intolerance onset （T1） and after the recovery of feeding intolerance （T2） as the time node， the stool samples collected from each early micro-feeding premature infants were analyzed by PCR to compare the changes of intestinal microflora. Result： At T1， the numbers of intestinal Klebsiella pneumonia and Escherichia coli in the observation group were significantly higher than that of the control group， but the numbers of Lactobacillus and Bifidobacteria were significantly lower than that of the control group （P<0.05）. Moreover， at T2， there were no significant differences in the expression of the above intestinal microflora between the observation group and the control group （P>0.05）. Conclusion： In early micro-feeding premature infants， the change of intestinal microflora may contribute to the development of feeding intolerance. And the incidence of feeding in tolerance is particularly associated with the increased level of Klebsiella pneumonia and Escherichia coli.

[Key words] Early micro-feeding premature infants Intestinal microflora Feeding intolerance Change characteristics

First-authors address： Huidong County Maternal and Child Health Family Plan Service Center， Huidong 516300， China

目前早產(chǎn)兒在我國(guó)的發(fā)生率連年攀升，并隨著醫(yī)學(xué)和生命支持科技的精進(jìn)，早產(chǎn)兒的成活率也日益提高[1]。其中保障早產(chǎn)兒生命的重中之重是提供充分營(yíng)養(yǎng)支持，而予以營(yíng)養(yǎng)支持的最普適方式是胃腸道喂養(yǎng)[2]。然而早產(chǎn)兒由于孕周小、胃腸道發(fā)育不足、消化吸收不協(xié)調(diào)等原因容易引發(fā)喂養(yǎng)不耐受（如嘔吐、腹脹、胃潴留等現(xiàn)象），延長(zhǎng)住院時(shí)長(zhǎng)且不利于早產(chǎn)兒的生存質(zhì)量[3]。早期微量喂養(yǎng)是國(guó)內(nèi)外多采用的早產(chǎn)兒喂養(yǎng)方式，其帶來(lái)的早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)能夠激發(fā)胃腸道的運(yùn)動(dòng)和激素分泌，增強(qiáng)胃腸道的免疫和消化能力，從而促進(jìn)胃腸道發(fā)育[4]，降低早產(chǎn)兒喂養(yǎng)不耐受的發(fā)生率[5]。縱使如此，在早期微量喂養(yǎng)早產(chǎn)兒中，喂養(yǎng)不耐受現(xiàn)象仍極小部分存在，而有研究指出，異常的腸道菌群定植與早產(chǎn)兒喂養(yǎng)不耐受有關(guān)[6]，腸道菌群對(duì)早產(chǎn)兒的免疫、屏障、腸道營(yíng)養(yǎng)、激素分泌等有著一定影響[7]。因此，本研究對(duì)早期微量喂養(yǎng)中表現(xiàn)喂養(yǎng)耐受和不耐受早產(chǎn)兒的腸道菌群進(jìn)行分析研究，探討腸道菌群變化特征與喂養(yǎng)不耐受發(fā)生的關(guān)系，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院在2019年1-6月收治的40例早期微量喂養(yǎng)早產(chǎn)兒，喂養(yǎng)不耐受標(biāo)準(zhǔn)：早產(chǎn)兒在喂養(yǎng)1周內(nèi)出現(xiàn)嘔吐（每天嘔吐次數(shù)不少于3次）、腹脹（24 h腹圍增多1.5 cm）的表征[8-9]。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）均為本院新生胎兒且胎齡30～37周，出生體重

1 500～2 500 g，無(wú)臍繞頸或者窒息史;（2）均予以早期微量喂養(yǎng);腸內(nèi)食物無(wú)法消化，鼻飼下胃潴留≥喂入量50%，出現(xiàn)腹脹或嘔吐或兩者兼具，干擾親屬喂養(yǎng)計(jì)劃。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）消化道先天畸形者;（2）壞死性小腸結(jié)腸炎（NEC）者;（3）抗生素、益生菌制劑服用者;（4）合并其他嚴(yán)重疾病者。早產(chǎn)兒監(jiān)護(hù)人知情且簽署同意書(shū)，且該研究方案獲得倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。根據(jù)喂養(yǎng)是否不耐受分為兩組，喂養(yǎng)不耐受早產(chǎn)兒20例，設(shè)為觀察組，喂養(yǎng)耐受早產(chǎn)兒20例，設(shè)為對(duì)照組。兩組早產(chǎn)兒性別、胎齡、體重、生產(chǎn)方式、喂養(yǎng)方式等各項(xiàng)臨床基本資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表1。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 以喂養(yǎng)不耐受發(fā)生24 h內(nèi)（T1）和喂養(yǎng)不耐受恢復(fù)后（T2）為時(shí)間節(jié)點(diǎn)，分別采集兩組早期微量喂養(yǎng)早產(chǎn)兒的糞便標(biāo)本，每次采集新鮮糞便1 g于無(wú)菌采集管，2 h內(nèi)凍存于-80 ℃冰箱等待分析，樣品均送檢“達(dá)安”第三方檢測(cè)。

