食管癌CTNNB1及血清CYFRA211與近期放療療效的關系

摘要 目的 探討食管癌患者放療前血清腫瘤標志物水平及食管癌組織中CTNNB1表達水平與放療療效的關系，為預測食管癌放療療效尋求更加便捷，廉價的腫瘤生物學指標。方法 入組60例患者，均為不能接受手術的局部晚期患者，經食管鏡咬檢病理診斷為食管鱗癌，根據患者放療的近期療效分為放療有效組與放療無效組，每組30例。于放療前檢測患者血清細胞角蛋白19片段（fragments of cytokeratin-19，CYFRA211）水平，采用免疫組織化學二步法檢測上述咬檢食管癌組織中CTNNB1的表達。應用非參數分析放療前血清CYFRA211、食管癌組織CTNNB1表達水平與放療療效的關系;相關性分析血清腫瘤標志物CYFRA211水平與CTNNB1表達的相關性。結果 放療有效組血清CYFRA211的表達水平低于無效組，差異有統計學意義（Z=-2.048，P=0.041）;放療有效組食管癌組織CTNNB1表達水平低于無效組，差異有統計學意義（Z=-2.156，P=0.031）。Spearman相關分析結果提示，患者血清CYFRA211與組織中CTNNB1表達之間存在正相關關系（r=0.622，P<0.001）。結論 食管鱗癌患者中血清CYFRA211或癌組織中CTNNB1表達視屏升高近期放療療效較差。患者CTNNB1及血清CYFRA211有望成為可預測食管鱗癌放療療效的腫瘤標志物。

關鍵詞 食管癌;放療治療;CTNNB1;CYFRA211

中圖分類號? R735.1? ? 文獻標識碼? A? ? 文章編號? 1671-0223（2020）10-042-04

中國為食管癌的高發區，食管癌主要以鱗狀細胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）為主。近年來，隨著放療技術的發展，放射治療已經成為食管癌主要治療手段之一，但是放射抵抗的存在嚴重制約放療療效提高。尋找具有指導意義的腫瘤標志物對評價放療效果及病情轉歸具有非常重要的臨床價值。目前針對食管癌的腫瘤標志物較少，且特異性不明顯，細胞角蛋白19片段（fragments of cytokeratin-19，CYFRA211）為細胞角蛋白中間體亞單位之一，是人體細胞角蛋白可溶性片段，與鱗狀細胞癌密切相關的腫瘤標志物之一[1]，且存在獲取便捷等優勢。CTNNB1為Wnt通路的標志性蛋白，前期課題組證實Wnt通路活化可能與食管癌放射抵抗相關。但是檢測CTNNB1存在組織標本獲取困難、有創、造價高等缺點。本文以接受根治性放射治療的食管鱗癌患者為研究對象，分析血清CYFRA211水平與食管癌組織中CTNNB1的表達水平及近期療效的關系，為預測食管癌放療療效尋求更加便捷，廉價的腫瘤生物學指標。

1 對象與方法

1.1研究對象

選擇2010 年1月—2016年 12 期間唐山市人民醫院病理診斷為食管鱗癌的患者為研究對象。根據組間基線特征具有可比性的原則，選擇放療有效（有效組）和放療無效（無效組）患者各30例。納入條件：①治療前 KPS 評分均大于 70 分且無嚴重其他疾病，無明顯放療禁忌證。②全部患者放療前均未行手術治療及化療，選擇根治性放療，放療為三維適形放射治療。排除條件：因化療藥物影響療效觀察的及放化同期的患者不納入實驗。

1.2 血清CYFRA211檢測方法

采集兩組晨起空腹靜脈血3mL，分離血清，以 3000r/min 離心5min，分離血清保存于-80℃ 待用。采用微粒酶聯免疫測定法（ MEIA） 檢測CYFRA211。操作步驟嚴格按照儀器和試劑盒說明書進行。

1.3 組織CTNNB1檢測方法

采用免疫組織化學二步法檢測食管癌CTNNB1的表達。用已知陽性切片作陽性對照，陰性對照用PBS 代替一抗，由專業病理醫師診斷。CTNNB1鼠抗人單克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術有限公司。PV-9000 免疫組織化學二步法檢測試劑盒及DAB 顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.4 免疫組織化學結果判定標準[2]陽性結果判定

CTNNB1為棕黃色顆粒，定位于胞質和胞核中。每例選擇 2 個高倍視野（×400），每個視野計數 200 個細胞。根據染色強度和染色陽性細胞所占百分比進行結果判斷： 陽性細胞所占百分比< 25% 為1分，25%～50% 為 2 分，50%～75% 為3分，>75% 為4分;染色強度不著色為 0 分，1 分為淺棕黃色，棕黃色為 2 分，棕褐色為3分;以染色陽性細胞百分比評分與染色強度評分相乘判斷結果。

1.5 靶區勾畫及放療方法

腫瘤靶區（GTV）：食管壁厚度>0.5cm 或不含氣腔的管壁直徑>1.0cm，及腫大淋巴結，縱隔淋巴結陽性標準為短徑≥1.0cm，特殊部位如食管旁、氣管食管溝等淋巴結標準為短徑≥0.5cm，并參考食管鋇劑造影;臨床靶區（CTV）：GTV 頭腳方向各外擴2cm，前后左右方向各擴0.8cm，解剖屏障適當修正;計劃靶區（PTV）：CTV 頭腳方向外擴1cm，前后左右擴0.5cm。三維適形放療，常規分割2.0 Gy /次、近似劑量60～66 Gy /30～33次。

