BSP、osteocalcin在骨腫瘤組織中的表達(dá)

石林，鄭學(xué)均*，郭彬，劉自貴，李秋江,2，楊帆

(1.重慶市墊江縣中醫(yī)院骨科，重慶；2.寧夏醫(yī)科大學(xué)研究生院，重慶)

0 引言

骨腫瘤是發(fā)生于骨組織及其附屬結(jié)構(gòu)的一類(lèi)良性或者惡性腫瘤的總稱(chēng)，其發(fā)病率及死亡率均居惡性腫瘤的前幾位，其原因之一就是因?yàn)楣悄[瘤具有較強(qiáng)的轉(zhuǎn)移性[1]。且臨床上無(wú)統(tǒng)一的指標(biāo)用于對(duì)骨腫瘤的早期診斷及對(duì)預(yù)后的評(píng)估，故臨床上對(duì)骨腫瘤診斷的生物學(xué)指標(biāo)的研究也越來(lái)越受到醫(yī)務(wù)工作者的重視。BSP是細(xì)胞外基質(zhì)中的一種酸性蛋白，主要由成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞合成[2]。骨鈣素(osteocalcin，OC)在骨基質(zhì)中含量非常豐富，常常定位于成骨細(xì)胞和骨樣組織中。在低分化的軟骨肉瘤中探測(cè)到OC的高度免疫活性，而在良性和高分紅軟骨腫瘤中則無(wú)這種現(xiàn)象[3]。本次研究通過(guò)免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)了骨腫瘤及骨軟骨骨瘤組織中BSP和osteocalcin的表達(dá)情況，分析兩種蛋白的表達(dá)相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年10月至2018年10月我院手術(shù)切除的30例骨肉瘤組織和30例骨軟骨骨瘤組織，患者手術(shù)治療前均未進(jìn)行化療，兩組患者在年齡，性別等方面無(wú)差異，具有可比性。所有癌組織均經(jīng)過(guò)病理老師確診。本次研究取得了患者及家屬以及醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2 試劑及方法

兔抗人BSP、osteocalcin單克隆抗體，購(gòu)于Abcam公司， DAB試劑盒及蘇木素均購(gòu)于中杉金橋公司，辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的二抗購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司。將骨肉瘤和骨軟骨骨瘤組織蠟塊進(jìn)行連續(xù)切片，每張厚度4μm，于65度烤箱中烤片2h，免疫組織化學(xué)采用SP法，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定

BSP、osteocalcin的陽(yáng)性表達(dá)在片子上均呈現(xiàn)棕黃色或者黃色顆粒樣物質(zhì)。在400倍顯微鏡(Leica，德國(guó))下選取10個(gè)不重復(fù)的視野，分析陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比及著色的深淺。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 BSP、osteocalcin在骨肉瘤及骨軟骨骨瘤組織中的表達(dá)情況

BSP蛋白在骨肉瘤組織蠟塊中有24例判定為陽(yáng)性表達(dá)，蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為80.00%，在骨軟骨骨瘤組織蠟塊中僅有4例染色結(jié)果為陽(yáng)性，蛋白陽(yáng)性率為13.33%(P＜0.05)；osteocalcin蛋白在乳腺癌組織中有25例判定為陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率為83.33%，在骨軟骨骨瘤組織中有7例判定為陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率為23.33%(P＜0.05)。具體比較見(jiàn)圖1。

圖1 BSP與osteocalcin蛋白在骨肉瘤及骨軟骨骨瘤組織中的表達(dá)

2.2 BSP與osteocalcin之間表達(dá)的相關(guān)性

比較表1發(fā)現(xiàn)，BSP與osteocalcin的表達(dá)呈正相關(guān)，(r=-0.624，P＜0.05),具體見(jiàn)表1。

3 討論

骨腫瘤是發(fā)生于骨組織及其附屬結(jié)構(gòu)的一類(lèi)良性或者惡性腫瘤的總稱(chēng)。據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，惡性骨腫瘤發(fā)病率占全部惡性腫瘤的1%，每個(gè)國(guó)家，地區(qū)骨腫瘤的發(fā)病率也有所不同[4]。我國(guó)原發(fā)的骨腫瘤約占全身腫瘤的2%-3%。同時(shí)，隨著近些年來(lái)環(huán)境的變化，骨腫瘤的發(fā)病率也在逐年上升，同時(shí)愈發(fā)年輕化。因此對(duì)于骨腫瘤的診治在骨科領(lǐng)域中占重要地位。

表1 BSP與osteocalcin4在骨肉瘤及骨軟骨骨瘤組織表達(dá)的相關(guān)性

BSP是細(xì)胞外基質(zhì)中的一種酸性蛋白，主要由成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞合成[2]。眾多的研究表面，BSP的分布相對(duì)局限，主要在礦化組織特異性表達(dá)，在胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞、血小板中也能檢測(cè)到BSP的表達(dá)。1995年，Arai[5]等人首次發(fā)現(xiàn)BSP在乳腺癌組織中的表達(dá)。同時(shí)眾多的研究也發(fā)現(xiàn)，BSP在肺癌、甲狀腺癌、黑色素瘤等多種癌性組織中高表達(dá)[6]。但是，關(guān)于BSP在骨腫瘤組織中的表達(dá)均未見(jiàn)報(bào)道。骨鈣素在骨基質(zhì)中含量非常豐富，常常定位于成骨細(xì)胞和骨樣組織中。在低分化的軟骨肉瘤中探測(cè)到OC的高度免疫活性，而在良性和高分化軟骨腫瘤中則無(wú)這種現(xiàn)象[3,7]。因此，我們的研究發(fā)現(xiàn)，BSP和osteocalcin蛋白在骨肉瘤組織中均存在高表達(dá)，而在骨軟骨骨瘤組織中呈現(xiàn)低表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，同時(shí)進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，在骨肉瘤及骨軟骨骨瘤組織中BSP與osteocalcin的表達(dá)呈正相關(guān)(r=-0.624，P＜0.05)。綜上所述，BSP和osteocalcin參與了骨腫瘤的發(fā)生發(fā)展，對(duì)骨腫瘤潛在的治療靶點(diǎn)及預(yù)后判斷具有重要意義。