基于Nrf2/HO-1信號通路的夜關門提取物對谷氨酸誘導小鼠海馬細胞HT22損傷的保護作用及機制研究

郭豐　黃山　李斌

中圖分類號 R285 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2020）11-1303-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.11.04

摘 要 目的：基于核因子2（Nrf2）/血紅素加氧酶1（HO-1）信號通路研究夜關門提取物對谷氨酸誘導小鼠海馬細胞HT22損傷的保護作用及機制。方法：采用谷氨酸（5 mmol/L）建立HT22細胞損傷模型后，以水溶性維生素E為陽性對照（50 ?mol/L），采用MTT法檢測0（空白對照）、25、50、100 ?g/mL夜關門的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯提取物預處理12 h后對谷氨酸誘導損傷細胞增殖的影響。以水溶性維生素E為陽性對照（50 ?mol/L），采用2′，7′-二氯熒光黃雙乙酸鹽探針（DCFH-DA）法檢測0（空白對照）、25、50、100 ?g/mL夜關門二氯甲烷提取物預處理12 h后對谷氨酸誘導損傷細胞中活性氧（ROS）水平的影響;以HO-1激動劑鈷-原卟啉為陽性對照，采用Western blotting法檢測0（空白對照）、25、50、100 ?g/mL夜關門二氯甲烷提取物處理24 h后對細胞中HO-1蛋白表達的影響;分別采用Western blotting法（藥物分別處理0.5、1、1.5 h）和免疫熒光染色法（藥物處理1 h）檢測100 ?g/mL夜關門二氯甲烷提取物處理后對細胞核內外Nrf2蛋白表達的影響。采用小干擾RNA（si-RNA）轉染技術進行HO-1基因沉默后，考察100 ?g/mL夜關門二氯甲烷提取物對谷氨酸誘導損傷細胞的存活率以及細胞中ROS水平的影響。結果：與空白對照比較，50、100 ?g/mL夜關門二氯甲烷提取物均可顯著升高細胞的存活率（P<0.05），并降低細胞中ROS水平（P<0.05）;25、50、100 ?g/mL夜關門二氯甲烷提取物均可顯著升高細胞中HO-1蛋白表達水平（P<0.05），100 ?g/mL夜關門二氯甲烷提取物可顯著降低細胞質中Nrf2蛋白水平并升高細胞核中Nrf2蛋白水平（P<0.05）。HO-1基因沉默后，夜關門二氯甲烷提取物對谷氨酸誘導損傷細胞的促增殖以及降低ROS水平的作用被逆轉（P<0.05）。結論：夜關門二氯甲烷提取物可通過激活Nrf2信號通路，誘導HO-1蛋白的表達，從而發揮對谷氨酸誘導損傷HT22細胞的保護作用。

關鍵詞 夜關門;谷氨酸;血紅素加氧酶 1;核因子2;小鼠;海馬細胞HT22;機制

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To study the protective effects of Lespedeza cuneata extract on glutamate-induced hippocampal cells HT22 injury of mice and its possible mechanism based on Nrf2/HO-1 signaling pathway. METHODS： Using glutamate （5 mmol/L） to extablish the injury model of HT22 cells. Using water soluble vitamin E as positive control （50 ?mol/L）， MTT assay was used to detect the effects of 0 （blank control）， 25， 50， 100 ?g/mL petroleum ether extract， dichloromethane extract， ethyl acetate extract of L. cuneata on the proliferation of glutamate-induced injury cellsafter pretreated for 12 h. Using water soluble vitamin E as positive control （50 ?mol/L）， DCFH-DA assay was used to detect the effects of 0 （blank control）， 25， 50， 100 ?g/mL L. cuneata dichloromethane extract on the level of active oxygen （ROS） in glutamate-induced injury cells after pretreated with 12 h. Using HO-1 agonist CoPP as positive control， Western blotting method was used to detect the effects of 0 （blank control）， 25， 50， 100 ?g/mL L. cuneata dichloromethane extract on the protein expression of HO-1 after treated for 24 h. Western blotting method （treated for 0.5， 1， 1.5 h） and immunofluorescence staining （treated for 1 h） were used to detect the effects of 100 ?g/mL L. cuneata dichloromethane extract on protein expression of Nrf2 inside and outside the nucleus. After HO-1 gene was silenced by small interfering RNA （Si RNA） transfection technology， the effects of 100 ?g/mL L. cuneata dichloromethane extract on the survival rates of glutamate-induced injury cells and the level of ROS were detected. RESULTS： Compared with blank control， 50， 100 ?g/mL L. cuneata dichloromethane extract could significantly improve the survival rate of glutamate-induced injury cells （P<0.05）， while reduced the level of ROS （P<0.05）. 25， 50， 100 ?g/mL L. cuneata dichloromethane extract could increase the protein expression of HO-1 in cells （P<0.05）， while 100 ?g/mL L. cuneata dichloromethane extract could significantly decrease the protein level of Nrf2 in cytoplasm and increase that in nucleus （P<0.05）. After HO-1 gene silencing， the effects of L. cuneata dichloromethane extract on the proliferation promotion of glutamate-induced injury cells and the reduction of ROS level were reversed （P<0.05）. CONCLUSIONS： L. cuneata dichloromethane extract can protect HT22 cells against injury induced by glutamate through activating Nrf2 pathway， inducing HO-1 expression.

