發病鲆鰈類分離菌株的16S rRNA基因測序分析*

蘭 欣 李 杰 李貴陽 肖 鵬 莫照蘭

發病鲆鰈類分離菌株的16S rRNA基因測序分析*

蘭 欣1,2李 杰3李貴陽3肖 鵬1莫照蘭3①

(1. 中國科學院海洋研究所實驗海洋生物學重點實驗室 青島 266071；2. 中國科學院大學 北京 100049； 3. 中國水產科學研究院黃海水產研究所 農業農村部海水養殖病害防治重點實驗室 青島海洋科學與技術試點國家實驗室海洋漁業科學與食物產出過程功能實驗室 青島 266071)

細菌性疾病是中國海水養殖鲆鰈類的主要病害，為全面了解病原菌種類，本研究對1999~2012年從山東、江蘇、河北、天津等沿海地區養殖場發病鲆鰈魚類中分離得到的124株優勢菌株進行了16S rRNA基因測序和系統發育學分析。將基因序列與GenBank核酸序列數據庫進行相似度比對分析，結果顯示，有83株與弧菌屬(sp.)細菌相似度最高，11株與氣單胞菌屬(sp.)細菌相似度最高，4株與愛德華氏菌屬(sp.)細菌相似度最高，26株為其他15種屬的細菌。根據系統發育學分析結果，進一步將66株菌鑒定為16個種，優勢種為溶藻弧菌()、哈氏弧菌()、鰻弧菌()、殺鮭氣單胞菌()和遲緩愛德華氏菌()。選擇其中的9株鰻弧菌和4株遲緩愛德華氏菌進行人工感染實驗，結果顯示，其中7株鰻弧菌和3株遲緩愛德華氏菌對大菱鲆()有較強的致病性。研究結果可為闡明中國海水養殖鲆鰈類的流行病發生歷史、病原種類、病原監測及疾病控制提供重要參考。

鲆鰈類；病原菌；16S rRNA基因；系統發育學分析；鑒定

近年來，中國水產養殖業發展迅速，已成為國民經濟的重要組成部分，但隨著養殖規模的擴大，水產病害也越來越嚴重，成為制約中國水產業發展的一個重要因素。據統計，2017年水產養殖因病害造成的直接經濟損失達約361億元，在監測到的96種病原中，細菌性疾病種類占了46種(張顯良等, 2018)。中國海水養殖地域范圍分布廣，從遼寧到海南的緯度跨度達23°，同時，養殖品種多，導致不同地區養殖病害種類復雜，極大地增加了病害防控的難度。鲆鰈類是中國海水養殖的重要品種，在遼寧、河北、山東、江蘇等多個省份均有養殖。對養殖鲆鰈類進行流行病學調查，可為中國水產流行病學的監控提供基礎數據，并可進一步有針對性地對細菌性病害進行防治，對中國水產事業的發展有重要意義。

水產養殖動物的病原主要有細菌、病毒、真菌和寄生蟲四大類。其中，細菌性疾病是魚類中最為常見且是危害最大的一類疾病。現已報道的海水魚類細菌病原超過40種，包括弧菌()、愛德華氏菌()、氣單胞菌()、假單胞菌()、屈橈桿菌()、巴斯德氏菌()、腎桿菌()、鏈球菌()、分枝桿菌()和諾卡氏菌()等(Austin, 2007; Fryer, 1993)。

目前，16S rRNA基因的高通量測序在環境細菌組成分析研究中已得到廣泛應用，通過提取、擴增和分析水體、魚體表和組織的總DNA，對16S rRNA基因進行擴增、測序和比對，判斷細菌的種類組成，并可獲得大量的非可培養細菌的數據。16S rRNA是高度保守的分子，又有中度保守和高度變化的序列區域，適合于研究進化距離不同的各類原核生物的親緣關系，目前已廣泛應用于細菌的分類研究(東秀珠等, 2001; Borrell, 1997)。但由于病原需要通過柯赫氏法則進行確定，因此，在病原的鑒定過程中，分離培養依舊是不可缺少的一部分。鲆鰈類是中國重要的海水養殖品種，本實驗室自1999年以來，開展了海水養殖鲆鰈類病害調查，從江蘇、山東、河北、天津等沿海養殖場的發病魚分離收集菌株。本研究通過分析分離菌株的16S rRNA基因序列，對其進行分類，并對其中的鰻弧菌和遲緩愛德華氏菌進行致病性檢驗，以期對中國海水養殖鲆鰈類的細菌性病原種類有深入的了解，為病害控制提供基礎資料。

