長鏈非編碼RNA作為食管癌潛在的預(yù)后生物標(biāo)志物的系統(tǒng)評價(jià)及薈萃分析△

楊俊強(qiáng)，李文耀，張策，楊義平，高社干

河南科技大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院/河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科/河南科技大學(xué)腫瘤研究所/河南省腫瘤表觀遺傳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南 洛陽4710030

食管癌的發(fā)病率居全部惡性腫瘤的第8位，病死率居全部惡性腫瘤的第6位[1]。食管癌的病理類型主要包括鱗狀細(xì)胞癌和腺癌，中國約90%的食管癌為食管鱗狀細(xì)胞癌[2]。目前主要通過臨床分期和病理分級判斷食管癌患者的預(yù)后，但相同臨床病理特征的食管癌患者也可能出現(xiàn)不同的預(yù)后[3]。因此尋找食管癌潛在的預(yù)后生物標(biāo)志物顯得尤為重要。長鏈非編碼RNA（long noncoding RNA，lncRNA）是一類轉(zhuǎn)錄本超過200個(gè)堿基的RNA分子，且不能編碼蛋白質(zhì)[4]。最初lncRNA被當(dāng)作轉(zhuǎn)錄過程中的“噪聲”未受到關(guān)注。隨著研究的不斷深入，研究者們發(fā)現(xiàn)lncRNA參與了腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)過程[5]。因此lncRNA可能在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用[6]。盡管目前不少研究表明lncRNA可能作為食管癌潛在的預(yù)后生物標(biāo)志物，但這些研究存在樣本量小、數(shù)據(jù)離散等局限性。本研究采用系統(tǒng)評價(jià)和薈萃分析的方法，評估lncRNA表達(dá)情況與食管癌患者預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 檢索策略

在PubMed、Embase、Web of Science、中國知網(wǎng)和萬方數(shù)據(jù)庫中檢索相關(guān)文獻(xiàn)。檢索日期截至2019年9月10日。檢索關(guān)鍵詞為“l(fā)ncRNA”“食管癌”。

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①病理診斷為食管癌；②lncRNA的檢測樣本來源于組織或血清；③研究分析了lncRNA表達(dá)水平與食管癌患者預(yù)后的關(guān)系；④具有生存分析相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)比（hazard ratio，HR）及95%置信區(qū)間（confidence interval，CI）。排除標(biāo)準(zhǔn)：①綜述、評論、信件；②不同研究但入組患者相同。

1.3 文獻(xiàn)篩選和質(zhì)量評估

兩位研究者根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)完成文獻(xiàn)篩選。Meta分析參考流行病學(xué)中觀察性研究的Meta分析指南（Meta-analysis of observational studies in epidemiology，MOOSE）。納入研究的質(zhì)量評估包括以下6點(diǎn)：①描述入組患者的人種和國家；②具有清晰的研究設(shè)計(jì)；③具有完整的生存分析；④描述lncRNA的檢測方法；⑤報(bào)道lncRNA的cut-off值。未滿足上述條件的文獻(xiàn)將被剔除。

1.4 數(shù)據(jù)提取

兩位研究者進(jìn)行數(shù)據(jù)提取工作。提取的數(shù)據(jù)包括作者姓名、國家、lncRNA名稱、患者人種、病例數(shù)、病理類型、樣本類型、lncRNA檢測方法、HR值及95%CI、P值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Stata 15.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用Cochran’sQ檢驗(yàn)和HigginsI2檢驗(yàn)分析異質(zhì)性。基于合并效應(yīng)量的異質(zhì)性，選擇固定效應(yīng)模型或隨機(jī)效應(yīng)模型。當(dāng)異質(zhì)性明顯（I2＞50%或P＜0.05）時(shí)采用隨機(jī)效應(yīng)模型，反之則采用固定效應(yīng)模型。HR值及95%CI用于分析lncRNA表達(dá)情況與食管癌患者預(yù)后的關(guān)系。合并的HR值大于1表示高表達(dá)的lncRNA與較差的預(yù)后有關(guān)。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)篩選結(jié)果