KEYWORDS? ?Lespedeza cuneata; Glutamate; HO-1; Nrf2; Mice; Hippocampal cells HT22; Mechanism

大腦中的海馬神經元損傷是各種神經退行性疾病的重要病理環節[1-2]。谷氨酸作為哺乳動物中樞神經系統中最重要的興奮性神經遞質，不僅參與了快速的興奮性突觸傳遞，還可以調節神經遞質的釋放、突觸的可塑性，參與中樞神經系統正常的生理功能[3]。然而，細胞間隙中谷氨酸濃度過高時會對神經元產生氧化應激與毒性，導致神經元的退化、衰老及死亡，谷氨酸引起的神經毒性是導致神經退行性疾病中神經細胞死亡的重要機制之一[4]。夜關門為豆科胡枝子屬植物夜關門（Lespedeza cuneata G. Don）的全草，廣泛分布于我國大部分地區[5]，具有清熱解毒、利濕消積等功效[6-7]。現代藥理學研究表明，夜關門具有抗菌、抗炎及抗氧化等多種生物活性[8-9]。此外，有研究發現，夜關門可以通過降低腦組織中一氧化氮（NO）及活性氧（ROS）水平有效地抑制小鼠實驗性失眠[10]，而NO與ROS水平異常則是腦神經毒性的重要指標。因此，本課題組利用谷氨酸誘導小鼠海馬細胞HT22損傷模型，探究夜關門提取物對腦神經保護的藥效作用及相關機制，為該藥用植物的進一步開發利用提供實驗依據。

1 材料

1.1 儀器

AS110 R2型分析天平（波蘭Radwag公司）;ELx800型多功能酶標儀（美國Bio-Tek公司）;HS-1302型超凈工作臺（上海博訊醫療生物儀器股份有限公司）;GL-802型微型臺式真空泵（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）;CCL-170B-8型CO2恒溫培養箱（新加坡藝思高生物科技有限公司）;XSP-17CV型倒置生物顯微鏡（上海巴拓儀器有限公司）;XB-K-25型細胞計數板（深圳市達科為生物技術有限公司）; Mini P-4型小型垂直電泳系統（北京凱元信瑞儀器有限公司）;Tanon-4600型化學發光成像儀（上海天能科技有限公司）;CX31-12C04型雙目生物熒光顯微鏡（日本Olympus公司）;TDZ5-WS型冷凍離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司）。

