羅氏Cobas c702全自動生化分析儀檢測項目性能驗證*

郭東月，覃俊龍，劉小柳，張秀明△

1.廣東省深圳市羅湖區婦幼保健院檢驗科，廣東深圳 518019；2.廣東省深圳市 羅湖區人民醫院醫學檢驗科，廣東深圳 518001

隨著醫學檢驗技術的快速發展，全自動生化分析儀已成為臨床生化檢驗的主要儀器之一。儀器性能的優劣直接關系檢驗質量。為配合實驗室申請ISO15189認證[1]，同時也為了驗證2018年新購入的羅氏 Cobas c702全自動生化分析儀檢測性能，本實驗室依據美國臨床和實驗室標準協會(CLSI) EP15-A3[2]、美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)EP6[3]、NCCLS C28-A2[4]和CLSI EP15-A2[5]文件要求并結合實驗室實際情況對Cobas c702檢測的共計41個項目的精密度、分析測量范圍(AMR)、臨床可報告范圍(CRR)、參考區間驗證及比對試驗進行性能驗證[6-8]。本文選擇天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CKMB)、α-羥丁酸脫氫酶(α-HBDH)、尿素(Urea)、肌酐(CREA)、尿酸(UA)、胱抑素C(CysC)9個項目為例，概述其具體驗證過程，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取來自深圳市羅湖區人民醫院體檢中心的體檢者和患者的新鮮血清標本。

1.2儀器與試劑 羅氏公司生產的Cobas c702全自動生化分析儀及配套試劑，所有試劑均在有效期內使用。AST、LDH、CK、CKMB、α-HBDH、Urea、CREA、UA和CysC檢測試劑盒批號分別為350647、362473、373994、353486、357224、265554、370063、370063、354311。

校準品與質控品 Cobas c702全自動生化分析儀檢測AST、LDH、CK、CKMB、α-HBDH、Urea、CREA、UA和CysC均采用羅氏原裝試劑配套的校準品，批號分別為305596、305596、305596、305624、305596、305596、305596、305596、277906。低、中、高值質控品由伯樂公司提供，批號分別為45801、45802、45803。所有校準品及質控品均在有效期內使用。

1.3方法 檢測日當天先進行室內質控，只有在室內質控在控的情況下方進行后續的試驗。

1.3.1精密度驗證 按操作說明書對儀器進行維護保養、校準和質控檢測。按照CLSI EP15-A3標準：使用2個水平質控品，每一水平每天做一批，每批每個水平重復測定5次，連續檢測5天。計算批內精密度標準差(Sr)、總精密度標準差(S1)、變異系數(CV)。批內精密度值的確定：計算值Sr小于等于實驗室質量目標設定的標準差，表明核實批內精密度與實驗室質量目標一致，如大于實驗室質量目標，則使用驗證值核實實驗室的批內精密度。總精密度值的確定：計算值S1小于等于實驗室質量目標的標準差，表明核實總精密度與實驗室質量目標一致，如大于實驗室質量目標，則使用驗證值核實實驗室的總精密度。

1.3.2AMR驗證 按操作說明書對儀器進行維護保養、校準和質控檢測。按照CLSI EP6文件標準[9-11]：選取接近AMR下限及上限的個體樣本各1個，確保每個個體樣本量接近1.5 mL，分別對這兩樣本進行2次測量，取平均值作為預期值，然后對兩樣本按水平梯度進行稀釋，配制成5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H共6個水平梯度的樣本，分別進行2次重復測量，計算各水平的均值并與其對應的預期值進行線性回歸分析，判斷標準為R2>0.95，b要求在0.97～1.03范圍內[3]。根據相關系數及隨機誤差的不精密度判斷是否呈線性[12-15]，從而核實此項目的AMR是否與廠商聲明一致。