1 材料與方法

1.1 菌株來源

本研究所用菌株為1999~2012年從江蘇、山東、河北、天津等沿海地區海水養殖場發病鲆鰈類內臟分離純化(表1)，用甘油保存于?80℃冰箱中。

1.2 細菌16S rRNA基因序列的PCR擴增和測序

取保存于?80℃冰箱的菌株在胰大豆蛋白胨平板(TSA)劃線，28℃培養24~36 h，挑取單一菌落懸浮于50 μl無菌蒸餾水，在100℃水浴5 min裂解細胞，離心沉淀細胞碎片，取上清液作為細菌DNA模板。以細菌16S rRNA基因通用引物27F(5￠-AGAGTTTGATCCT GGCTCAG-3￠)和1492R(5￠-GGTTACCTT GTTACGAC TT-3￠)進行PCR擴增(Lane, 1991)。50 μl PCR反應體系：5 μl 10×buffer，1 μl 2.5 mmol/L dNTPs (Thermo,美國)，3 μl 25 mmol/L MgCl2，10 μmol/L引物各1 μl，酶0.5 μl (Thermo, 美國)，DNA模板2 μl，ddH2O補至50 μl。反應程序：95℃5 min；95℃ 1 min，52℃ 1 min，72℃ 1 min 40 s，30個循環；72℃ 10 min。PCR產物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測后，用DNA膠回收試劑盒(上海生工)進行純化，純化產物送上海桑尼生物科技有限公司測序。

1.3 16S rRNA基因序列比對分析

所得序列在GenBank (http://blast.ncbi.nlm.nih. gov/)核酸數據庫進行Blast比對分析，根據序列相似性>95%為同屬細菌，在70%~95%為不同屬細菌(楊霞等, 2008)，初步確定所測細菌在屬水平上的分類地位。采用BioEdit的ClustalW Multiple alignment比對分析，運用Mega5.05以Neighbor-Joining法，重復1000次計算bootstrap值，Kimura 2-parameter模型構建系統發育樹。

1.4 人工感染實驗

選擇均重約為30 g的健康大菱鲆()，養殖水溫為16℃~18℃，通過肌肉注射方式進行人工感染。選取鑒定為鰻弧菌和遲緩愛德華氏菌的菌株接種于TSB液體培養基，28℃搖床培養12 h。離心收集菌體，用生理鹽水將菌液依次稀釋至106、105、104和103CFU/ml。每個濃度注射10尾魚，每尾注射0.1 ml，對照組注射等體積的滅菌生理鹽水。每天正常飼喂、換水，記錄發病和死亡情況，對死亡魚及時解剖，并對病原進行分離。同時，平板計數稀釋液以確定菌液具體濃度。根據改進的寇氏法(楊茂成, 1990)計算菌株的半數致死量(50% lethal dose, LD50)。

2 結果與分析

2.1 細菌16S rRNA基因擴增及序列分析

以引物對27F/1492R進行PCR擴增，獲得1500 bp左右的DNA片段。對純化的DNA片段進行測序，獲得的16S rRNA基因序列提交至GenBank，登錄號見表1。Blast結果顯示，所得124個16S rRNA基因序列與GenBank核酸數據庫序列的最高相似性達99%~100%，可鑒定到屬的地位，其中，弧菌屬(sp.)數量最多，共分離到83株，占66.9%；其次依次為氣單胞菌屬(sp.) (共11株, 占8.9%)、愛德華氏菌屬(sp.) (4株, 占3.2%)、假交替單胞菌屬(sp.) (3株, 占2.4%)和假單胞菌屬(sp.) (3株, 占2.4%)等(表2)。在1999~2004年，分離到的細菌大部分屬于弧菌屬，占77.3%；在2005年以后，隨著養殖技術的提高和養殖條件的改善，弧菌的比例逐漸下降，僅占29.6%，氣單胞菌屬和愛德華氏菌屬的菌株逐漸增多，分別占40.7%和11.1%。

