苦參堿對乙醛活化的肝星狀細胞CFSC-8B增殖和膠原合成的影響及機制研究

中圖分類號 R962 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2020）11-1353-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.11.12

摘 要 目的：研究苦參堿對乙醛活化的大鼠肝星狀細胞CFSC-8B增殖和膠原合成的影響，并探討其可能的作用機制。方法：取體外培養的CFSC-8B細胞，分為空白對照組、模型組、陽性對照組（2.5 μmol/L秋水仙堿）和苦參堿低、中、高濃度組（30、60、120? ? ? μmol/L）。除空白對照組外，其余各組細胞均加入200 μmol/L乙醛溶液誘導活化，并同時加入相應藥液（空白對照組和模型組加入等體積空白培養液），共同作用24 h后，采用CCK-8法檢測各組細胞的存活率。另取細胞分為空白對照組、模型組、陽性對照組（2.5 μmol/L秋水仙堿）和苦參堿中、高濃度組（60、120 μmol/L），同法活化和加藥處理。分別采用酶消化法檢測細胞培養液中羥脯氨酸（Hyp）含量;采用酶聯免疫吸附法檢測細胞培養液中Ⅰ型膠原蛋白（Col-Ⅰ）和Ⅲ型膠原蛋白（Col-Ⅲ）含量;采用實時熒光定量-聚合酶鏈式反應法檢測細胞中α-平滑肌激動蛋白（α-SMA）、轉化生長因子β1（TGF-β1）、TGF-β1Ⅰ型受體（TβR-Ⅰ）、TGF-β1Ⅱ型受體（TβR-Ⅱ）、Smad3、Smad4和Smad7 mRNA表達水平;采用 Western blotting法檢測細胞中α-SMA、TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad3、Smad4和Smad7蛋白表達水平。結果：與空白對照組比較，模型組細胞存活率顯著升高（P<0.05）;細胞培養液中Hyp、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ含量和細胞中α-SMA、TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad3和Smad4 mRNA及其蛋白表達水平均顯著升高（P<0.05），細胞中Smad7 mRNA及其蛋白表達水平均顯著降低（P<0.05）。與模型組比較，陽性對照組和苦參堿中、高濃度組細胞存活率和細胞培養液中Hyp、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ含量以及細胞中α-SMA、Smad4 mRNA及其蛋白表達水平均顯著降低（P<0.05），細胞中Smad7 mRNA及其蛋白表達水平均顯著升高（P<0.05）;陽性對照組和苦參堿高濃度組細胞中TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad3 mRNA及其蛋白表達水平均顯著降低（P<0.05）。與苦參堿中濃度組比較，苦參堿高濃度組細胞各指標水平改善程度均更顯著（P<0.05）。結論：苦參堿能抑制乙醛活化的CFSC-8B細胞的增殖和膠原合成，且具有一定的濃度依賴性;其機制可能與調控TGF-β1/Smad信號通路的傳導有關。

關鍵詞 苦參堿;肝星狀細胞;增殖;膠原合成;轉化生長因子β1/Smad通路;機制

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To study the effects of matrine on proliferation and collagen synthesis of rat hepatic stellate cells CFSC-8B activated by acetaldehyde， and to investigate its possible mechanism. METHODS： CFSC-8B cells cultured in vitro were divided into blank control group， model group， positive control group （2.5 μmol/L colchicine） and matrine low， medium and high concentration groups （30， 60， 120 μmol/L）. Except for blank control group， other groups were activated with 200 μmol/L acetaldehyde for 24 h; medicine groups were intervened with relevant medicine for 24 h （blank control group and model group were intervened with equal volume blank medium）. Survival rate of cell was detected by CCK-8 assay.? Cells were divided into blank control group， model group， positive control group （2.5 μmol/L colchicine）， matrine medium and high concentration groups （60， 120 μmol/L）， then activated and treated with same method. Hydroxyprolin （Hyp） content in cell culture solution was tested by enzyme digestion. The contents of Col-Ⅰ and Col-Ⅲ in cell culture solution were determined by ELISA. mRNA expressionss of α-SMA，TGF-β1，TβR-?， TβR-Ⅱ， Smad3， Smad4 and Smad7 in cells were detected by RT-PCR. The protein expressions of α-SMA， TGF-β1， TβR-Ⅰ， TβR- Ⅱ， Smad3， Smad4 and Samd7 in cells were detected by Western blotting. RESULTS： Compared with blank control group， survival rate of cells in model group was increased significantly （P<0.05）; the contents of Hyp， Col-Ⅰ and Col-Ⅲ in cell culture solution， mRNA and its protein expressions of α-SMA， TGF-β1， TβR-Ⅰ， TβR-Ⅱ， Smad3， Smad4 in cells were increased significantly in model group （P<0.05）， while the mRNA and protein expression of Smad7 was decreased significantly （P<0.05）. Compared with model group， survival rate of cells， the contents of Hyp， Col-Ⅰ and Col-Ⅲ in cell culture solution， the mRNA and protein expressions of α-SMA and Smad4 were decreased significantly in positive control group and matrine medium and high concentration groups（P<0.05）， while the mRNA and protein expression of Smad7 was increased significantly （P<0.05）; the mRNA and protein expressions of TGF-β1， TβR-Ⅰ， TβR-Ⅱ and Smad3 were decreased significantly in positive control group and matrine high concentration group （P<0.05）. Compared with matrine medium concentration group， all above indexes were improved significantly in matrine high concentration group （P<0.05）. CONCLUSIONS： Matrine can suppress the proliferation and collagen synthesis of CFSC-8B cells activated by acetaldehyde， with a centain concentrlation dependence， the mechanism of which may be associated with regulating the conduction of TGFβ/Smad signal pathway.

