下肢靜脈曲張MMP－2及TIMP－2水平的表達(dá)及價(jià)值

鄭毅

【摘 要】 目的：分析下肢靜脈曲張基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）及基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物-2（TIMP-2）水平的表達(dá)及價(jià)值。方法：選30名下肢靜脈曲張患者的靜脈組織（觀察組）以及30名正常人下肢靜脈組織（對(duì)照組），用相同方法檢測(cè)并比較MMP-2及TIMP-2表達(dá)水平。結(jié)果：光學(xué)顯微鏡下兩組MMP-2均可以檢測(cè)到，但是觀察組高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;TIMP-2均可表達(dá)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：下肢靜脈曲張患者與MMP-2和TIMP-2的表達(dá)異常有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 基質(zhì)金屬蛋白酶-2;基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物-2;表達(dá)特征和意義

Expression and value of MMP-2 and TIMP-2 in varicose veins of lower extremities

Zheng Yi

Department of Clinical Laboratory， First People's Hospital of Jining City， Jining， Shandong 272000

[Abstract] Objective：To analyze the expression and value of MMP-2 and TIMP-2 in varicose veins of lower extremities. Methods： Thirty patients with varicose veins of the lower extremity （observation group） and 30 normal human lower extremity vein tissues （control group） were used to detect and compare the expression levels of MMP-2 and TIMP-2. Results： Matrix metalloproteinase-2 was detected in both groups under light microscope， but the observation group was higher than the control group， the difference was statisticallysignificant（P<0.05）. Matrix metalloproteinase inhibitor-2 could be expressed， but the difference was not statistically significant （P>0.05）. Conclusion： Patients with lower extremity varices are associated with abnormal expression of matrix metalloproteinase-2 and matrix metalloproteinase inhibitor-2.

[Key words]Matrix metalloproteinase-2; Matrix metalloproteinase inhibitor-2; Expression characteristics and significance

下肢靜脈血液的回流需要靠下肢肌肉的收縮和靜脈瓣膜的引導(dǎo)。靜脈曲張是由于患者下肢靜脈瓣膜無(wú)法完整封閉以及引導(dǎo)動(dòng)力的減弱，使得血液堆積在患者下肢。靜脈曲張患者開(kāi)始時(shí)癥狀較為輕微，檢查后只能看到皮膚表面微微凸起的淺藍(lán)色血管，當(dāng)癥狀加重時(shí)，患者腿部會(huì)出現(xiàn)瘙癢、水腫、酸痛感[1]。并且外觀上也會(huì)發(fā)生明顯的改變，例如，皮膚外觀呈現(xiàn)蜘蛛網(wǎng)狀、凸起的血管呈現(xiàn)蚯蚓狀，癥狀加重時(shí)皮膚會(huì)出現(xiàn)潰爛。當(dāng)患者下肢的靜脈發(fā)生破裂時(shí)，可能引起患者下肢血管出現(xiàn)靜脈血栓，嚴(yán)重者引起慢性腎衰竭，所以下肢靜脈曲張近幾年來(lái)受到了來(lái)自國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注，眾多研究表明，導(dǎo)致下肢靜脈曲張的原因與患者自身體內(nèi)的MMP-2和TIMP-2表達(dá)異常有關(guān)[2]。本文作者主要探討下肢靜脈曲張MMP-2及TIMP-2水平的表達(dá)及價(jià)值，并取得了不錯(cuò)的效果，結(jié)果研討如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對(duì)象為30名正常人（對(duì)照組）、30名下肢靜脈曲張患者（觀察組）。觀察組：有男性患者13名，女性患者17名，患者的平均年齡為（36.0±1.9）歲，對(duì)照組：有男性患者14名，女性患者16名，患者的平均年齡為（35.0±1.8）歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：1）急性傳染病患者;2）病歷記錄不完整患者;3）不配合患者;4）血壓紊亂患者。

1.2 方法

將選取的兩組樣本浸于10%的甲醛溶液中，浸泡1d后脫水，用石蠟進(jìn)行包埋切片。每組切片數(shù)不少于2張，每章厚度大約在2μm左右。用免疫組織化學(xué)法對(duì)每組的兩張樣本切片進(jìn)行染色。用染色的陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照，陰性對(duì)照用PBS緩沖液即可。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