1.2 藥品與試劑

夜關門藥材于2018年8月采自山東青島，經青島科技大學化工學院黃山教授鑒定為豆科胡枝子屬植物夜關門（L. cuneata G. Don）的全草;水溶性維生素E對照品、谷氨酸對照品（美國Sigma公司，批號：1001270674、100023-198601，純度：97%、98%）;二甲亞砜（DMSO，美國Amresco公司）;DMEM高糖培養基、胎牛血清（FBS）、0.25%胰蛋白酶、青霉素/鏈霉素雙抗（美國Gibco-BRL公司，批號：2081862、11041-8611、90326-1、91018-1）;Griess染色試劑盒（美國Promega公司，批號：20190605）;Bradford蛋白濃度測定試劑盒、RIPA裂解液（北京索萊寶生物科技有限公司，批號：20190708、20290305）;血紅素加氧酶1（HO-1）小鼠單克隆抗體、核因子2（Nrf2）小鼠單克隆抗體、β-肌動蛋白（β-actin）小鼠單克隆抗體、核纖層蛋白B（Lamin-B）小鼠單克隆抗體、辣根過氧化物酶（HRP）標記的兔抗小鼠免疫球蛋白G（IgG）二抗、小干擾RNA 對照品（si-RNA control）、HO-1小干擾RNA （si-RNA HO-1）、鈷-原卟啉（CoPP）（美國Santa Cruz公司）;2′，7′-二氯熒光黃雙乙酸鹽探針（DCFH-DA）、異硫氰酸熒光素（FITC）標記的IgG二抗、4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染液（英國Abcam公司，批號：ab113851、ab188285、ab228549）;LipofectamineTM2000轉染試劑（美國Invitrogen公司，批號：1306267）;MTT試劑盒、ROS檢測試劑盒、二喹啉甲酸（BCA）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：804W0515、100-500T、20180317）;其余試劑均為分析純，水為超純水。

1.3 細胞

小鼠海馬細胞HT22細胞株由韓國圓光大學金英哲教授贈送。

2 方法

2.1 夜關門不同溶劑提取物的制備

取夜關門藥材，打成粗粉，稱取粗粉3份，各500 g，以70%乙醇為溶劑、料液比（g/mL）為1 ∶ 30，在80 ℃條件下回流提取，然后分別以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯對提取液進行萃取，每種溶劑均萃取3次，每次溶劑用量均為12、8、6倍（L/kg），每次均萃取2 h;濾過，合并濾液，用旋轉蒸發儀在水浴條件下減壓濃縮，然后于55 ℃水浴中揮干溶劑，分別得到石油醚提取物（得率為2.78%）、二氯甲烷提取物（得率為3.23%）和乙酸乙酯提取物（得率為3.12%）。

2.2 細胞的培養

將細胞接種于含10%FBS和1%青霉素/鏈霉素雙抗的DMEM高糖培養基中，在37 ℃、5%CO2的培養箱中培養，取對數生長期細胞用于試驗。

2.3 夜關門不同溶劑提取物的細胞毒性考察

將細胞用含10%FBS和1%青霉素/鏈霉素雙抗的DMEM高糖培養基（下同）重懸至密度為8×104個/mL，接種到96孔板中，每孔100 μL，將細胞置于37 ℃、5%CO2的培養箱中培養24 h。然后將細胞分為空白組和夜關門的乙酸乙酯、二氯甲烷、石油醚提取物組（質量濃度均為25、50、100、200 μg/mL，均以浸膏量計，下同），每組設置3個復孔。各給藥組細胞先加入含相應藥液的培養基預培養12 h，空白組細胞加入空白培養基，然后加入50 μL MTT試劑（終質量濃度為0.5 mg/mL），繼續培養4 h;吸棄上清液，加入150 μL DMSO溶液，輕微振搖1 min至DMSO將甲臜結晶完全溶解后，采用酶標儀在490 nm波長處測定各孔的光密度（OD），并計算細胞存活率[細胞存活率（%）=OD試驗組/OD空白組×100%]。

2.4 夜關門不同溶劑提取物對谷氨酸誘導細胞損傷的影響

按“2.3”項下方法接種、培養細胞后，將細胞分為空白組、模型組、陽性對照組（水溶性維生素E，50 μmoL/L）和夜關門的乙酸乙酯、二氯甲烷、石油醚提取物組（質量濃度均為25、50、100 μg/mL），每組設置3個復孔。各給藥組細胞先加入含相應藥液的培養基預培養12 h，空白組、模型組細胞加入空白培養基，然后除空白組外，其余各組細胞均加入谷氨酸（終濃度為5 mmol/L）誘導損傷24 h，再按“2.3”項下MTT法測定細胞存活率。