KEYWORDS? ?Matrine; Hepatic stellate cells; Proliferation; Collagen synthesis; TGF-β1/Smad pathway; Mechanism

肝纖維化是肝硬化的必經階段，也是肝細胞癌的前兆[1]。在遺傳性或非遺傳性損傷因素的慢性刺激下，肝臟內處于靜止期的肝星狀細胞被激活，轉化成為肌成纖維樣細胞后，分泌多種促炎因子/促纖維因子，合成α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA），并產生大量以Ⅰ型膠原蛋白（Col-Ⅰ）、Ⅲ型膠原蛋白（Col-Ⅲ）為主的肝內細胞外基質（ECM）成分，ECM在肝臟內過度沉積，繼而造成肝纖維化[2]。引起肝纖維化的因素包括肝炎病毒、血吸蟲病、酒精、藥物、膽汁淤積及自身代謝疾病等[3]。研究顯示，由酒精性肝損傷造成的肝纖維化的發生率逐年升高[4]。因此，尋找有效防治酒精性肝纖維化的藥物，以防止其發展成肝硬化甚至肝癌，具有重要的臨床意義。

中藥苦參為豆科植物苦參（Sophora flavescens Ait.）的干燥根，具有抗菌、抗病毒、抗炎、免疫調節、抗腫瘤、保肝等多種藥理作用[5-6]。苦參堿是苦參中的有效成分之一，在臨床上已被應用于病毒性肝炎的治療[7-8]，但其對酒精性肝損傷造成的肝纖維化是否存在逆轉作用尚未見報道。轉化生長因子β1（TGF-β1）/Smad信號通路在肝膠原合成與肝纖維化發展過程中起著關鍵性的作用[9]。因此，本研究以乙醛活化的大鼠肝星狀細胞CFSC-8B為模型，探討苦參堿對活化后肝星狀細胞增殖和膠原合成的影響，并從TGF-β1/Smad信號通路著手探究其可能的作用機制，為苦參堿的進一步臨床應用提供實驗依據。

1 材料

1.1 儀器

CKX41型倒置顯微鏡（日本Olympus公司）;3111型二氧化碳培養箱（美國Thermo Fisher Scientific公司）;UV-2550型紫外分光光度計（日本Shimadzu公司）;XPE504型分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）;ELX800型全自動酶標儀（美國Bio-Tek公司）;Countess C10227型細胞計數器（美國Invitrogen公司）;5417R型離心機（德國Eppendorf公司）;Stratagene Mx3005P 型實時熒光定量-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）儀（美國Agilent公司）;SmartChemi Ⅱ型一體式化學發光成像儀（北京賽智創業科技有限公司）;HL-2000型分子雜交箱（美國UVP公司）;JY-ZY2型轉移電泳槽、JY-CZ1型單垂直電泳槽（北京君意東方電泳設備有限公司）。

