生物源殺菌劑對蘋果輪紋病菌的室內(nèi)活性評價

曾鑫 渠非 黃麗麗

摘要：

為篩選出可用于蘋果輪紋病防治的生物源殺菌劑，采用菌絲生長速率法測定了9種生物源殺菌劑對蘋果輪紋病菌菌絲生長的抑制效果。結(jié)果表明：測試藥劑對蘋果輪紋病菌絲生長均有較好的抑制效果。其中，室內(nèi)毒力最強的3種藥劑是50億cfu/g多粘類芽孢桿菌（WP）、100億cfu/g枯草芽孢桿菌（WP）和300億cfu/g解淀粉芽孢桿菌（WP），EC50分別為3155×10-2μg/mL、3429×10-2μg/mL和8856×10-2μg/mL;室內(nèi)毒力相對較弱的為1000億cfu/g熒光假單胞桿菌（WP）、5%香芹酚（AS）、大蒜油（EC）、03%丁子香酚（SL）、1%蛇床子素（EW）、3億cfu/g哈茨木霉菌（WP），EC50分別為7556μg/mL、1480×10μg/mL、1719×10μg/mL、5901×10μg/mL、6601×10μg/mL、1181×102μg/mL。綜上，50億cfu/g多粘類芽孢桿菌（WP）、100億cfu/g枯草芽孢桿菌（WP）和300億/g解淀粉芽孢桿菌（WP）有望成為防治蘋果輪紋病的候選生物源殺菌劑。

關(guān)鍵詞：

蘋果輪紋病菌;生物源殺菌劑;毒力測定

中圖分類號：S-3

文獻標識碼：A

DOI：1019754/jnyyjs20200630003

引言

蘋果（Malus domestica Borkh），屬于薔薇科蘋果屬植物，是世界范圍內(nèi)廣泛種植的經(jīng)濟作物。目前，我國蘋果種植面積和產(chǎn)量均居世界第一，在我國農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟發(fā)展和果農(nóng)脫貧致富中發(fā)揮重要作用。然而，病蟲害的高發(fā)頻發(fā)嚴重影響蘋果產(chǎn)業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展。近年來，蘋果輪紋病在我國各蘋果產(chǎn)地均有不同程度發(fā)生，嚴重時田間病果率可達70%～80%，且貯藏期仍可持續(xù)發(fā)病，已成為繼蘋果樹腐爛病、早期落葉病之后的第3大病害，給果農(nóng)帶來了巨大的經(jīng)濟損失[1，2]。蘋果輪紋病病原菌為葡萄座腔菌[Botryosphaeria dothidea（MougexFr）Ces et De Not]，主要為害蘋果的枝干及果實。目前生產(chǎn)上仍主要依賴苯并咪唑類、三唑類、甲氧基丙烯酸脂類等化學藥劑進行病害防控。但果農(nóng)長時間不合理、不規(guī)范施用化學農(nóng)藥，不僅容易使病原菌產(chǎn)生抗藥性，而且還會對果品安全及果園生態(tài)環(huán)境造成嚴重影響。據(jù)報道，生產(chǎn)上已多次發(fā)現(xiàn)對多菌靈和甲基硫菌靈產(chǎn)生抗藥性的菌株[3-5]。近年來，研究發(fā)現(xiàn)病原菌對苯醚甲環(huán)唑、戊唑醇的敏感性正在下降，存在著較大的抗性風險[6]。

生物源農(nóng)藥是利用生物產(chǎn)生的天然活性物質(zhì)或生物本身制作而成，有助于減少化學農(nóng)藥對環(huán)境造成的污染。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部提出農(nóng)藥使用負增長，建立環(huán)境友好型農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的要求為生物源農(nóng)藥的應用提供了廣闊的前景。本實驗通過測定9種生物源殺菌劑對蘋果輪紋病菌菌絲生長的抑制作用，旨在篩選出高效低毒的生物源殺菌劑，為生產(chǎn)上安全高效防治蘋果輪紋病提供參考。

1材料與方法

11試驗材料

111供試菌株

蘋果輪紋病菌由西北農(nóng)林科技大學果樹病害病原生物學及綜合防控實驗室分離保存。

112培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA），配方：馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g，蒸餾水定容至1000mL后，經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30min。

12試驗方法

121殺菌劑對病菌菌絲生長的抑制效果測定

采用菌絲生長速率法[7]，將9種供試藥劑分別稀釋到合適的濃度梯度，待PDA培養(yǎng)基冷卻至45℃左右時吸取3mL至盛有27mL PDA培養(yǎng)基的三角瓶中，搖勻后均勻分至3個滅菌培養(yǎng)皿制成含藥培養(yǎng)基。每種藥劑設置5個濃度并設置加入無菌水的空白對照，每個濃度設置3次機械重復，3次生物學重復。25℃黑暗培養(yǎng)3d的蘋果輪紋病菌菌落邊緣處用滅菌的打孔器打下直徑5mm的菌餅，倒置于含藥培養(yǎng)基中央并放置于25℃黑暗條件下培養(yǎng)約3d，利用十字交叉法測量皿內(nèi)菌落直徑，計算出菌絲生長抑制率。