根據在GenBank核酸數據庫中進行Blast比對的結果，并從GenBank選取屬內具有代表性的16S rRNA基因序列作為參考序列，與所得序列共同構建系統進化樹(圖略)。綜合相似性和系統進化結果，將66株細菌鑒定到種的水平，其中，15株為溶藻弧菌(占12.1%)，9株為哈氏弧菌(占7.3%)，9株為鰻弧菌(占7.3%)，6株為殺鮭氣單胞菌(占4.8%)，4株為遲緩愛德華氏菌(占3.2%)，以及其他種類的細菌(表3)，其余菌株均須結合其他方法鑒定到種的水平。

表1 分離菌株16S rRNA基因序列在GenBank核酸數據庫BLAST分析

Tab.1 BLAST analysis of 16S rRNA gene sequences in GenBank Nucleotide Database

續表1

續表1

表2 分離菌株在屬水平上的分類地位

Tab.2 Classification status of the isolated strains on genus level

表3 分離菌株在種水平上的分類地位

Tab.3 Classification status of the isolated strains on species level

2.2 人工感染實驗和半數致死量

選取鑒定為鰻弧菌和遲緩愛德華氏菌的菌株對大菱鲆進行人工感染實驗和半數致死量計算。結果顯示，在9株鰻弧菌中，7株對大菱鲆具有較強的致病性；在4株遲緩愛德華氏菌中，3株有較強的致病性。細菌的半數致死量如表4所示，鰻弧菌M3、SMP1和SMQ29對大菱鲆的半數致死量在105CFU/尾左右，L4、L62、SMP3和SMP4的半數致死量在106CFU/尾左右，鰻弧菌MHK9和MHK13的半數致死量都在107CFU/尾以上，屬于非致病性菌株。遲緩愛德華氏菌JN、SMQ34和MHK2對大菱鲆的半數致死量在103~104CFU/尾，MHK25的半數致死量超過107CFU/尾，也屬于非致病性菌株。

表4 分離菌株對大菱鲆的半數致死量

Tab.4 The 50% lethal dose of isolates in turbot

3 討論

本研究采用16S rRNA基因序列測定及比對分析方法，對1999~2012年從發病海水養殖鲆鰈類中分離到的124株細菌進行了分類地位的分析。結果表明，分離到的弧菌菌株最多，占66.9%，表明弧菌病仍然是中國鲆鰈類養殖的主要疾病。弧菌廣泛分布于海洋和河口環境，共發現有66個種(Garrity, 2004)，其中，對于水生動物危害嚴重的常見種類有鰻弧菌、溶藻弧菌、哈氏弧菌、創傷弧菌、擬態弧菌()和河弧菌()等。本研究表明，溶藻弧菌、魚腸道弧菌、大菱鲆弧菌、哈氏弧菌和鰻弧菌為江蘇、山東、河北和天津鲆鰈類養殖場發病魚分離到的優勢種。鰻弧菌是鲆鰈類常見的致病菌，本研究共分離到9株鰻弧菌，占分離弧菌的10.84%。另外，還分離到創傷弧菌、河弧菌、燦爛弧菌、費氏弧菌 ()、梅氏弧菌()、美人魚弧菌()、病海魚弧菌()、棲黑海弧菌 ()，這些弧菌感染水產動物并引起疾病的事件在國內外均有報道(Austin, 2007; Xie, 2007)。在分離得到的弧菌中，溶藻弧菌、創傷弧菌為食源性致病菌，可引起人類食物中毒(Austin, 2010)，這表明對水產品來源的弧菌監測應當成為食品安全監管的重要內容。

氣單胞菌屬的細菌為人魚共患病原，其中，殺鮭氣單胞菌、嗜水氣單胞菌()、維隆氣單胞菌()是引起魚疾病的主要病原(Austin, 2007)。本研究鑒定的11株氣單胞菌，分別為殺鮭氣單胞菌、維隆氣單胞菌和異常嗜糖氣單胞菌 ()。殺鮭氣單胞菌是鮭科魚類的主要病原，引起鮭鱒魚的病害并造成嚴重經濟損失(Austin, 2007)，在中國已發現該病原可感染石鰈()、刺參()等養殖對象(曹成易等, 2009; 楊嘉龍等, 2007; 張曉君等, 2005)；維隆氣單胞菌宿主廣泛，可感染多種淡水養殖魚類(Janda, 2010)，在海水魚類的腸道中也廣泛存在(Herrera, 2006)，在養殖環境惡化或病原感染的情況下，可能會入侵魚體引起繼發性感染；異常嗜糖氣單胞菌也在西班牙養殖的歐洲鰻鱺()中有感染報道(Martinez-Murcia, 1992)。