1.2 藥品與試劑

苦參堿對照品 （中國食品藥品檢定研究院，批號：140905，純度：≥98%）;秋水仙堿片（西雙版納藥業有限責任公司，批號：H53021369，規格：0.5 mg）;CCK-8細胞活力檢測試劑盒、肝組織羥脯氨酸（Hyp）檢測試劑盒以及Col-Ⅰ、Col-Ⅲ酶聯免疫吸附（ELISA）檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：20190401、20181205、20181210、20181210）;細胞核蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒（北京碧云天生物技術公司，批號：P0028-1）;RNA抽提試劑盒（美國Ambion公司，批號：47323）;超敏發光（ECL）檢測試劑盒[賽默飛世爾科技（中國）有限公司，批號：RG239143];兔抗鼠α-SMA多克隆抗體、兔抗鼠TGF-β1Ⅰ型受體（TβR-Ⅰ）多克隆抗體、兔抗鼠TGF-β1多克隆抗體、兔抗鼠Smad4多克隆抗體、兔抗鼠磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）多克隆抗體（美國CST公司）;兔抗鼠TGF-β1Ⅱ型受體（TβR-Ⅱ）多克隆抗體、兔抗鼠Smad7多克隆抗體（美國Santa Cruz公司）;兔抗鼠Smad3多克隆抗體（美國Sigma公司）;生物素標記的山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）二抗（北京康為世紀生物科技有限公司）;α-SMA、TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad3、Smad4、Smad7引物均由上海生工生物工程有限公司合成;其余試劑均為分析純，水為超純水。

1.3 細胞

大鼠肝星狀細胞CFSC-8B購于賽百慷（上海）生物技術股份有限公司。

2 方法

2.1 細胞培養

將細胞接種于含10%小牛血清的DMEM培養基中，置于37 ℃、5% CO2的培養箱（下同）中培養24 h后，更換為不含血清的DMEM培養基繼續培養24 h。取生長狀態良好并處于對數生長期的細胞，加胰酶消化后，以1 000 r/min離心3 min，收集細胞并制成密度為1×105 個/mL的細胞懸液。

2.2 苦參堿對細胞增殖的影響考察

采用CCK-8法檢測。取細胞懸液，按1×104 個/孔的密度接種于96孔板中。將細胞分為空白對照組、模型組、陽性對照組（2.5 μmol/L秋水仙堿，根據預試驗結果設置濃度）和苦參堿低、中、高濃度組（30、60、120 μmol/L，根據預試驗結果設置濃度），每組設置3個復孔。將以上18個孔記為試驗孔，并另設對照孔和空白孔。培養24 h后，除空白對照組外，其余各組細胞均加入200 μmol/L乙醛溶液誘導細胞活化[10];同時，各給藥組細胞加入相應濃度的藥液，空白對照組和模型組細胞加入等體積空白培養液。繼續培養24 h后，更換培養基，加入CCK-8試劑（10 μL/孔），繼續培養2 h。采用酶標儀于450 nm波長下測定各孔吸光度（A），根據公式計算細胞增殖率：細胞增殖率（%）=（A試驗-A空白）/（A對照-A空白）×100%。式中，A試驗為試驗孔吸光度值，A對照為對照孔吸光度值（不含藥物），A空白為空白孔吸光度值（不含細胞和藥物）。試驗重復10次。

2.3 苦參堿對細胞培養液中Hyp含量的影響考察

采用酶消化法檢測。取細胞懸液，按1×104 個/孔的密度接種于96孔板中。將細胞分為空白對照組、模型組、陽性對照組（2.5 μmol/L秋水仙堿）和苦參堿中、高濃度組（60、120 μmol/L），每組設置3個復孔。按“2.2”項下方法進行細胞活化、給藥和培養后，吸取上清液，以3 000 r/min離心10 min，取上清，按照Hyp試劑盒說明書操作，檢測細胞培養液中Hyp的含量。試驗重復10次。

2.4 苦參堿對細胞培養液中Col-Ⅰ、Col-Ⅲ含量的影響考察

采用ELISA法檢測。按“2.3”項下方法分組，每組設置3個復孔，按“2.2”項下方法進行細胞活化、給藥和培養后，吸取上清液，以3 000 r/min離心10 min，取上清，按照Col-Ⅰ和COL-Ⅲ ELISA檢測試劑盒說明書操作，檢測細胞培養液中Col-Ⅰ和Col-Ⅲ的含量。試驗重復6次。

2.5 苦參堿對細胞中α-SMA、TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad3、Smad4和Smad7 mRNA表達的影響考察

