GeneXpert MTB/RIF在結(jié)核病診斷及利福平耐藥檢測中的應(yīng)用分析

關(guān)麗迎

廣東省江門市結(jié)核病防治所檢驗(yàn)科，廣東江門 529000

臨床中對(duì)結(jié)核病較難控制的一個(gè)重點(diǎn)就是確診耗時(shí)十分長、且敏感度不理想[1]。而在針對(duì)出現(xiàn)耐藥性的結(jié)核病方面，特別是耐多藥結(jié)核的臨床診斷方面存在一定的滯后現(xiàn)象，導(dǎo)致出現(xiàn)治療延后及疾病傳播等現(xiàn)象。所以尋找一種快速診斷結(jié)核病及耐多藥情況的檢測方法對(duì)提高臨床對(duì)結(jié)核病的診斷及治療水平都具有十分積極的意義[2]。Gene Xpert MTB/RIF 系統(tǒng)（以下簡稱MTB/RIF 系統(tǒng)）首次在2010 年被WHO 批準(zhǔn)在臨床對(duì)結(jié)核病的診斷當(dāng)中應(yīng)用，因其諸多優(yōu)點(diǎn)，如靈敏度高、特異性高及操作更加簡便等逐漸在臨床中得到關(guān)注及應(yīng)用[3]。選取2017 年9 月～2019 年3 月我院收治的肺結(jié)核患者123 例，采集所有患者的痰標(biāo)本，分別進(jìn)行MTB/RIF 系統(tǒng)檢測、結(jié)核分枝桿菌分離培養(yǎng)及涂片抗酸染色鏡檢（以下簡稱涂片鏡檢），分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017 年9 月～2019 年3 月我院收治的肺結(jié)核患者123 例，其中，男75 例，女48 例，年齡18 ～70 歲，平均（43.6±2.2）歲。依據(jù)肺結(jié)核的不同臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，其中，確診肺結(jié)核患者為53 例，臨床診斷肺結(jié)核患者為70 例。

臨床診斷肺結(jié)核患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]：經(jīng)胸部影像學(xué)檢查，符合臨床中肺結(jié)核的影像學(xué)表現(xiàn)，同時(shí)符合下述所有指標(biāo)當(dāng)中的任一項(xiàng)：（1）存在可疑的肺結(jié)核癥狀或（和）全身性癥狀；（2）經(jīng)結(jié)核菌素試驗(yàn)結(jié)果提示呈強(qiáng)陽性，硬結(jié)直徑≥20mm，或者局部出現(xiàn)淋巴管炎、壞死及水皰；（3）血清抗結(jié)核抗體檢測結(jié)果呈陽性；（4）對(duì)肺外組織進(jìn)行病理檢查，證實(shí)存在結(jié)核病變；（5）經(jīng)診斷性治療或者隨訪觀察，排除其他的相關(guān)肺部疾病者。

臨床確診肺結(jié)核患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]：符合下述所有指標(biāo)當(dāng)中的任一項(xiàng)：（1）患者的2 份痰樣本進(jìn)行涂片鏡檢結(jié)果全部呈陽性；（2）患者的1 份痰樣本進(jìn)行涂片鏡檢呈陽性，且對(duì)胸部進(jìn)行影像學(xué)檢查提示，符合臨床中肺結(jié)核的相關(guān)影像學(xué)表現(xiàn)；（3）患者的1 份痰樣本涂片鏡檢結(jié)果呈陽性，且1 份痰樣本的結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)呈陽性；（4）患者的1 份痰樣本經(jīng)結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果呈陽性，且經(jīng)胸部影像學(xué)檢查，符合臨床中肺結(jié)核的相關(guān)影像學(xué)表現(xiàn)。

1.2 方法

1.2.1 涂片鏡檢 采集所有患者的痰樣本，進(jìn)行涂片、染色及抗酸桿菌的鏡檢。陰性標(biāo)準(zhǔn)：鏡檢下未見抗酸桿菌；陽性標(biāo)準(zhǔn)：鏡檢下可見抗酸桿菌。

1.2.2 結(jié)核分枝桿菌分離培養(yǎng) 留取所有患者的1mL 痰樣本，依據(jù)試劑說明書來進(jìn)行分離培養(yǎng)；通過抗酸染色證實(shí)是抗酸菌，再通過結(jié)核分枝桿菌的抗原檢測試劑盒進(jìn)行鑒定。

1.2.3 藥敏試驗(yàn) 培養(yǎng)結(jié)果呈陽性的結(jié)核分枝桿菌采用比例法做藥敏試驗(yàn)。

1.2.4 MTB/RIF 系統(tǒng) 留取所有患者的1mL 痰樣本，放置在無菌試管當(dāng)中，在試管當(dāng)中加入配套的消化液約2mL，渦旋振蕩20s，室溫下靜置15min；再將2mL 的處理液加入到樣本反應(yīng)盒當(dāng)中，蓋緊蓋之后使用儀器進(jìn)行測試。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 觀察比較MTB/RIF 系統(tǒng)與抗酸桿菌分離培養(yǎng)跟涂片鏡檢間的檢測陽性率差異。

1.3.2 觀察比較在利福平耐藥檢測中MTB/RIF 系統(tǒng)與比例法藥敏試驗(yàn)結(jié)果的差異。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS22.0 進(jìn)行分析，所有數(shù)據(jù)當(dāng)中，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（）表示，組間比較采用t 檢驗(yàn)；P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MTB/RIF系統(tǒng)與抗酸桿菌分離培養(yǎng)跟涂片鏡檢間的檢測陽性率比較