遲緩愛德華氏菌能感染許多動物并引發愛德華氏菌病，感染的動物包括魚類、兩棲類、爬行類直到哺乳類(Thune, 1993)。多年來，中國北方的重要水產養殖品種如大菱鲆、牙鲆()、半滑舌鰨()等常受到遲緩愛德華氏菌感染，經濟損失嚴重(王印庚等, 2007; 李杰等, 2008)，給水產養殖業造成了嚴重影響。目前，遲緩愛德華氏菌是該屬唯一可以感染人的致病菌，給水產食品安全帶來威脅，應引起廣泛的重視。

鰻弧菌和遲緩愛德華氏菌是近年來常見的鲆鰈類致病菌，針對這2種病原，對分離得到的菌株進行了大菱鲆感染實驗。在分離到的9株鰻弧菌中，7株對大菱鲆具有較強的致病性；4株遲緩愛德華氏菌中，3株對大菱鲆有較強的致病性。近年來，隨著鲆鰈類養殖業的發展，疾病種類也不斷增加(李杰等, 2019)。中國鲆鰈類大規模養殖起源于20世紀90年代，本研究中檢測的菌株大多是實驗室在2000年左右分離(表1)，這表明在規模化養殖初期，這些病原就開始危害中國的養殖鲆鰈類，在今后的水產養殖疾病預防中需對其進行特別關注和重視。

有26株細菌未能鑒定到種的地位，分別為假單胞菌屬、假交替單胞菌屬、冷桿菌屬(sp.)、嗜鹽單胞菌屬(sp.)等15個屬。假單胞菌屬細菌是動植物、人類常見的病原，能引起養殖鲆鰈類的脫鱗癥(Li, 2018)。假交替單胞菌對海洋動物致病性的報道不多，在中國已發現該屬細菌可引起刺參、七帶石斑魚()疾病 (王印庚等, 2006; 孟慶國等, 2006; 喬遷等, 2010)。其他13個種屬的細菌為水環境的菌株，對水生動物的致病性尚未有報道，其致病性需要通過進一步的研究來確定。

鲆鰈類的規模化養殖在中國已有20多年歷史，病害是影響鲆鰈類養殖業的重要因素，不僅引起魚類死亡造成直接經濟損失，而且可能導致藥物濫用引起藥殘超標，造成消費者恐慌，進而影響市場價格。目前，國內對養殖魚類的發病情況報道多集中于個體病例分析，缺乏對產業病害的整體分析，更缺乏規模化養殖起步階段的病害情況資料。本研究對實驗室自1999年以來從發病養殖鲆鰈類中分離的124株菌株進行了鑒定和綜合分析，初步確定了中國養殖鲆鰈類主要流行的細菌性病原，為病害防治、流行病衍化和疫苗開發提供了基礎數據。

Austin B, Austin DA. Bacterial fish pathogens: Disease of farmed and wild fish (4th ed.). Godalming, UK: Springer Praxis, 2007, 243–279

Austin B. Vibrios as causal agents of zoonoses. Veterinary Microbiology, 2010, 140(3–4): 310–317

Borrell N, Acinas SG, Figueras MJ,. Identification ofclinical isolates by restriction fragment length polymorphism of PCR-amplified 16S rRNA genes. Journal of Clinical Microbiology, 1997, 35(7): 1671–1674

Cao CY, Wang KY, Wang L,. Isolation and identification of pathogenic bacteria causing ulcer disease of Atlantic salmon. Freshwater Fisheries, 2009, 39(1): 54–57 [曹成易, 汪開毓, 王玲, 等. 大西洋鮭殺鮭氣單胞菌的分離鑒定. 淡水漁業, 2009, 39(1): 54–57]

Dong XZ, Hong JH. Diversity of prokaryotic microorganisms. Biodiversity Science, 2001, 9(1): 18–24 [東秀珠, 洪俊華. 原核微生物的多樣性. 生物多樣性, 2001, 9(1): 18–24]

Fryer JL, Rohovec JS. Bacterial diseases of fish. Pathology of marine and estuarine organisms. Boca Raton, CRC Press, 1993, 53–83

Garrity GM, Bell JA, Lilburn TG. Taxonomic outline of the prokaryotes. Bergey’s manual of systematic bacteriology. New York, Berlin, Heidelberg: Springer, 2004