采用RT-PCR法檢測。按“2.3”項下方法分組，每組設置3個復孔，按“2.2”項下方法進行細胞活化、給藥和培養后，吸棄培養基，收集細胞，按RNA提取試劑盒說明書操作，提取細胞中總RNA。驗證提取RNA的純度和濃度后，取1 μg總RNA進行反轉錄合成cDNA，并以cDNA為模板進行PCR擴增。反應體系：cDNA模板2? ?μL，dNTP溶液1.6 μL，BeyoTaq Buffer 2 μL，BeyoTaq DNA Polymerase 0.1 μL，上、下游引物各0.8 μL，雙蒸水12.7 μL，總體積為20 μL。反應條件：95 ℃預變性4 min;95 ℃變性20 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共40個循環。以GAPDH為內參，采用2-ΔΔCt法計算細胞中α-SMA、TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad3、Smad4 mRNA的表達水平（ct表示每個反應管內熒光信號強度達到設定閾值時所經歷的循環數）。試驗重復6次。引物序列及擴增產物片段長度見表1。

2.6 苦參堿對細胞中α-SMA、TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad3和Smad4蛋白表達的影響考察

采用Western blotting法檢測。按“2.3”項下方法分組，每組設置3個復孔，按“2.2”項下方法進行細胞活化、給藥和培養后，吸棄培養基，參照文獻[11]的方法，收集細胞，按照細胞核蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒說明書操作步驟，分別提取細胞漿蛋白和細胞核蛋白，將兩者合并，以二喹啉甲酸（BCA）法測定總蛋白含量。將合并的總蛋白經十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離、濕轉法轉膜、5%脫脂奶粉室溫封閉2 h后，按1 ∶ 1 000的稀釋度加入TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad4、Smad7和GAPGH一抗，于37 ℃條件下孵育4 h;TBST 緩沖液洗膜3次，按1 ∶ 1 000的稀釋度加入IgG二抗，于37 ℃條件下繼續孵育2 h。采用ECL檢測試劑顯影，以一體式微型化學發光成像儀掃描、分析各蛋白質條帶的灰度值，以目標蛋白條帶與內參GAPGH條帶的灰度值的比值表示目標蛋白的表達水平。試驗重復6次。

2.7 統計學方法

采用SPSS 13.0統計軟件進行數據分析。計量資料以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK檢驗。P<0.05表示差異有統計學意義。

3 結果

3.1 細胞存活率測定結果

與空白對照組比較，模型組細胞的存活率顯著升高（P<0.05）;與模型組比較，陽性對照組和苦參堿中、高濃度組細胞存活率顯著降低（P<0.05），且苦參堿的作用具有量效關系（P<0.05）。這提示中、高濃度苦參堿可以有效抑制活化細胞的異常增殖，故后續試驗選擇這2個濃度進行研究。各組細胞存活率測定結果見圖1。

3.2 細胞培養液中Hyp、Col-Ⅰ和Col-Ⅲ的含量測定結果

與空白對照組比較，模型組細胞培養液中Hyp、Col-Ⅰ和Col-Ⅲ的含量顯著升高（P<0.05）;與模型組比較，陽性對照組和苦參堿中、高濃度組細胞培養液中Hyp、Col-Ⅰ和Col-Ⅲ的含量均顯著降低（P<0.05）;與苦參堿中濃度組比較，苦參堿高濃度組細胞培養液中Hyp、Col-Ⅰ和Col-Ⅲ的含量均顯著降低（P<0.05）。各組細胞中培養液中Hyp、Col-Ⅰ和Col-Ⅲ的含量測定結果見表2。

3.3 細胞中TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、α-SMA、Smad3、Smad4和Smad7的mRNA表達水平測定結果

與空白對照組比較，模型組細胞中α-SMA、TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad3、Smad4 mRNA表達水平均顯著升高（P<0.05），Smad7 mRNA表達水平顯著降低（P<0.05）;與模型組比較，陽性對照藥組和苦參堿高濃度組細胞中α-SMA、TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad3、Smad4 mRNA表達水平以及苦參堿中濃度組細胞中α-SMA、Smad4 mRNA表達水平均顯著降低（P<0.05），各給藥組細胞中Smad7 mRNA表達水平均顯著升高（P<0.05）;與苦參堿中濃度組比較，苦參堿高濃度組細胞中α-SMA、TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad3、Smad4 mRNA表達水平均顯著降低（P<0.05），Smad7 mRNA表達水平顯著升高（P<0.05）。各組細胞中α-SMA、TGF-β1、? ? TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad3、Smad4、Smad7 mRNA表達水平測定結果見表3。

3.4 細胞中α-SMA、TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad3、Smad4 和Smad7的蛋白表達水平測定結果

