三種不同劑型四君子制劑對脾氣虛證大鼠血清SOD活性和MDA含量影響及以方測證研究*

孫豪嫻，孫貴香，鄧琳蓉，張 婷，肖 丹，厲佳俊

湖南中醫藥大學(長沙 410208)

顆粒劑膏是現在臨床上運用最新的制藥技術出現的一種新型膏劑，區別于傳統湯劑與傳統膏劑，顆粒劑膏不僅具備了膏滋的緩補作用，還結合了顆粒劑藥物口感好、煎煮方便等優點。但對于顆粒劑膏與傳統膏、傳統飲片湯劑之間的療效是否存在差異目前還未見詳細研究報道。因此，本研究從四君子湯、傳統四君子膏、顆粒四君子膏出發，以脾氣虛證模型大鼠為研究對象，主要從大鼠體重、肛溫、血清SOD活性水平、MDA水平等方面對比三組不同四君子制劑之間的作用差別，旨在對顆粒劑膏的療效進行評估，為顆粒劑膏能否運用于臨床提供實驗依據。

材料與方法

1 材 料

1.1 實驗動物：SPF級SD大鼠(180±20g)共50只，雌雄各半，體重(200±20)g，購自湖南中醫藥大學，合格證號：SYXK(湘)2013-0005。飼養于湖南中醫藥大學動物實驗研究中心，實驗室內溫度控制在20～22℃，相對濕度維持在50%～60%。所用飼料和墊料均購自湖南中醫藥大學動物實驗研究中心。

1.2 試藥：大鼠超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)試劑盒(Andygene biotechnology公司)；大黃制劑液，四君子湯，成品顆粒劑四君子膏、傳統四君子膏均按照四君子湯比例由深圳華潤三九醫藥有限公司制造提供。

1.3 儀器：JE1002電子天平(精密度：0.01 g)、WMY-01數字溫度計、低溫高速離心機、EL34oi型全自動酶標儀、微量式移液器、室內游泳槽、冰箱等。

2 實驗方法

2.1 分組：將50只大鼠依次編號，采用國際上通用的編號表計，隨機分為5組，即正常組、模型組、四君子湯組、傳統四君子膏組、顆粒四君子膏組，每組均10只大鼠。

2.2 藥液制備：傳統四君子膏、顆粒四君子膏藥液：參照《人與動物用藥量換算表》，按照體表面積折算等效劑量。四君子膏服用方法為成人2次/d，每次一調匙(約30 g)，則體重200 g的大鼠每日服用約1.16 g四君子膏。按照該劑量將傳統四君子膏劑、顆粒劑四君子膏劑加純凈蒸餾水稀釋配制灌胃藥液。四君子湯組藥液：以《太平惠民和劑局方》為依據：人參、茯苓、白術(炒)各9 g，甘草(炙)6 g，組方成藥，煎煮兩次，同樣依據以上換算法濃縮配制藥液。大黃制劑液：以成人每日服用大黃量為6 g換算，濃縮制備藥液。

2.3 造模：采用飲食失節、耗氣破氣、勞倦過度法復制脾氣虛證大鼠模型[1]。飲食失節：正常組大鼠每日正常飲水、進食及活動，其余四組大鼠隔日進食，自由飲水；耗氣破氣：于每天上午9點給予正常組大鼠灌胃0.9%的Nacl，余四組予大黃制劑液灌胃；勞倦過度：除正常組外其他組大鼠每日下午15點負重10%，于水深50 cm，水溫(22±2)℃的室內游泳槽中游泳，以力竭為度(大鼠鼻尖沒入水面10 s)。

2.4 給藥：采取邊造模邊給藥的方法，于每日下午16點，四君子湯組、傳統四君子膏組、顆粒四君子膏組分別予以各組制備藥液，正常組、模型組則予以等量0.9%的Nacl溶液。連續28 d。