2.5 夜關門二氯甲烷提取物對谷氨酸誘導損傷細胞中ROS水平的影響

采用DCFH-DA法檢測細胞中ROS水平。將細胞用培養基重懸至密度為2.5×104 個/mL，接種到24孔板中，每孔1 mL，將細胞置于37 ℃、5%CO2的培養箱中培養24 h。然后將細胞分為空白組、模型組、陽性對照組（水溶性維生素E，50 μmoL/L）和夜關門二氯甲烷提取物不同質量濃度組（25、50、100 μg/mL），每組設置3個復孔。空白組細胞不作處理;模型組細胞在培養12 h后，加入5 mmol/L谷氨酸誘導損傷12 h;各給藥組細胞分別添加相應藥液預處理12 h后，再加入5 mmol/L谷氨酸誘導損傷12 h。吸棄培養液，用無血清和抗體的培養基洗細胞3遍;用10 μmoL/L 的DCFH-DA避光孵育30 min，再用無血清和抗體的培養基洗3遍;加入1%Triton X-100 在37 ℃下孵育10 min，然后分別在激發波長488 nm和發射波長525 nm下用熒光分光光度計測定各孔的熒光強度，計算細胞中ROS水平（ROS水平=試驗組熒光強度/空白組熒光強度）。

2.6 夜關門二氯甲烷提取物對細胞中HO-1蛋白表達的影響

采用Western blotting法檢測細胞中HO-1蛋白表達水平。將細胞用培養基重懸至密度為1×105 個/mL，接種到6孔板中，每孔1 mL。將細胞置于37 ℃、5%CO2的培養箱中培養24 h。然后將細胞分為空白組、CoPP組（HO-1激動劑，20 μmmol/L）和夜關門二氯甲烷提取物不同質量濃度組（25、 50、100 μg/mL），每組設置3個復孔。空白組細胞不作處理，各給藥組細胞分別加入相應藥液處理24 h。吸棄培養液，加1 mL冰PBS重懸細胞，將細胞懸液轉移至1.5 mL離心管中，以300 r/min離心3 min，吸棄培養液;加入50 μL含蛋白酶和磷酸化蛋白酶抑制劑的RIPA細胞裂解液，于冰上裂解10 min，然后在4 ℃下以15 000 r/min離心20 min，取上清液，置于-80 ℃冰柜中保存，備用。按BCA法測定總蛋白含量。取30 μg總蛋白進行10%～12%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），條件為電壓120 V、電流300 mA、時間90 min;電轉至硝酸纖維素膜上，用TBST緩沖液洗膜3次，室溫下用封閉劑（5%的脫脂奶粉）孵育2 h;再用TBST洗3次，加入HO-1、β-actin一抗（1 ∶? ? ? ? 1 000），在室溫下以封閉劑孵育1.5 h;TBST洗膜3次，加入HRP標記的二抗（1 ∶ 5 000），在室溫下以封閉劑孵育1 h;TBST洗膜3次，以ECL試劑進行顯色，利用化學發光成像儀進行分析。通過Gel-Pro Analyzer 4.0軟件對蛋白條帶灰度進行定量分析，以目標條帶灰度值與內參β-actin條帶灰度值之比表示目標蛋白的表達水平。

2.7 夜關門二氯甲烷提取物對細胞中Nrf2蛋白表達的影響

2.7.1 Western blotting法檢測 按“2.5”項下方法對細胞進行接種和培養后，將細胞分為空白組和夜關門二氯甲烷提取物組，每組設置3個復孔。空白組細胞不作處理，夜關門二氯甲烷提取物組細胞分別用100 μg/mL夜關門二氯甲烷提取物處理不同時間（0.5、1、1.5 h）后，吸棄上清液，加1 mL冰磷酸鹽緩沖液（PBS），重懸細胞至1.5 mL離心管中，以300 r/min離心3 min;吸棄培養液，加入20 μL 含蛋白酶和磷酸化蛋白酶抑制劑的細胞質裂解液，于冰上裂解10 min，然后在4 ℃下以15 000 r/min離心20 min，取上清液，即為細胞質蛋白溶液;沉淀加入細胞核裂解液，與細胞質裂解步驟相同，取上清液，即為細胞核蛋白溶液。采用BCA法測定蛋白含量，然后取蛋白按“2.5”項下方法進行電泳試驗并分析結果（細胞核中 Nrf2蛋白表達水平測定的內參為Lamin B，細胞質中Nrf2蛋白表達水平測定的內參為β-actin）。