抑制率=[（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對照菌落直徑-菌餅直徑）]×100%

122數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用Excel 2007進行數(shù)據(jù)處理，以各藥劑濃度的對數(shù)值為橫坐標（x），菌絲生長抑制率對應的幾率值為縱坐標（y），作線性回歸分析，計算不同藥劑對蘋果輪紋病菌的EC50值和相關(guān)系數(shù)R2。

2結(jié)果與分析

結(jié)果表明，9種生物源殺菌劑對輪紋病菌菌絲生長均有一定的抑制作用。其中，室內(nèi)毒力最強的3種藥劑是50億cfu/g多粘類芽孢桿菌（WP）、100億cfu/g枯草芽孢桿菌（WP）和300億cfu/g解淀粉芽孢桿菌（WP），EC50分別為3155×10-2μg/mL、3429×10-2μg/mL、和8856×10-2μg/mL;室內(nèi)毒力相對較弱的為1000億cfu/g熒光假單胞桿菌（WP）、5%香芹酚（AS）、大蒜油（EC）、03%丁子香酚（SL）、1%蛇床子素（EW）、3億cfu/g哈茨木霉菌（WP），對菌絲生長的EC50分別為7556μg/mL、1480×10μg/mL、1719×μg/mL、5901×10μg/mL、6601×10μg/mL、1181×102μg/mL，均在前3種EC50的100倍以上，但仍有一定的抑制作用。

3結(jié)論與討論

目前，我國蘋果產(chǎn)區(qū)病蟲害防控仍主要依賴化學農(nóng)藥。長期過量使用化學農(nóng)藥不僅有著巨大的抗藥性風險，而且對人類健康和環(huán)境也有巨大的隱患[8]。生物農(nóng)藥由于其所具備的環(huán)境友好性等特點在世界范圍內(nèi)得到了快速發(fā)展。世界上生物農(nóng)藥使用最多的國家為墨西哥、美國和加拿大，3國生物農(nóng)藥使用量占世界總量的44%[9];在歐洲，生物農(nóng)藥在農(nóng)藥市場上也占有504%的份額。近年來，隨著人們健康意識、環(huán)保意識的逐漸增強，生物農(nóng)藥這一領(lǐng)域引起了社會的廣泛關(guān)注，得到了我國各級政府、科研機構(gòu)及相關(guān)企業(yè)的大力支持，根據(jù)相關(guān)統(tǒng)計，我國已注冊的生物農(nóng)藥品種為140種，占農(nóng)藥總品種的15%，年產(chǎn)量大約在12～13萬t，占農(nóng)藥總藥量的12%。

本研究通過測定9種生物源殺菌劑對蘋果輪紋病菌菌絲生長的抑制作用，篩選出了室內(nèi)毒力較強的3種藥劑，分別為50億cfu/g多粘類芽孢桿菌、100億cfu/g枯草芽孢桿菌和300億cfu/g解淀粉芽孢桿菌，3種藥劑的EC50均<01μg/mL。楊煒華[10]等研究表明，927%甲基硫菌靈原粉對蘋果輪紋病菌菌絲生長的EC50為7102×10-1μg/mL;馬志強[11]等研究表明，50%多菌靈可濕性粉劑對蘋果輪紋病菌菌絲生長的EC50為36×10-3μg/mL;李娜[12]等研究表明，10%的苯醚甲環(huán)唑、430g/L戊唑醇懸浮劑對蘋果輪紋病菌菌絲生長的EC50分別為17×10-2μg/mL和114×10-1μg/mL。由此可見，本實驗篩選出的3種生物源殺菌劑對蘋果輪紋病菌菌絲生長的抑制作用相比于市場上常見的化學藥劑相差并不大。上述3種生物源藥劑有望成為蘋果輪紋病防控的化學藥劑替代藥劑。但由于田間環(huán)境相對實驗室更加復雜多變，可能會導致藥劑的穩(wěn)定性和速效性較差，在生產(chǎn)中大面積推廣應用之前要進一步進行田間應用效果評估。

參考文獻

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[11]馬志強，李紅霞，袁章虎，張小風.蘋果輪紋病菌對多菌靈抗藥性監(jiān)測初報[J].農(nóng)藥學學報，2000（03）：94-96.

[12]李娜，劉麗，曹克強.幾種化學殺菌劑對蘋果輪紋病的藥效評價[J].果樹學報，2009，26（06）：855-859.

（責任編輯周康）