Herrera FC, Santos JA, Otero A,. Occurrence of foodborne pathogenic bacteria in retail prepackaged portions of marine fish in Spain. Journal of Applied Microbiology, 2006, 100(3): 527–536

Janda JM, Abbott SL. The genus: Taxonomy, pathogenicity and infection. Clinical Microbiology Reviews, 2010, 23(1): 35–73

Lane DJ. 16S/23S rRNA sequencing. In: Stackebrandt E, Goodfellow M, eds. Nucleic acid techniques in bacterial systematics. Chichester: J. Wiley & Sons, 1991, 125–175

Li J, Chen SQ, Liu CL,. Association ofwith mortalities in cultured spotted halibut(Temminck & Schlegel, 1846) in China. Aquaculture Research, 2018, 49(5): 2078–2080

Li J, Liu YK, Bai L,. Isolation and identification ofassociated with splenic and renal granulomas disease of cultured turbot (). Progress in Fishery Sciences, 2019, 40(5): 195–200 [李杰, 劉耀寬, 白露, 等. 大菱鲆脾腎結節病病原菌的分離和鑒定. 漁業科學進展, 2019, 40(5): 195–200]

Li J, Mo ZL, Mao YX,. Isolation and classification of two pathogenic bacteria associated with hamorrhages of. Marine Sciences, 2008, 32(10): 1–5 [李杰, 莫照蘭, 茅云翔, 等. 兩株養殖大菱鲆體表出血病原菌的分離鑒定. 海洋科學, 2008, 32(10): 1–5]

Martinez-Murcia AJ, Esteve C, Garay E,.sp. nov., a new mesophilic member of the genus. FEMS Microbiology Letters, 1992, 91(3): 199–205

Meng QG, Wu LJ, Wu XZ,. The pathogen of ulcerative disease in cultivated juvenile sea cucumber. Fisheries Science, 2006, 25(12): 635–639 [孟慶國, 吳劉記, 吳信忠, 等. 養殖刺參潰瘍病病原學研究. 水產科學, 2006, 25(12): 635–639]

Qiao Q, Han NN, Chen C,. Isolation and identification of pathogenicsp.and antibiotic sensitivity research. Journal of Anhui Agricutural Science, 2010, 38(26): 14224–14226, 14232 [喬遷, 韓娜娜, 陳超, 等. 致病性假交替單胞菌的分離鑒定及藥敏特性研究. 安徽農業科學, 2010, 38(26): 14224–14226, 14232]

Thune RL, Stanley LA, Cooper RK. Pathogenesis of gram- negative bacterial infections in warmwater fish. Annual Review of Fish Diseases, 1993, 3: 37–68

Wang YG, Fang B, Zhang CY,. Etiology of skin ulcer syndrome in cultured juveniles ofand analysis of reservoir of the pathogens. Journal of Fishery Sciences of China, 2006, 13(4): 610–616 [王印庚, 方波, 張春云, 等. 養殖刺參保苗期重大疾病“腐皮綜合征”病原及其感染源分析. 中國水產科學, 2006, 13(4): 610–616]

Wang YG, Qin L, Zhang Z,. Edwardsiellosis in cultured. Journal of Fisheries of China, 2007, 31(4): 447–495 [王印庚, 秦蕾, 張正, 等. 養殖大菱鲆的愛德華氏菌病. 水產學報, 2007, 31(4): 447–495]

Xie ZY, Hu CQ, Zhang LP,. Identification and pathogenicity ofaffecting cultured Japanese sea bass,(Cuvier in Cuvier and Valenciennes). Letters in Applied Microbiology, 2007, 45(1): 62–67

Yang JL, Zhou L, Xing J,. Identification ofassociated with skin ulceration of cultured sea cucumberand characterization of the extracellular products. Journal of Fishery Sciences of China, 2007, 14(6): 981–989 [楊嘉龍, 周麗, 邢婧, 等. 養殖刺參潰瘍病殺鮭氣單胞菌的分離、致病性及胞外產物特性分析. 中國水產科學, 2007, 14(6): 981–989]

Yang MC. Veterinary statistics. Beijing: China Prospect Publishing House, 1990, 232–234[楊茂成. 獸醫統計學. 北京: 中國展望出版社, 1990, 232–234]

