血小板輸注對(duì)晚期肺癌患者血清中MMP-9、MMP-2及VEGF水平的影響

韓麗娜，孫 楠，王 珊，趙 莎，周欣亮，趙學(xué)濤*

(1.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院輸血科，河北 石家莊 050011；2.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 石家莊 050011；3.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院化療科，河北 石家莊 050011)

輸血作為有效的救治手段已被臨床廣泛應(yīng)用，然而，輸血是一把雙刃劍，合理有效地輸血能挽救生命，不合理的運(yùn)用則會(huì)影響生存質(zhì)量，甚至危及生命。研究表明，輸血能改變患者的免疫狀態(tài)，但對(duì)惡性腫瘤患者的免疫調(diào)節(jié)產(chǎn)生負(fù)面影響，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移[1-2]。肺癌是我國(guó)目前發(fā)病率和病死率最高的腫瘤[3]，由于放療和化療導(dǎo)致的骨髓抑制或腫瘤晚期侵犯骨髓，晚期肺癌患者常出現(xiàn)血小板極度減低的情況，而血小板輸注是目前用于預(yù)防血小板明顯減少引起出血的重要治療手段。本研究回顧性分析晚期肺癌患者在輸注血小板后血清金屬基質(zhì)蛋白酶9 (metallomatrix protease9,MMP-9)、金屬基質(zhì)蛋白酶2(metallomatrix protease2，MMP-2)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平，探討輸注血小板是否促進(jìn)晚期肺癌的轉(zhuǎn)移。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年1月—2018年12月在我院化療科就診且資料完善的肺癌患者89例，所有患者均無(wú)免疫系統(tǒng)疾病，無(wú)細(xì)菌和病毒感染，未用皮質(zhì)激素等影響免疫功能的藥物，血小板<20×109/L，且無(wú)出血。所有患者均為本次住院第一次輸血，之前未輸注任何血液成分。

本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者治療前均知情并簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1血小板增加指數(shù)(corrected count increment，CCI)的計(jì)算 患者于19：00-21:00輸注血小板，在輸血當(dāng)日清晨和輸血后的次日清晨分別采集血液，進(jìn)行血小板的計(jì)數(shù)。 CCI= (輸注后血小板計(jì)數(shù)-輸注前血小板計(jì)數(shù))×體表面積/輸入血小板總數(shù)，其中血小板計(jì)數(shù)單位為109/L,體表面積(m2)=0.006 1×身高(cm)+0.012 8×體重(kg)-0.015 29[4]。輸后CCI>7.5定義為臨床輸注有效，反之則無(wú)效。

1.2.2MMP-2、MMP-9及VEGF水平的檢測(cè) 所有患者均在輸注血小板的當(dāng)日清晨空腹采靜脈血5 mL，輸注1或者2治療量血小板，次日清晨再次空腹采集靜脈血5 mL。分離血清，提取分離的血清置于EP管中-80 ℃冰箱凍存，標(biāo)本集齊后，應(yīng)用ELISA試劑盒檢測(cè)血清中MMP-2、MMP-9及VEGF的水平，檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自eBiosciences公司，操作按說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)和配對(duì)t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson直線相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1血小板輸注有效率與患者年齡、性別、體表面積的關(guān)系 經(jīng)計(jì)算，血小板輸入有效率為80.90%(72/89)。根據(jù)血小板輸注是否有效分為有效組72例和無(wú)效組17例，2組性別、年齡和體表面積差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。血小板輸注有效率與年齡、性別、體表面積無(wú)相關(guān)性(r=-0.069、-0.077、0.017，P=0.516、0.467、0.871)。

表1 血小板輸注有效率與患者年齡、性別、體表面積的關(guān)系Table 1 Relationship between the effectiveness of platelet infusion and patients age, gender and body surface area

2.22組血清中MMP-9、MMP-2和VEGF水平的比較 在血小板輸注前，2組血清中MMP-9、MMP-2及VEGF水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在血小板輸注后，有效組血清中MMP-9、MMP-2及VEGF水平明顯高于無(wú)效組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；有效組血清中MMP-9、MMP-2及VEGF水平高于血小板輸注前，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 2組血清中MMP-9、MMP-2和VEGF水平的比較Table 2 Comparison of serum MMP-9,MMP-2 and VEGF levels between two groups

*P值<0.05與輸血小板前比較(配對(duì)t檢驗(yàn))