本文主要的觀察指標(biāo)包括，兩組樣本中MMP-2及TIMP-2表達(dá)強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率。評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和方法為[3-4]，1）兩組樣本中MMP-2及TIMP-2的表達(dá)強(qiáng)度：根據(jù)光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞染色深淺來(lái)打分，不同的顏色代表不用的分?jǐn)?shù)，沒(méi)有顏色記為0分，淡黃色記為1分，棕黃色記為2分，棕褐色記為3分。根據(jù)觀察到的實(shí)際顏色進(jìn)行打分。2）陽(yáng)性細(xì)胞率[5]：以陽(yáng)性細(xì)胞占上皮細(xì)胞的百分率來(lái)表示，沒(méi)有陽(yáng)性細(xì)胞記為0分，10%的陽(yáng)性細(xì)胞率記為1分，11%～50%的陽(yáng)性細(xì)胞率記為2分，51%的陽(yáng)性細(xì)胞率記為3分，采用雙錄入的方法，如果兩個(gè)人記錄的差異超過(guò)10%以上，則需要重新記錄。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)準(zhǔn)確無(wú)誤的用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理。（±s）表示計(jì)量資料，以t檢驗(yàn);%表示計(jì)數(shù)資料，以χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異顯著有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組樣本中MMP-2表達(dá)強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞率比較

經(jīng)觀察后，觀察組患者的MMP-2表達(dá)強(qiáng)度高于對(duì)照組患者，指標(biāo)對(duì)比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 兩組樣本中TIMP-2的表達(dá)強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞率比較

經(jīng)觀察后，兩組樣本中TIMP-2的表達(dá)強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞率對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

靜脈曲張是一種常見(jiàn)病，雙下肢為好發(fā)部位。患者下肢靜脈曲張病變的部位，主要出現(xiàn)在靜脈壁的中層[6]。最開(kāi)始時(shí)，靜脈壓力的增大會(huì)導(dǎo)致肌肉組織增厚，末期時(shí)，增厚的組織會(huì)出現(xiàn)萎縮由組織纖維所替代，導(dǎo)致靜脈周圍組織由于無(wú)法得到充足的營(yíng)養(yǎng)供給而出現(xiàn)營(yíng)養(yǎng)不良和纖維細(xì)胞的大量增生[7]。此外，組織的水腫會(huì)加重纖維組織的增生，使得靜脈血管因大量蛋白質(zhì)的產(chǎn)生而出現(xiàn)阻滯現(xiàn)象，最終導(dǎo)致組織的缺氧和壞死[8]。

基質(zhì)金屬蛋白酶家族是一個(gè)大家族，在其合成中需要金屬鈣離子和金屬鋅離子協(xié)助，其功能主要由疏水信號(hào)肽序列、前肽區(qū)、催化區(qū)、富含脯氨酸的鉸鏈區(qū)以及羧基末端區(qū)五個(gè)不同功能的區(qū)域組成。疏水信號(hào)肽區(qū)的功能主要是通過(guò)信號(hào)肽使處于翻譯狀態(tài)的核糖體附著到rER膜上，與膜上的受體蛋白和新分泌的信號(hào)肽結(jié)合。前肽區(qū)，對(duì)酶原具有穩(wěn)定作用，當(dāng)前肽區(qū)被外源性酶切斷后，基質(zhì)金屬蛋白就會(huì)被激活。催化區(qū)通過(guò)與鋅離子結(jié)合而對(duì)產(chǎn)生酶的催化作用。鏈區(qū)指免疫球蛋白重鏈CHl和CH2功能區(qū)之間的區(qū)域。含大量脯氨酸，具有彈性。適于與抗原結(jié)合，也與補(bǔ)體活化有關(guān)。由于鉸鏈區(qū)富含大量的脯氨酸，可以與抗原結(jié)合也可對(duì)補(bǔ)體進(jìn)行活化。羧基末端區(qū)與酶的底物特異性有關(guān)，同時(shí)具有高度的保守性。目前已被分離出來(lái)的基質(zhì)金屬蛋白酶家族共有26個(gè)成員，命名為基質(zhì)金屬蛋白酶1～26。基質(zhì)金屬蛋白酶家族根據(jù)底物的作用和片段的同源性分為間質(zhì)膠原酶、明膠酶、基質(zhì)溶解素、模型基質(zhì)金屬蛋白酶家族以及MMP-4、MMP-5、MMP-6、MMP-20等五大類。基質(zhì)金屬蛋白酶家族具有以下特點(diǎn)：1）Zn與催化有關(guān);2）蛋白酶通過(guò)無(wú)活性的形式分泌;3）有機(jī)汞制劑和蛋白酶原激活因子可以使酶原激活;4）分子量隨著酶原的激活越來(lái)越少;5）基質(zhì)金屬蛋白酶家族具有很高的同源性;6）酶原激活劑可以被TMPS抑制。此外，金屬蛋白酶家族與機(jī)體各組織的發(fā)育、重建作用有關(guān)，例如骨的重建。