1.3.3CRR驗證 按操作說明書對儀器進行維護保養、校準和質控檢測。選取兩例接近AMR上限的患者樣本重復測量2次，并將樣本稀釋3、5、10倍(確保稀釋后的水平在AMR內)后上機檢測，每個稀釋樣本重復測量2次，通過其均值計算樣本的回收率，回收率在90%～110%，且稀釋的水平在AMR內則稀釋倍數即為可接受。CRR=AMR的上限×最大可稀釋倍數。

1.3.4參考區間驗證 參考NCCLS C28-A2[4]文件，選擇20份體檢合格的健康人標本進行測定，對結果進行統計并對儀器說明書提供的參考區間進行驗證，若20份標本的檢測結果均在儀器說明書提供的參考區間內或超出給定參考區間的標本數量≤2，則驗證通過，否則進行參考區間確立試驗。

1.3.5比對試驗驗證 選取20例涵蓋整個AMR的患者樣本，水平覆蓋試驗系統的AMR，樣本選取滿足參考區間內、外所占比例相近。20例樣本分別在羅氏 Cobas c702全自動生化分析儀及已有貝克曼庫爾特AU5800全自動生化分析儀兩個不同檢測系統各進行1次檢測，比對試驗在3 d內完成，評估兩儀器間的相對偏倚或者絕對偏倚，如偏倚在1/2的實驗室質量目標內，或偏倚大于1/2實驗室質量目標但小于偏倚驗證值，視為比對試驗通過，否則為比對試驗未通過。

2 結 果

2.1批內精密度驗證結果 AST、LDH、CK、CKMB、α-HBDH、Urea、CREA、UA、CysC的批內精密度計算值Sr均小于實驗室質量目標設定的標準差，表明核實批內精密度與實驗室質量目標一致； AST、LDH、CK、CKMB、α-HBDH、Urea、CREA、UA、CysC的總精密度計算值S1小于實驗室質量目標的標準差，表明核實總精密度與實驗室質量目標一致。見表1。

2.2AMR Cobas c702檢測 AST、LDH、CK、CKMB、α-HBDH、Urea、CREA、UA、CysC線性回歸分析呈線性，結果均符合NCCLS EP6[3]的要求，見表2。

表1 精密度驗證結果

表2 AMR驗證結果

注：*表示結論根據NCCLS EP6[3]的要求進行判斷。

2.3CRR驗證結果 結果見表3。

表3 CRR驗證結果

2.4參考區間 20份體檢合格的健康人標本AST、LDH、CK、CKMB、α-HBDH、Urea、CREA、UA、CysC參考區間驗證通過率均≥90%，驗證通過。見表4。

表4 參考區間驗證結果

2.5比對試驗 結果見表5。

表5 比對試驗驗證結果

3 討 論

AST、LDH、CK、CKMB、α-HBDH、Urea、CREA、UA、CysC各項目的批內精密度計算值Sr均小于性能要求的標準差，總精密度計算值S1均小于性能要求的標準差可認為精密度驗證通過。在確認檢測系統精密度符合要求的基礎上，進行AMR及CRR驗證，結果顯示，該儀器各項目檢測線性范圍較寬，線性范圍基本涵蓋了臨床標本分布的水平范圍，線性范圍符合要求。AST、LDH、CK、CKMB、α-HBDH、Urea、CREA、UA、CysC的R2均大于0.95，線性驗證符合NCCLS EP6-A[3]文件的要求。選擇接近線性范圍上限的高值標本作最大稀釋度驗證，因為在實際臨床工作中經常會遇到檢測結果超過該項目線性范圍的情況，需要稀釋標本獲得檢測結果，本試驗以AMR的上限乘以最大的可稀釋倍數作為CRR。該范圍內的標本稀釋后檢驗結果可靠，符合臨床要求。驗證羅氏原裝配套試劑的參考區間是否適用于本實驗室，經驗證均適用。通過與參比系統的比對，相對或者絕對偏倚均小于1/2實驗室質量目標，比對通過。

綜上所述，羅氏Cobas c702全自動生化儀檢測項目的精密度、AMR、CCR、參考區間驗證和比對試驗均通過驗證，儀器能夠滿足醫院臨床檢測需求。