3 討 論

血小板由骨髓中成熟的巨核細(xì)胞裂解、胞質(zhì)脫落而成，除了血栓和止血外，還參與諸多病理生理過(guò)程，如先天適應(yīng)性免疫應(yīng)答、血管生成、腫瘤轉(zhuǎn)移、動(dòng)脈粥樣硬化等。研究顯示，血小板在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起到關(guān)鍵作用[5]。當(dāng)腫瘤細(xì)胞自原發(fā)灶脫落進(jìn)入血管，然后血小板黏附在癌細(xì)胞表面，形成物理屏障，避免血流撞擊力對(duì)癌細(xì)胞的損傷，使腫瘤細(xì)胞存活概率上升；血小板表面的標(biāo)志物及MHCⅠ類分子轉(zhuǎn)移到腫瘤細(xì)胞表面，幫助其逃避自然殺傷細(xì)胞的殺害；血小板與腫瘤細(xì)胞形成聚集體，分泌大量細(xì)胞因子促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移[6]。對(duì)于大部分實(shí)體瘤而言，腫瘤快速生長(zhǎng)急需營(yíng)養(yǎng)供給，網(wǎng)狀血管結(jié)構(gòu)大量生成，流經(jīng)該處血管的血小板被激活后，成為腫瘤微環(huán)境的一部分從而促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展。研究表明，血小板數(shù)量增多與腫瘤轉(zhuǎn)移具有正相關(guān)，其中非小細(xì)胞肺癌患者兼有血小板增多癥的比例為17%～53%[7-11]。在腫瘤細(xì)胞受到阻滯2 h內(nèi)即可形成由血小板誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)移灶，從而促進(jìn)后續(xù)的轉(zhuǎn)移[12]。那么晚期肺癌患者輸注血小板是否也具有與自身血小板一樣的效果，是否促進(jìn)肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移呢，本研究就此作了研究。

惡性腫瘤的主要生物學(xué)特性是侵襲和轉(zhuǎn)移,VEGF和金屬基質(zhì)蛋白酶 (matrix metal proteinases，MMPs)是與肺癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的物質(zhì)。腫瘤血管新生是惡性腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的前提，VEGF可作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，增加血管通透性，使血漿蛋白和纖維蛋白滲出，為腫瘤細(xì)胞移動(dòng)侵入提供暫時(shí)的基質(zhì)成分，還可通過(guò)上調(diào)血漿活化因子的活性，促進(jìn)血管構(gòu)建，生成新的毛細(xì)血管，促進(jìn)肺癌的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移[13]。有文獻(xiàn)報(bào)道非小細(xì)胞肺癌血漿VEGF水平增高，提示VEGF對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者有很好的診斷價(jià)值[14]。MMPs參與多種病理生理過(guò)程，通過(guò)酶解其膠原底物，發(fā)揮“鉆頭”樣作用，為腫瘤的轉(zhuǎn)移打開(kāi)通路[15]。楊燕君等[16]研究表明，非小細(xì)胞肺癌患者血清MMP-2及MMP-9的水平明顯高于健康對(duì)照組和良性腫瘤組，并且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清MMP-2和MMP-9的水平明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。因此，MMP-2、MMP-9及VEGF是很好的研究腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的指標(biāo)，本研究通過(guò)對(duì)血清中這三種細(xì)胞因子的變化觀察輸注的血小板是否促進(jìn)晚期肺癌的轉(zhuǎn)移。

本研究結(jié)果顯示，在血小板輸注前，2組血清中MMP-9、MMP-2及VEGF水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；在血小板輸注后，有效組血清中MMP-9、MMP-2及VEGF水平明顯高于無(wú)效組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。說(shuō)明輸注的活化血小板可能參與腫瘤的某些生物學(xué)行為，導(dǎo)致此3項(xiàng)指標(biāo)發(fā)生變化。有效組血清中MMP-9、MMP-2及VEGF水平高于血小板輸注前，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，證明輸注有效的血小板與自身的血小板均能促進(jìn)腫瘤的發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移。輸注無(wú)效組此3項(xiàng)指標(biāo)沒(méi)有變化，其原因可能是：①血小板輸注后很快在內(nèi)皮系統(tǒng)遭到破壞，血小板碎片不能黏附在腫瘤細(xì)胞的表面，使腫瘤細(xì)胞受到血流剪切力的損傷，不利于其血行轉(zhuǎn)移；②由于血小板破碎，其表面標(biāo)志物不能轉(zhuǎn)移到腫瘤細(xì)胞，從而使腫瘤細(xì)胞遭到自然殺傷細(xì)胞的攻擊；③血小板不能通過(guò)外泌體等分泌促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)細(xì)胞因子。綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)輸注的血小板也能促進(jìn)肺癌患者的發(fā)展和轉(zhuǎn)移，因此應(yīng)該盡量避免給肺癌患者輸注血小板，必要時(shí)聯(lián)合應(yīng)用促血小板生長(zhǎng)因子，或在化療時(shí)預(yù)防性使用重組人血小板生成素等措施，以減少異體血小板輸注量[17]。對(duì)于異體血小板促進(jìn)肺癌患者腫瘤發(fā)展和轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。