1.2.2 標(biāo)本處理 （1）DNA提取：糞便微生物總DNA提取參照QIAamp DNA Stool Mini Kit（美國(guó)Qiagen公司）試劑盒說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格進(jìn)行;（2）DNA PCR擴(kuò)增：遵照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，利用PCR對(duì)細(xì)菌16SrRNA 基因的V3～V5區(qū)域開(kāi)展特異性擴(kuò)增，引物序列分別為5-CCATCTCATCCCTGCGTGTCTCCGACTCAG-3和5-CCTATCCCCTGTGTGCCTTGGCAGTC TCAG-3，重復(fù)擴(kuò)增3次;（3）純化、定量及測(cè)序：應(yīng)用AxyPrep DNA Gel Extraction Kit（美國(guó)Axygen Biosciences公司）進(jìn)行凝膠DNA片段純化，并應(yīng)用QuantiFluorTM-ST（美國(guó)Promega公司）熒光定量系統(tǒng)進(jìn)行定量，最終由Illumina Hiseq5000實(shí)施測(cè)序。

1.3 觀察指標(biāo)

比較T1和T2兩組早期微量喂養(yǎng)早產(chǎn)兒腸道菌群變化情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

T1時(shí)，觀察組腸道的肺炎克雷伯菌和大腸桿菌水平明顯高于對(duì)照組，而乳酸桿菌和雙歧桿菌水平明顯低于對(duì)照組（P<0.05）;而T2時(shí)，觀察組與對(duì)照組的上述腸道菌群水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表2。

3 討論

腸道菌群在人體健康中發(fā)揮著不可或缺的作用，其與宿主通過(guò)互相作用、互相影響以達(dá)成腸道的微生態(tài)平衡[10]，研究證實(shí)腸道菌群能夠產(chǎn)生酶類、參與物質(zhì)代謝、促進(jìn)免疫器官成熟并調(diào)節(jié)免疫機(jī)能等[11]。而早產(chǎn)兒與足月兒相比腸道微生物環(huán)境不穩(wěn)定，腸道菌群定植延遲，菌群種類多樣性不足，有益菌種水平缺乏[12]，這種失衡狀態(tài)將導(dǎo)致喂養(yǎng)不耐受、敗血癥等發(fā)生[13]。

本研究發(fā)現(xiàn)，在予以早期微量喂養(yǎng)的早產(chǎn)兒中，發(fā)生喂養(yǎng)不耐受狀況的T1時(shí)，喂養(yǎng)不耐受者的腸道肺炎克雷伯菌和大腸桿菌水平明顯高于喂養(yǎng)耐受者，而乳酸桿菌和雙歧桿菌兩種有益菌群水平明顯低于喂養(yǎng)耐受者（P<0.05）;而隨著喂養(yǎng)不耐受狀況恢復(fù)，T2時(shí)喂養(yǎng)不耐受者與喂養(yǎng)耐受者在上述腸道菌群水平比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。這表明肺炎克雷伯菌和大腸桿菌水平的增加與早期微量喂養(yǎng)早產(chǎn)兒的喂養(yǎng)不耐受有著一定關(guān)系，考慮可能為引發(fā)喂養(yǎng)不耐受的危險(xiǎn)因素。由此，在早期微量喂養(yǎng)早產(chǎn)兒中，腸道菌群的水平變化參與喂養(yǎng)不耐受的發(fā)生，其中不耐受發(fā)生尤其與肺炎克雷伯菌和大腸桿菌水平增加有一定關(guān)系。

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（收稿日期：2019-12-12） （本文編輯：郎序瑩）