在53 例確診肺結(jié)核組患者的痰樣本當(dāng)中，MTB/RIF 系統(tǒng)跟抗酸桿菌分離培養(yǎng)都呈陽性，但是涂片鏡檢僅有35 例呈陽性；在70 例臨床診斷肺結(jié)核患者的痰樣本當(dāng)中， MTB/RIF 系統(tǒng)檢測呈陽性者8 例，但是抗酸桿菌分離培養(yǎng)跟涂片鏡檢結(jié)果均呈陰性。在所有123 例患者當(dāng)中，MTB/RIF 系統(tǒng)的檢測陽性率為49.6%，分離培養(yǎng)的陽性率為43.1%，涂片鏡檢的檢測陽性率為28.5%；在確診肺結(jié)核組患者的檢測當(dāng)中，MTB/RIF 系統(tǒng)的檢測陽性率為100.0%、分離培養(yǎng)的檢測陽性率為100.0%、涂片鏡檢的檢測陽性率為66.0%；在臨床診斷肺結(jié)核組當(dāng)中，MTB/RIF 系統(tǒng)的檢測陽性率為11.4%、分離培養(yǎng)的檢測陽性率為0、涂片鏡檢的檢測陽性率為0。MTB/RIF 系統(tǒng)在結(jié)核分枝桿菌的檢測陽性率顯著高于涂片鏡檢，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.492，P=0.019），略高于抗酸桿菌分離培養(yǎng)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.087，P=0.274），見表1。

表1 MTB/RIF系統(tǒng)與抗酸桿菌分離培養(yǎng)跟涂片鏡檢間的檢測陽性率比較[n（%）]

2.2 利福平耐藥檢測中MTB/RIF系統(tǒng)與比例法藥敏試驗(yàn)結(jié)果比較

MTB/RIF 系統(tǒng)檢測結(jié)果出現(xiàn)利福平耐藥的患者13 例，比例法藥敏試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)利福平耐藥的患者為14 例，兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.198，P ＞0.05），見表2。

表2 在利福平耐藥檢測中MTB/RIF系統(tǒng)與比例法藥敏試驗(yàn)比較

3 討論

目前臨床中在結(jié)核病的臨床診斷方面，尤其是在涂陽肺結(jié)核及結(jié)核病耐藥方面的臨床診斷主要是通過結(jié)核病的相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果來進(jìn)行診斷的[6]。目前，臨床實(shí)驗(yàn)室當(dāng)中常用的檢測方法主要包括樣本培養(yǎng)及涂片鏡檢；但是在肺結(jié)核患者當(dāng)中，痰涂片檢測的陽性率通常在50%左右，分離樣本培養(yǎng)的陽性檢出率在60%左右[7]。而在臨床中所有活動(dòng)性肺結(jié)核患者當(dāng)中，涂陰肺結(jié)核患者約占到75%左右；所以，會(huì)在約67%的肺結(jié)核患者痰樣本當(dāng)中不能檢測出結(jié)核分枝桿菌，以致出現(xiàn)臨床誤診及誤治[8]。

MTB/RIF 系統(tǒng)是臨床當(dāng)中全新的一種對(duì)肺結(jié)核早期發(fā)現(xiàn)、快速診斷的檢測方式，在臨床對(duì)結(jié)核病進(jìn)行診斷及治療過程當(dāng)中具有里程碑的意義[9]。研究指出，通過MTB/RIF 系統(tǒng)能夠代替臨床中的抗酸涂片鏡檢，能夠使得結(jié)核病的檢出率顯著提高[10]。同時(shí)還有研究指出，通過MTB/RIF 系統(tǒng)來替代傳統(tǒng)藥敏能夠耐多藥的結(jié)核檢出率提高3 倍[11]。本研究結(jié)果提示，MTB/RIF 系統(tǒng)在結(jié)核分枝桿菌的檢測陽性率顯著高于涂片鏡檢，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05），略高于結(jié)核分枝桿菌分離培養(yǎng)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。

針對(duì)結(jié)核分枝桿菌的菌株，rpoB 基因在鑒定利福平耐藥檢測當(dāng)中具有重要的意義[12]。而MTB/RIF 系統(tǒng)就是通過對(duì)樣本當(dāng)中的rpoB 基因片段突變區(qū)進(jìn)行檢測，從而簡便、快速地獲取到藥物的耐藥情況[13]。且其檢測所需時(shí)間較短，能夠在2h 之內(nèi)快速得出檢測結(jié)果[14]。而傳統(tǒng)的培養(yǎng)法藥敏試驗(yàn)，不僅需要2 周左右的培養(yǎng)時(shí)間，還需要28d左右的培養(yǎng)藥敏[15]。由此可見，在檢測時(shí)效方面MTB/RIF 優(yōu)勢顯著。本研究結(jié)果提示，MTB/RIF 系統(tǒng)檢測結(jié)果出現(xiàn)利福平耐藥的患者13 例，比例法藥敏試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)利福平耐藥的患者為14 例，兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。本研究中還有部分樣本在MTB/RIF 系統(tǒng)中呈陽性，但是不能培養(yǎng)菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。這一現(xiàn)象提示，MTB/RIF 系統(tǒng)在檢測利福平耐藥性方面不僅檢測時(shí)間較短，同時(shí)還能夠直接使用臨床標(biāo)本進(jìn)行檢測，無需前期培養(yǎng)，優(yōu)勢明顯[16]。

綜上所述，使用GeneXpertMTB/RIF 系統(tǒng)能夠更加快速、簡便的對(duì)結(jié)核病進(jìn)行臨床診斷，同時(shí)有效的檢測利福平的耐藥情況，值得應(yīng)用。