與空白對照組比較，模型組細胞中α-SMA 、TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad3、Smad4蛋白表達水平均顯著升高（P<0.05），Smad7蛋白表達水平顯著降低（P<0.05）;與模型組比較，陽性對照組和苦參堿高濃度組細胞中α-SMA 、TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad3、Smad4蛋白表達水平以及苦參堿中濃度組細胞中α-SMA 、Smad4的蛋白表達水平均顯著降低（P<0.05），陽性對照藥組和苦參堿中、高濃度組細胞中Smad7蛋白表達水平均顯著升高（P<0.05）。與苦參堿中濃度組比較，苦參堿高濃度組細胞中α-SMA 、TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad3、Smad4蛋白表達水平均顯著降低（P<0.05），Smad7蛋白表達水平顯著升高（P<0.05）。各組細胞中α-SMA 、TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad3、Smad4和Smad7蛋白表達的電泳圖見圖2，蛋白表達水平測定結果見表4。

4 討論

乙醛是酒精在體內氧化、代謝、分解和排出體外過程中的一個中間產物[12]。張志畢等[13]研究發現，人體大量、持續地攝入含酒精的飲品，便會造成乙醛在體內不能及時代謝、分解和排出，從而導致肝內分泌系統功能的紊亂、膠原蛋白的加速生成，進而引發酒精性肝纖維化、肝硬化甚至是肝癌，可見抑制乙醛對肝細胞的影響是預防酒精性肝纖維化發生的一個重要靶點。Moshage H等[14]的研究也進一步證明了這一結論。因此，本研究利用乙醛誘導肝星狀細胞活化，模擬酒精性肝損傷引發的肝纖維化，以觀察苦參堿對細胞損傷的保護作用。肝星狀細胞被激活后會合成α-SMA，產生大量以Col-Ⅰ、Col-Ⅲ為主的ECM成分，而Hyp是膠原組織代謝的重要產物。檢測α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和Hyp的含量變化，對于判斷肝星狀細胞增殖、膠原蛋白合成及肝臟纖維化的程度具有重要意義[15]。本研究結果顯示，乙醛能夠促進肝星狀細胞的增殖，提高細胞中Hyp的含量和上調α-SMA mRNA及其蛋白的表達，加速Col-Ⅰ和Col-Ⅲ的生成，這說明模型組肝星狀細胞被成功活化。與模型組比較，中、高濃度苦參堿能夠抑制活化細胞的增殖，降低細胞中Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、Hyp含量，下調細胞中α-SMA mRNA及其蛋白表達，這說明苦參堿能夠抑制大鼠肝星狀細胞的增殖和膠原合成。

TGF-β1是一種重要的多功能調節蛋白，是TGF-β超家族的重要成員，能夠誘導肝星狀細胞活化和增殖，生成前膠原mRNA，從而促進膠原蛋白的合成和過度蓄積，是目前最強的致纖維化因子之一[16]。TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ是TGF-β1受體的亞型，是同屬于絲氨酸/蘇氨酸激酶受體家族的高親和力結合蛋白，TβR-Ⅱ與TGF-β1結合形成具有磷酸化功能的異聚體復合物，然后通過磷酸化? ? TβR-Ⅰ的GS區，使絲氨酸/蘇氨酸殘基立體構像改變，從而具有激酶活性，特異性識別并激活Smad2/3，活化下游Smad蛋白[17]。Smads蛋白是TGF-β受體的胞內激酶底物[18]，包括通用型Smad4、受體激活型Smad2/3及抑制型Smad7。在TGF-β介導的Smad信號通路中，激活的Smad2/3與受體解離并與細胞質內Smad4結合，傳導至胞核內，與特定DNA序列結合，促進ECM的生成和過度沉積;Smad7可抑制Smad2/3表達，競爭性地與Smad4結合，抑制ECM的生成與蓄積[19]。本研究發現，高濃度苦參堿可顯著下調乙醛活化的肝星狀細胞中TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad3、Smad4 mRNA及其蛋白表達，并上調Smad7 mRNA及其蛋白表達，這提示苦參堿可通過調節TGF-β1/Smad信號通路抑制肝星狀細胞的增殖和膠原合成。

綜上所述，苦參堿對大鼠肝星狀細胞的增殖和膠原合成具有抑制作用，其機制可能與調控TGF-β1/Smad信號通路傳導有關。然而苦參堿抑制肝星狀細胞活化增殖的作用機制復雜，具體機制還需后續進一步深入研究證實。

參考文獻

[ 1 ] LENA S，MICHAEL D，SARA A，et al. Dectin-1 regulates hepatic fibrosis and hepatocarcinogenesis by suppressing TLR4 signaling pathways[J]. Cell Rep，2015，13（9）：1909-1921.