1.6 放療近期療效評價標準

放療近期療效的評價參照1989年萬鈞提出的食管癌放射治療后近期療效的評價標準[3]，放射治療結束1～3月后由兩位經驗豐富的放療科主任醫師分別進行近期療效的獨立評價，評價不一致時進行協商討論。完全緩解（CR）：腫瘤完全消失，食管片邊緣光滑，鋇劑通過順利，但管壁可稍顯強直，管腔無狹窄或稍顯狹窄，粘膜基本恢復正常或增粗;部分緩解（PR）：病變大部分消失，無明顯的扭曲或成角，無向腔外潰瘍，鋇劑通過尚順利，但邊緣欠光滑，有小的充盈缺損或小龕影，或邊緣雖光滑但管腔有明顯狹窄;無緩解（NR）：放療結束時病變有殘留或看不出病變有明顯好轉，仍有明顯的充盈缺損及龕影或狹窄加重。CR + PR 為放療有效組，SD + PD 為放療無效組。

1.7 統計學分析

采用 SPSS 10.0 統計軟件包對數據進行處理。非正態分布的計量資料計算中位數及P25，P75，組間中位數比較采用非參數Mann-Whitney U檢驗;計數資料組間比較采用χ2檢驗;CYFRA211 與CTNNB1表達的相關性采用線性相關分析。 P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 放療有效組與無效組基線特征比較

兩組性別、年齡、病變長度、淋巴轉移、病理分級等基線臨床特征比較，差異無統計學意義（P<0.05），具有可比性，見表1。

2.2血清CYFRA211及癌組織中CTNNB1的表達水平與近期療效的關系

放療有效組血清CYFRA211、CTNNB1的表達水平均低于放療無效組，差異具有統計學意義（P<0.05），表明血清CYFRA211、CTNNB1的表達水平與近期療效有關系，表達水平升高，放療療效較差，見表2。

2.3 血清CYFRA211與癌組織中CTNNB1表達的相關性

Spearman相關分析結果顯示，血清CYFRA211與癌組織中CTNNB1之間存在正相關關系（r=0.622，P<0.001），且關系較為密切。

3 討論

放射治療是目前食管癌主要治療手段之一，尤其是對于無法接受手術的食管鱗癌患者。然而放射治療后腫瘤的局部未控及局部復發是目前阻礙放療療效提高的瓶頸。增加放療劑量不能改善局部控制率與生存期，這表明腫瘤存在著放射抵抗。課題組前期研究發現CTNNB1可能與食管癌細胞的放射抵抗相關[4]，本文通過探討食管癌放療前血清腫瘤標志物水平與食管癌組織中CTNNB1表達的相關性及與放療療效的關系，可為預測食管癌放療療效尋求更加便捷，廉價的腫瘤生物學指標。

CYFRA211是人體細胞角蛋白的片段，惡性腫瘤細胞中多有表達，并與腫瘤細胞正相關，當人體鱗狀上皮細胞引起惡變時，其蛋白酶易被激活，使角蛋白片段大量生成從而進入人體血液循環中，使人體CYFRA211含量顯著升高。CYFRA211在食管癌中也有研究，但是表達情況及作用尚存在爭議。有研究顯示CYFRA211和癌胚抗原（CEA）可能有助于預測原發灶食管鱗狀細胞癌對化學放療的反應性[5]。對于CYFRA211與放射治療敏感性的關系存在爭議，有研究顯示食管鱗狀細胞癌放射治療的療效與治療前血清CYFRA211顯著相關，CYFRA211水平高的患者的總體生存較CYFRA211水平低的患者的總體生存差，CYFRA211的低水平是良好總體生存最重要的獨立預測因子[6]。但是在另一項研究結果中顯示CYFRA211的血清表達水平與預后無關[7]。本文結果顯示，相對于放療有效組，放療無效組的 CYFRA211 升高，差異有統計學意義。

CTNNB1 是 Wnt/β-catenin信號通路的關鍵成分，在該信號通路中充當第二信使的作用。近年來有學者發現，一些細胞調控因子及原癌基因也可通過 Wnt/β-catenin信號通路異常激活來促進細胞增殖、分化，進而導致腫瘤發生。CTNNB1則作為經典Wnt信號傳導通路的關鍵點與轉錄因子Tcf/Lef 結合形成復合體促進靶基因上調，最終引起細胞發生一系列的生物學改變。在腫瘤放射學方面，Wnt/β-catenin信號通路因其會影響腫瘤細胞的增殖[8]、凋亡[9]、DNA損傷修復[10-11]等方面從而參與了腫瘤放射抗性形成。課題組前期研究發現CTNNB1可能通過Wnt/β-catenin信號通路的活化調控細胞周期而參與食管癌細胞的放射抵抗進程[12]。本實驗結果提示，CTNNB1表達與腫瘤細胞的胞漿及胞核，放療有效組與無效組間CTNNB1表達差異具有統計意義，分析結果與前期實驗結果相符。

綜上，患者血清CYFRA211在呈現放射抵抗性的食管癌患者中高表達，課題組推測CYFRA211可能存在著相關性關系。通過相關性分析實驗結果證實，食管鱗癌患者中的血清CYFRA211值和組織中的CTNNB1表達量確實存在相關性。據此課題組分析，CYFRA211和CTNNB1可能通過某條相同或存在上下調控關系的分子通路在食管鱗癌中發揮放射抵抗作用，但是其具體機制需進一步分子生物學實驗探索。血清CYFRA211有望成為可預測食管鱗癌放療療效的腫瘤標志物。

4 參考文獻

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[2020-05-15收稿]

基金項目：唐山市科技局計劃項目（編號：17130238a）

作者單位：063000 河北省唐山市人民醫院