2.5 觀察指標：①實驗全程觀測動物的毛色、精神狀態、糞便情況、游泳時間、食物量、飲食量等變化，比較各組間癥狀與體征的區別。②大鼠體重與肛溫的測定：每兩天稱量一次各組大鼠的體重，并且對各組大鼠的肛溫進行測量，并記錄數據。③大鼠血清SOD、MDA水平測定：造模給藥結束后次日，各組大鼠稱重后水合氯醛麻醉，腹主動脈取血，放置凝后于低溫下以3000 r/min的轉速進行離心15 min，采用ELISA法測大鼠血清中SOD活性和MDA含量，測量方法按照試劑盒的說明書進行。

結 果

1 一般情況 正常組大鼠飲食、飲水正常，毛發有光澤，活動較多，反應靈敏；模型組大鼠于第4、5天開始排泄不成形大便，第9、10天開始出現拉尾排便，且排便次數增多，食量、飲水量減少，后出現扎堆、蜷縮，反應較遲鈍，毛發無光澤，隨著時間的推移，力竭游泳的時間逐漸縮短；四君子湯組、傳統四君子膏組、顆粒四君子膏組大鼠一般情況表現接近正常組。

2 對大鼠體重、肛溫的影響 造模前，大鼠的體重與肛溫組間比較差異無統計學意義(P>0.05)。造模后，與正常組相比，其余四組大鼠的體重與肛溫都有所下降 (P<0.05)。與模型組相比，四君子湯組、傳統四君子膏組、顆粒四君子膏組大鼠的體重及肛溫均有所升高 (P<0.05)。三組四君子制劑組間比較提示，四君子湯組、傳統四君子膏組、顆粒四君子膏組三組大鼠的肛溫與體重差異無統計學意義(P>0.05)。見表1、表2。

表1 各組大鼠造模前后體重變化(g)

表2 各組大鼠造模前后肛溫變化(℃)

3 對血清SOD活性和MDA含量的影響 與正常組相比，模型組大鼠的SOD活性水平降低，MDA水平升高，差異具有統計學意義(P<0.05)；與模型組相比，四君子湯、傳統四君子膏、顆粒四君子膏組大鼠血清SOD活力均有所提高(P<0.05)，血清MDA濃度均低于模型組(P<0.05)；三組四君子制劑組間相互比較，四君子湯組、傳統四君子膏組、顆粒四君子膏組，三組大鼠之間的SOD活性水平、MDA水平差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 各組大鼠SOD活性水平、MDA水平的比較

注：與正常組比較,*P<0.05；與模型組比較,△P<0.05；與四君子湯組比較,▲P<0.05；與傳統四君子膏組比較,□P<0.05

討 論

縱觀脾氣虛證的造模方法，目前運用的形式多樣化，有耗氣破氣法、飲食失節法、勞倦過度法、利血平法等，但大部分造模方法存在穩定性較差、恢復較快等問題[1]。諸多學者研究表明，多因素復合建立起的動物模型具有良好的穩定性[2]。因此，本實驗參考中醫理論中致病因素的內容，采取飲食失節加耗氣破氣加勞倦過度法的方法復制脾氣虛證大鼠模型。造模后，模型組大鼠相繼出現食少納差、便溏倦怠、神疲遲鈍等脾氣虛證的表現，同時其反應細胞損傷程度的指標MDA的含量，及能夠還原過氧化物，保護細胞不受自由基損傷的指標SOD的活性水平[3-4]較正常組存在明顯改變，提示脾氣虛證大鼠存在氧化損傷，其組織細胞清除氧自由基的能力下降。

四君子湯出自于宋代的《太平惠民和劑局方》，全方由人參、白術、茯苓、甘草四藥組成，方中人參甘溫，補元氣，益中氣，白術溫脾燥濕，茯苓淡滲，健脾除濕，甘草益胃和中，調和諸藥[5-6]。因選藥平和，方中均為中和之品，故名曰君子[7]，該方具有益氣健脾的功效，是治療脾氣虛證的基礎方[8-9]。對比模型組，四君子湯組大鼠在灌胃四君子湯后其飲食、大便、精神狀態得到明顯改善，其血清中的SOD活性水平增高，MDA含量減少，說明四君子湯能夠增加大鼠的活性氧清除機制，緩解氧自由基的損害，對造模后的大鼠具有治療性作用。本實驗建立的大鼠模型符合脾氣虛證模型。證明運用飲食失節、耗氣破氣、勞倦過度法的方法復合建立脾氣虛證大鼠模型符合中醫理論，與相應的中醫證候一致，并經得起藥物反證，說明該造模方法是切實可行的。