Yang X, Chen L, Wang CQ. Advance in application of 16S rRNA gene in bacteriology. Journal of Northwest A & F University (Natural Science), 2008, 36(2): 55–60 [楊霞, 陳陸, 王川慶. 16S rRNA基因序列分析技術在細菌分類中應用的研究進展. 西北農林科技大學學報(自然科學版), 2008, 36(2): 55–60]

Zhang XJ, Fang H, Chen CZ,. Studies on characterization ofsubsp.subsp. Nov. from diseased stone flounder (L.). Oceanologia et Limnologia Sinica, 2005, 36(1): 51–60 [張曉君, 房海, 陳翠珍, 等. 石鰈(L.)源殺鮭氣單胞菌殺鰈亞種生物學性狀的研究. 海洋與湖沼, 2005, 36(1): 51–60]

Zhang XL,. Aquatic animal health in China, 2017. Beijing: China Agriculture Press, 2018 [張顯良, 等. 2017年中國水生動物衛生狀況報告. 北京: 中國農業出版社, 2018]

Sequencing and Phylogenetic Analysis of the 16S rRNA Genes of Bacterial Strains Isolated from Diseased Flatfish

LAN Xin1,2, LI Jie3, LI Guiyang3, XIAO Peng1, MO Zhaolan3①

(1. Institution of Oceanology, Chinese Academy of Sciences, Qingdao 266071; 2. Graduate University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049; 3. Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences; Key Laboratory of Maricultural Organism Disease Control, Ministry of Agriculture and Rural Affairs; Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Pilot National Laboratory for Marine Science and Technology (Qingdao), Qingdao 266071)

Flatfish are the major industrial aquaculture marine fish species bred in North China. During the culturing process, members of this species are exposed to infection from a variety of pathogens. Diseases caused by bacterial pathogensare the major cause of harm to cultured flatfish in China. To investigate the bacterial pathogens that affect flatfish, we focused on 124 strains isolated from organs of diseased flatfish in Shandong, Jiangsu, Hebei, Tianjin and other similar places between 1999 and 2012. The 16S rRNA gene of the isolates was sequenced, analyzed using BLAST (GenBank), and subjected to phylogenetic analysis by using Mega 5.05. The results identified 66.90% of isolates as(83 strains), 8.90% as(11 strains), 3.20% as(4 strains), andother 15 genera (26 strains). According to the phylogenetic tree, 66 strains were identified as 16 species; the dominant species were.,.,.,.,.,.,.,., and.. To evaluate the pathogenicity of isolates, the virulence of.and.strains isolated from diseased fish was further determined by experimental infection based on the 50% lethal dose (LD50) in turbot (). The results showed that seven.strains and three.strains were pathogenic to fish. The LD50values were 105.1to 106.8CFU/fish for pathogenic.and 103.4to 104.1CFU/fish for pathogenic.. There were also two strains of.and one strain of.that showed low virulence to turbot, with an LD50higher than 107CFU/fish. The presented results provide significant information to ascertain the bacterial pathogens of flatfish, which is important for establishing strategies for the epidemiology, monitoring, and control of bacterial diseases.

Flatfish; Pathogen; 16S rRNA gene; Phylogenetic analysis; Identification

MO Zhaolan, E-mail: mozl@ysfri.ac.cn

* 國家重點研發計劃(2018YFC0311300)、中央級公益性科研院所基本科研業務費專項(2019ZD0706)和鰲山科技創新計劃(2015ASKJ02)共同資助[This work was supported by National Key R&D Program of China(2018YFC0311300), Central Public-Interest Scientific Institution Basal Research Fund (2019ZD0706), and Aoshan Technology Innovation Program (2015ASKJ02)]. 蘭 欣，E-mail: lanxinqd@vip.qq.com

莫照蘭，研究員，E-mail: mozl@ysfri.ac.cn

2019-01-28,

2019-03-19

S943

A

2095-9869(2020)03-0142-09

10.19663/j.issn2095-9869.20190128001

http://www.yykxjz.cn/

蘭欣, 李杰, 李貴陽, 肖鵬, 莫照蘭. 發病鲆鰈類分離菌株的16S rRNA基因測序分析. 漁業科學進展, 2020, 41(3): 142–150

Lan X, Li J, Li GY, Xiao P, Mo ZL. Sequencing and phylogenetic analysis of the 16S rRNA genes of bacterial strains isolated from diseased flatfish. Progress in Fishery Sciences, 2020, 41(3): 142–150

(編輯 馬璀艷)