基質(zhì)金屬蛋白酶-2由13個(gè)外顯子和12個(gè)內(nèi)含子組成。活化的基質(zhì)金屬蛋白酶-2具有鉆頭的作用，在將細(xì)胞進(jìn)行定位后穿透細(xì)胞基質(zhì)。眾多臨床研究表明，基質(zhì)金屬蛋白酶會(huì)對(duì)血管的內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌造成影響，影響其愈合和生長(zhǎng)。在下肢靜脈曲張患者靜脈血管壁的重塑作用中，膠原纖維一直處于一種分解和合成的動(dòng)態(tài)平衡中，正常人體下肢靜脈中的膠原纖維增多會(huì)使得彈性纖維數(shù)量減少。基質(zhì)金屬蛋白酶-2通過(guò)鈣離子和鉀離子對(duì)下腔靜脈壁進(jìn)行誘導(dǎo)，使得血管壁出現(xiàn)擴(kuò)張。靜脈曲張的早期，血管壁并未發(fā)生擴(kuò)張松弛的變化，只存在血流回流受阻的問(wèn)題，所以此時(shí)基質(zhì)金屬蛋白酶-2表達(dá)程度較低，隨著病情的緊張，患者體內(nèi)的基質(zhì)金屬蛋白酶-2表達(dá)程度逐漸提高，靜脈管壁和膠原纖維出現(xiàn)改變。免疫組化研究證明，MMP-2在成纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞中呈現(xiàn)高度表達(dá)，而TIMP不表達(dá)。基質(zhì)金屬蛋白酶通過(guò)對(duì)蛋白水解酶活性的抑制，使得人體下肢正常的血管壁變薄。對(duì)靜脈曲張晚期患者的曲張靜脈進(jìn)行檢查時(shí)可以發(fā)現(xiàn)，ECM的蛋白出現(xiàn)水解和變性，基質(zhì)金屬蛋白酶可以通過(guò)一種超計(jì)劃的鈣鉀離子通道使下肢靜脈平滑肌松弛。基質(zhì)金屬蛋白酶家族在病理或者生理狀態(tài)下的活性會(huì)出現(xiàn)動(dòng)態(tài)性的改變，并且對(duì)下肢靜脈血管重塑產(chǎn)生影響。缺氧或者炎癥狀態(tài)下，患者下肢靜脈血管的內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌會(huì)受到不良條件的刺激而產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶，盡管基質(zhì)金屬蛋白酶家族與酶原的催化、合成有關(guān)，但是受體內(nèi)TIMP的抑制作用，這些功能將難以實(shí)現(xiàn)。

TlMPs是基質(zhì)金屬蛋白酶家族的內(nèi)源性特異性抑制因子，共有TlMP-1、TlMP-2、TlMP-3、TlMP-4四種，巨噬細(xì)胞和結(jié)締組織細(xì)胞中可以發(fā)現(xiàn)大量的TIMP-2，對(duì)基質(zhì)的降解具有抑制作用。TIMP-2可以與患者體內(nèi)的MMP-2進(jìn)行結(jié)合，對(duì)其轉(zhuǎn)錄功能具有抑制作用。由結(jié)果也可看出，觀察組患者中MMP-2的陽(yáng)性細(xì)胞率和表達(dá)作用高于對(duì)照組患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而TIMP-2的表達(dá)在兩組中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

總之，導(dǎo)致下肢靜脈曲張的原因與患者的MMP-2和TIMP-2的表達(dá)異常有關(guān)。

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