2.7.2 免疫熒光法檢測 將細胞用培養基重懸至密度為1×105 個/mL，在6孔板中預先加入12 mm細胞爬片，然后將細胞接種到6孔板中，每孔1 mL。將細胞置于37 ℃、5%CO2的培養箱中培養24 h。然后將細胞分為空白組和夜關門二氯甲烷提取物組，空白組細胞不作處理，夜關門二氯甲烷提取物組細胞用100 μg/mL夜關門二氯甲烷提取物處理1.5 h后，吸棄培養液，用PBS洗3次;用4%多聚甲醛在室溫固定20 min，用0.1% Triton X100 孵育10 min，然后用含1%FBS的脫脂奶粉封閉30 min;加入Nrf2一抗（1 ∶ 200），孵育過夜，用PBS沖洗;再加入FITC標記的二抗（1 ∶ 2 000），避光孵育1 h，PBS洗3次;加入DAPI（0.5 mg/mL） 孵育5 min，PBS洗3次。將細胞爬片取出，封片，在熒光顯微鏡下觀察并拍照。綠色熒光為Nrf2陽性染色，藍色熒光為細胞核染色。

2.8 HO-1基因沉默后夜關門二氯甲烷提取物對谷氨酸誘導細胞損傷的影響

將細胞用培養基重懸至密度為2.5×104個/mL，接種到24孔板中，每孔1 mL。將細胞置于37 ℃、5%CO2的培養箱中培養24 h后，將其分為空白組、模型組、夜關門二氯甲烷提取物組、夜關門二氯甲烷提取物+siRNA HO-1組，每組設置3個復孔。分別將siRNA HO-1與其對照siRNA control樣品用無血清和抗體的培養基稀釋至濃度為40 nmol/L。之后取LipofectamineTM 2000稀釋液1 μL于50 μL培養基中，室溫孵育5 min后與上述稀釋后的siRNA溶液混合，室溫靜置20 min，得到轉染液。將轉染液加入各細胞孔中，每孔100 μL。其中，空白組、模型組與夜關門二氯甲烷提取物組加入siRNA control轉染液，夜關門二氯甲烷提取物+siRNA HO-1組加入siRNA HO-1轉染液。然后，夜關門二氯甲烷提取物組及夜關門二氯甲烷提取物+siRNA HO-1組分別加入夜關門二氯甲烷提取物（100 μg/mL）處理細胞24 h，空白組不作處理。之后分別按“2.3”～“2.5”項下方法進行細胞存活率及細胞中ROS水平和HO-1蛋白表達的檢測，以判斷夜關門二氯甲烷提取物是否通過促進HO-1蛋白的表達進而發揮藥效。

2.9 統計學方法

采用SPSS 19.0軟件對數據進行統計分析，采用GraphPad Prism 5.0軟件繪制柱形圖。數據以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗。P<0.05表示差異有統計學意義。

3 結果

3.1 夜關門不同溶劑提取物的細胞毒性測定結果

當夜關門各溶劑提取物的質量濃度在25～100? ? ? ? μg/mL范圍時，對細胞活性均無明顯影響;當提取物質量濃度達到200 μg/mL時，均可顯著降低細胞的存活率（P<0.05）。這表明在25～100 μg/mL范圍內，各溶劑提取物對細胞的毒性較小，故以此質量濃度范圍進行后續試驗。夜關門不同溶劑提取物對細胞的毒性考察結果見圖1。

3.2 夜關門不同溶劑提取物對谷氨酸誘導細胞損傷的影響

與空白組比較，模型組細胞的存活率顯著降低（P<0.05）。與模型組比較，陽性對照組和50、100 μg/mL夜關門二氯甲烷提取物組細胞的存活率顯著降低（P<0.05），而其余提取物組細胞存活率差異無統計學意義（P>0.05），可見夜關門二氯甲烷提取物對谷氨酸誘導的細胞損傷具有一定的保護作用，故后續試驗以夜關門二氯甲烷提取物為研究對象。夜關門不同溶劑提取物對谷氨酸誘導細胞損傷的影響考察結果見圖2。