[ 2 ] WONG RJ，LE A，NGUYEN MT，et al. Significant hepatic fibrosis among treatment-naive chronic hepatitis B virus with increased hepatitis B virus DNA and normal alanine aminotransferase[J]. Clin Gastroenterol Hepatol，2018，16（1）：146-148.

[ 3 ] SELIMOVIC D，EL-KHATTOUTI A，GHOZLAN H，? et al. Hepatitis C virus-related hepatocellular carcinoma：an insight into molecular mechanisms and therapeutic strategies[J]. World J Hepatol，2012，4（12）：342-355.

[ 4 ] BRAY F，FERLAY J，SOERJOMATARAM I，et al. Global cancer statistics 2018：GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries[J]. CA-Cancer J Clin，2018，68（6）：394-424.

[ 5 ] DAI MQ，CAI Z，CHEN NN，et al. Matrine suppresses stemness of hepatocellular carcinoma cells by regulating β-catenin signaling pathway[J]. J South Med Univ，2019，39（10）：1239-1245.

[ 6 ] 劉晶晶，牟艷玲.苦參堿抗腫瘤作用機制的研究進展[J].中國藥房，2017，28（19）：2707-2711.

[ 7 ] 張明發，沈雅琴.苦參堿對病毒性肝炎臨床療效評價的研究進展[J].抗感染藥學，2019，16（1）：5-9.

[ 8 ] 李洪，許小莉，鄭婷婷，等.苦參制劑聯合扶正化瘀膠囊對乙型肝炎肝硬化患者肝血流動力學及纖維化指標的影響[J].中國藥房，2017，28（8）：1114-1116.

[ 9 ] WONGNOPPAVICH A，DUKAEW N，CHOONATE S， et al. Upregulation of maspin expression in human cervical carcinoma cells by transforming growth factor β1 through the convergence of Smad and non-Smad signaling pathways[J]. Oncol Lett，2017，13（5）：3646-3652.

[10] 李曉明，于春磊，榮華，等.白屈菜紅堿抑制肝星狀細胞活化和膠原合成[J].齊齊哈爾醫學院學報，2019，40（9）：1057-1059.

[11] 王曉麗，董妙先，徐天嬌，等. β-細辛醚對缺糖缺氧再灌注損傷原代大鼠海馬神經元的保護作用[J].中國病理生理雜志，2014，30（5）：928-932.

[12] GAO B，BATALLER R. Alcoholic liver disease：pathogenesis and new therapeutic targets[J]. Gastroenterology，2011，141（5）：1572-1585.

[13] 張志畢，蔡婷，繆紫娥，等.阿魏酸鈉對乙醛誘導的肝星狀細胞增殖、活化和膠原合成的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2018，24（12）：123-128.

[14] MOSHAGE H，CASINI A，LIEBER CS. Acetaldehyde selectively stimulates collagen production in cultured rat liver fat-storing cells but not in hepatocytes[J]. Hepatology，1990，12（1）：511-518.

[15] PUCHE JE，SAIMAN Y，FRIEDMAN SL. Hepatic stellate cellsand liver fibrosis[J]. Compr Physiol，2013，3（4）：1473-1492.

[16] PARK SJ，CHOI YS，LEE S，et al. BIX02189 inhibits TGF-β1-induced lung cancer cell metastasis by directly targeting TGF-β type Ⅰ receptor[J]. Cancer Lett，2016，381（2）：314-322.

[17] MURATA M，YOSHIDA K，YAMAGUCHI T，et al. Linker phosphorylation of Smad3 promotes fibro-carcinogenesis in chronic viral hepatitis of hepatocellular carcinoma[J]. World J Gastroenterol，2014，20（41）：15018-15027.

[18] LAKSHMI SP，REDDY AT，REDDY RC. Transforming growth factor β suppresses peroxisome proliferator-activated receptor γ expression via both Smad binding and novel TGF-β inhibitory elements[J]. Biochem J，2017，474（9）：1531-1546.

[19] NIGDELIOGLU R，HAMANAKA RB，MELITON AY， et al. Transforming growth factor （TGF）-β promotes de Novo serine synthesis for collagen production[J]. J Biol Chem，2016，291（53）：27239-27251.

（收稿日期：2020-03-09 修回日期：2020-04-14）

（編輯：林 靜）