偏頭痛模型大鼠血漿一氧化氮和降鈣素基因相關肽含量變化及氟桂利嗪干預效果實驗研究*

劉 斌，馬原源，毛文靜，鄧春穎，王彩霞，楊海霞

1．華北理工大學附屬醫院神經內一科(唐山 063000)；2.河北省遷安市老干部局醫院(遷安 064400)

偏頭痛(Migraine)是反復發作的一側或兩側搏動性頭痛，為臨床最常見的一種類型頭痛。WHO將重度偏頭痛列為嚴重影響患者生活質量的慢性疾病之一，給社會和家庭帶來沉重的負擔[1-3]。探討偏頭痛的發病機制，尋求安全有效的防治偏頭痛藥物，是亟待解決的問題。有研究表明一氧化氮(Nitric oxide，NO)和降鈣素基因相關肽(Calcitonin gene-related peptide，CGRP)與偏頭痛發病有關[4-5]。因此，本研究旨在通過制備偏頭痛大鼠模型，采用硝酸還原酶法測定NO含量和放射免疫法檢測頸靜脈血中CGRP含量變化及用氟桂利嗪進行干預后對以上指標的影響，探討偏頭痛的發病機制及氟桂利嗪的干預效果，為偏頭痛的防治提供依據。

材料與方法

1 動物和試劑 清潔級健康SD大鼠36只(雌雄各半，分籠喂養)，鼠齡3～4個月，體重250～300 g，由中國醫學科學院實驗動物研究所供給。全價顆粒飼料喂養，自由攝食，室溫20 ℃～25 ℃，相對濕度45%～55%，每日光照12 h，飼養1周熟悉環境后進入實驗。NO試劑盒(南京建成生物化學公司)，CGRP試劑盒 (上海西唐生物科技有限公司)，硝酸甘油(Glyceryltrinitrate ，GTN)注射液(北京益民藥業有限公司)，氟桂利嗪膠囊(西安楊森制藥有限公司)。

2 偏頭痛模型制備 采用GTN造模法。根據Cristina等[6]報道的方法，予大鼠皮下注射GTN(10 mg/kg)， GTN造模后30 min出現雙耳發紅、前肢頻繁搔頭、爬籠次數增多、煩躁不安等現象，持續3 h后出現蜷臥、活動減少等狀態，出現以上現象視為造模成功。觀察各組的情況并記錄。

3 動物分組 實驗大鼠隨機分為生理鹽水對照組(對照組)、偏頭痛模型組(模型組)和氟桂利嗪干預組(氟桂利嗪組)，每組12只。

4 給藥方法 ①生理鹽水對照組(對照組)：每天以生理鹽水灌胃(10 ml/kg)，1次/d，連續7 d，第7天灌胃30 min后皮下注射生理鹽水2 ml；②偏頭痛模型組(模型組)：每天以生理鹽水灌胃(10 ml/kg)，1次/d，連續7 d，第7天灌胃30 min后造模；③氟桂利嗪干預組(氟桂利嗪組)：每天以氟桂利嗪懸液溶液灌胃(0.4 mg/kg)，1次/d，連續7 d，第7天灌胃30 min造模。

5 指標測定 采用硝酸還原酶法測定NO含量和放射免疫法檢測頸靜脈血中CGRP含量，操作步驟均嚴格按照試劑盒說明書進行。

結 果

1 各組大鼠血漿NO含量的比較 與對照組比較，模型組兩個時間點(3 h、6 h)血漿中NO含量明顯增加，兩組比較差異有統計學意義(均P<0.01)；6 h組血漿中NO含量少于3 h組，兩組比較差異有統計學意義(均P<0.01)。與模型組比較，氟桂利嗪組兩個時間點(3 h、6 h)血漿中NO含量明顯減少，兩組比較差異有統計學意義(均P<0.01)；6 h組血漿中NO含量少于3 h組，兩個時間點比較差異有統計學意義(均P<0.01)。見表1。

2 各組大鼠血漿CGRP含量的比較 與對照組比較，模型組兩個時間點(3 h、6 h)血漿中CGRP含量明顯增加，兩組比較差異有統計學意義(均P<0.01)；6 h組血漿中CGRP含量少于3 h組，兩個時間點比較差異有統計學意義(均P<0.01)。與模型組比較，氟桂利嗪組兩個時間點(3 h、6 h)血漿中CGRP含量明顯減少，兩組比較差異有統計學意義(均P<0.01)；6 h組血漿中CGRP含量少于3 h組，比較差異有統計學意義(均P<0.01)。見表2。

表1 各組大鼠血漿NO含量的比較(μmol/L)

注：與對照組比較△P<0.01；與模型組比較▲P<0.01

表2 各組大鼠血漿CGRP含量的比較(μmol/L)

注：與對照組比較,△P<0.01；與模型組比較,▲P<0.01

討 論

偏頭痛的發作是一種復雜的神經血管改變，目前對偏頭痛發生的病理機制尚未完全清楚。近年研究認為三叉神經對顱內外血管的舒縮調節以及疼痛刺激傳導途徑的激活是關鍵性機制，局部血管活性物質如NO、CGRP、5羥色胺(5-HT)、內皮素、緩激肽等起著降低痛閾，增加疼痛敏感性的重要作用[7-9]。NO是一種小分子物質，存在于人體的各個組織器官，具有擴張血管，改善局部組織血運等保護性作用[10]，但在過量的情況下又可能介導嚴重的神經毒性及細胞毒性而造成組織損傷，實驗證明NO調節三叉神經血管系統的敏感性，可刺激三叉神經血管系統，使三叉神經核團的一氧化氮合酶興奮，從而使中樞的興奮性增加。有研究發現NO在偏頭痛和其他頭痛產生中是一個十分關鍵的因子，被認為是原發性頭痛的觸發點，在偏頭痛發病過程中起著關鍵作用[7]。CGRP是Rosenfold等[11]在1982年發現的含有37個氨基酸組成的血管活性神經肽，存在于中樞和周圍神經系統的感覺神經元胞體和末梢，通過外周炎癥和中樞調節來提高偏頭痛患者的神經傳遞。CGRP是最重要的血管活性物質，具有強烈的擴張血管作用，并能增加毛細血管通透性、血漿蛋白滲出，參與神經源性炎癥的過程，在疼痛感覺調控中發揮重要作用[12-13]。本研究結果提示，與對照組比較，模型組兩個時間點(3 h、6 h)血漿中NO和CGRP含量明顯增加，比較差異有統計學意義。表明NO和CGRP在偏頭痛發病過程中起著十分重要的作用。

鹽酸氟桂利嗪(西比靈)為哌嗪氟化衍生物，易通過血腦屏障，對腦血管有選擇性擴張作用，能抑制血小板活性物質釋放，阻斷鈣離子的跨膜內流而防止偏頭痛的發作[14-16]，還可防止腦血管痙攣，抑制致痛物質的釋放，提高腦細胞對缺氧的耐受性，有助于恢復紅細胞的變形能力，降低血黏度，增加腦血流量[17-20]。鹽酸氟桂利嗪能有效地減少頭痛的發作頻率，減輕頭痛的嚴重程度，達到預防和治療偏頭痛的作用。本研究結果提示，與模型組比較，氟桂利嗪組兩個時間點(3 h、6 h)血漿中NO和CGRP含量明顯減少，差異有統計學意義。結果表明氟桂利嗪可通過抑制血漿NO、CGRP而發揮治療偏頭痛的作用。