中藥顆粒劑的應用始于20世紀70年代，隨著制備技術的不斷提高和制備工藝的不斷完善，顆粒劑在臨床上的使用頻率也越來越高[10]。何佳奇等[11]對2012年至2016年在浙江省有中藥配方顆粒生產銷售的企業和使用中藥配方顆粒的醫療機構進行了統計調查，發現2012年至2016年5年，中藥配方顆粒在浙江省醫療機構的銷售額呈逐年遞增趨，該結果提示配方顆粒在臨床上的使用頻率也逐年增長。沈光輝等[12]對重慶市某社區醫院2015年1月至2017年8月中藥配方顆粒和小包裝飲片臨床消費情況進行統計分析，發現中藥配方顆粒在該院門診部處方和金額中的占比在逐年遞增，得出中藥配方顆粒已逐漸被大眾接受和認可的結論。不僅如此，顆粒劑既具備傳統湯劑吸收快、作用迅速的特點，又克服了傳統湯劑煎煮不便、服用量大、易霉變等不足[13]，在臨床上藥材劑型選擇中扮演著越來越重要的角色。

膏劑是一種將飲片藥物用水再三煎煮，去滓濃縮后加蜂蜜或冰糖收膏制成的呈半流體狀的劑型，是中醫常用八大劑型中的重要組成部分[14]。《山海經》言其：“言味好皆滑為膏，如指內容，以為物之精粹，如指作用，以滋養膏潤為長”，近代名醫秦伯未云膏方：“蓋煎熬藥汁成脂溢而所以營養五臟六腑之枯燥虛弱者”[15]，指出了膏劑的緩慢滋養作用，長期服用，不僅可以療病祛疾，還具有補益虛羸、改善體質等作用。

顆粒四君子膏是由參苓術草這四味主藥按照一定的比例煉制而成。在制作上，對比傳統飲片膏，顆粒四君子膏的制作原料選用配方顆粒，制作主要包含溶解、濃縮、收膏三大步驟，省去了傳統膏劑制作前期浸泡、一煎、二煎、過篩等繁瑣的工藝，節約了人力物力[16]。在功效上，傳統四君子膏組、顆粒四君子膏組大鼠的體重、肛溫、血清SOD活性水平、MDA含量較模型組均有變化，說明四君子膏在對脾氣虛證大鼠的情況改善上存在較好的療效，進一步驗證了其益氣健脾的作用。組間比較發現，在體重和肛溫上，兩組的均值都低于正常組，且顆粒四君子膏組與四君子湯組大鼠的體重與肛溫值較接近，稍高于傳統四君子膏組，但組間的差異不具有統計學意義，說明傳統四君子膏與顆粒四君子膏在對大鼠體重和肛溫的影響上效應相同。對比組間血清SOD活性和MDA的含量，兩者均較模型組存在差異，提示四君子膏可以提高脾氣虛證模型大鼠的SOD活力，降低MDA濃度。雖然二者在數值上存在上下小幅度的偏差，但差異無統計學意義，說明傳統四君子膏與顆粒四君子膏在對大鼠血清SOD活性和MDA的含量的影響上效應相同。提示在一定程度上傳統四君子膏與顆粒四君子膏均可抑制大鼠體內細胞的過氧化反應，保護其不受氧自由基的損傷。

綜上可知，傳統四君子膏與顆粒四君子膏均有較好的益氣健脾的作用，對于脾氣虛證的治療具有較好的效果，且兩者在療效上無明顯差異，與四君子湯的效果相比也無明顯區別。因此在臨床處方劑型上，我們可以根據患者自身的疾病及需求情況，考慮是否選擇膏劑對其進行治療；在膏劑的制作上，我們亦可以結合患者的顧慮喜好，考慮是否選擇顆粒劑來進行膏劑的制備。醫者不僅需要做到“用藥如用兵”，還需要針對患者的具體的情況選用不同的中藥制劑，以充分發揮各自的優勢，取得理想的療效。