3.3 夜關門二氯甲烷提取物對谷氨酸誘導損傷細胞中ROS水平的影響

與空白組比較，模型組細胞中ROS水平顯著升高（P<0.05）。與模型組比較，陽性對照組和50、100 μg/mL夜關門二氯甲烷提取物組細胞中ROS水平顯著降低（P<0.05），且夜關門二氯甲烷提取物的作用具有一定的濃度依賴性趨勢。各組細胞中ROS水平測定結果見表1。

3.4 夜關門二氯甲烷提取物對細胞中HO-1蛋白表達的影響

與空白組比較，CoPP組和25、50、100 μg/mL夜關門二氯甲烷提取物組細胞中HO-1蛋白表達水平均顯著升高（P<0.05），且夜關門二氯甲烷提取物的作用具有一定的濃度依賴趨勢。各組細胞中HO-1蛋白表達的電泳圖見圖3，蛋白表達水平測定結果見表2。

3.5 夜關門二氯甲烷提取物對細胞中Nrf2蛋白表達的影響

與空白組比較，夜關門二氯甲烷提取物不同處理時間組細胞質中Nrf2蛋白表達水平均顯著降低（P<0.05），而細胞核中Nrf2蛋白表達水平顯著升高（P<0.05）。各組細胞中Nrf2蛋白表達的電泳圖見圖4，蛋白水平測定結果見表3;免疫熒光染色顯微圖見圖5。

3.6 HO-1基因沉默后夜關門二氯甲烷提取物對谷氨酸誘導細胞損傷的影響

進行si-RNA HO-1轉染后，細胞中HO-1蛋白表達水平顯著降低（P<0.05），表明si-RNA HO-1轉染對HO-1基因發揮了沉默作用。夜關門二氯甲烷提取物可升高谷氨酸誘導損傷細胞的存活率及細胞中ROS水平（P<0.05），而HO-1基因沉默后逆轉了夜關門二氯甲烷提取物對谷氨酸誘導損傷細胞的促進增殖以及降低ROS水平的作用（P<0.05）。HO-1基因沉默后各組細胞中HO-1蛋白表達的電泳圖見圖6，蛋白表達水平測定結果見表4;細胞存活率和細胞中ROS水平測定結果見表5。

4 討論

谷氨酸引起的神經細胞氧化應激和興奮性毒性與各類神經退行性疾病的發生、發展有著密切聯系。研究發現，高濃度谷氨酸能引起海馬組織中谷氨酸轉運體及谷氨酸重攝取的功能下降[11]。本研究采用5 mmoL/L谷氨酸誘導小鼠海馬細胞HT22發生氧化應激，從而引起細胞損傷及細胞內ROS的產生。用不同溶劑夜關門提取物對細胞進行預處理后，發現夜關門二氯甲烷提取物可以顯著抑制由谷氨酸誘導的細胞損傷和ROS的過量生成，這說明夜關門二氯甲烷提取物具有顯著的神經保護活性。

HO-1是一種廣泛存在的抗氧化防御酶，是熱休克蛋白家族中的一個成員，可代謝血紅素生成一氧化碳（CO）、膽紅素和游離鐵。相關研究表明，HO-1及其代謝產物具有神經保護作用[12]。Nrf2是體內調控HO-1表達的重要上游蛋白，在正常狀態下，Nrf2與Nrf2的細胞質抑制劑Keap1結合;在受到外界刺激時，Nrf2從復合體中解離出來后，從細胞質轉移到細胞核，與HO-1啟動子ARE結合，激活HO-1基因表達，從而發揮細胞保護作用[13-15]。本研究發現，夜關門二氯甲烷提取物及CoPP可以誘導細胞中HO-1的表達，同時也可以使細胞中Nrf2活化并從細胞質轉移至胞核;而利用si-RNA轉染技術進行HO-1基因沉默后，可以逆轉夜關門二氯甲烷提取物的上述作用。

綜上所述，夜關門二氯甲烷提取物可通過激活谷氨酸誘導小鼠海馬細胞的Nrf2信號通路，來誘導細胞中HO-1蛋白的表達，從而發揮其對細胞的保護作用。但本研究結論仍需動物藥理學實驗等相關研究進一步證實。

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（收稿日期：2019-12-26 修回日期：2020-04-21）

（編輯：林 靜）