根據(jù)上述檢索策略，共檢出1217篇文獻(xiàn)。刪除重復(fù)文獻(xiàn)后剩余606篇文獻(xiàn)。

通過瀏覽標(biāo)題、摘要和全文，最終篩選出25篇滿足納入、排除標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)量評估的文獻(xiàn)用于后續(xù)的系統(tǒng)評價(jià)[7-31]。此外，5篇文獻(xiàn)用于薈萃分析[7-9,12,18]。（圖1）

2.2 lncRNA表達(dá)情況與食管癌患者預(yù)后的關(guān)系

圖1 文獻(xiàn)篩選流程

納入的文獻(xiàn)共包含3830例食管癌患者，報(bào)道了22個(gè)與食管癌患者預(yù)后相關(guān)的lncRNA。其中在食管癌中高表達(dá)的為 HOTAIR[7-9]、SPRY4-IT1[11]、MALAT1[12,18]、NEAT1[13]、PCAT-1[14]、ZEB1-AS1[15]、uc002yug.2[16]、 CCAT2[17]、 TUG1[19]、 BANCR[20]、BC200[21]、AFAP1-AS1[22]、ATB[23]、FOXD2-AS1[24]、LINC01296[25]、XIST[26]和 NORAD[27]，低 表 達(dá) 的 為LOC285194[10]、LINC00675[28]、LINC01133[29]、MEG3[30]和GAS5[31]。在研究文獻(xiàn)中，實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）用于檢測lncRNA的表達(dá)水平。大部分文獻(xiàn)中，研究者在食管癌與癌旁組織中均檢測了lncRNA的表達(dá)，1篇文獻(xiàn)中，研究者檢測了食管癌組織、癌旁組織和血漿中的lncRNA的表達(dá)。根據(jù)總生存期的HR值及95%CI，食管癌患者中過表達(dá)的HOTAIR、SPRY4-IT1、MALAT1、NEAT1、PCAT-1、ZEB1-AS1、uc002yug.2、CCAT2、TUG1、BANCR、BC200、 AFAP1-AS1、 ATB、FOXD2-AS1、LINC01296、XIST和 NORAD預(yù)示著較差的生存期。然而，低表達(dá)的LOC285194、LINC00675、LINC01133、MEG3和 GAS5預(yù)示著較差的生存期。（表 1）

2.3 HOTAIR、MALAT 1表達(dá)情況與食管癌患者預(yù)后的關(guān)系

在納入的文獻(xiàn)中，共有5篇文獻(xiàn)多次報(bào)道了食管癌患者中HOTAIR、MALAT1的表達(dá)情況及患者預(yù)后。其中3篇文獻(xiàn)報(bào)道了食管癌患者中HOTAIR的表達(dá)情況及患者的生存情況，Cochran’sQ和HigginsI2異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果顯示，各個(gè)研究間無明顯異質(zhì)性（I2=0%，P=0.606）。采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行薈萃分析，結(jié)果顯示，HOTAIR高表達(dá)與食管癌患者較短的生存期有關(guān)（HR=2.404，95%CI：1.661～3.479，P＜0.01）（圖 2）。2篇文獻(xiàn)報(bào)道了食管癌患者中MALAT1的表達(dá)情況及患者的生存情況，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果顯示，2個(gè)研究間存在異質(zhì)性（I2=84.1%，P=0.012）。采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行薈萃分析，結(jié)果表明，MALAT1表達(dá)水平與食管癌患者的預(yù)后無明顯相關(guān)性（HR=3.384，95%CI：0.948～12.082，P=0.060）（圖3）。由于薈萃分析的文獻(xiàn)數(shù)少于10篇，因此無法評估發(fā)表偏倚。

表1 食管癌患者lncRNA表達(dá)情況及預(yù)后的回顧性研究

3 討論

圖2 HOTAIR表達(dá)與食管癌患者總生存期的森林圖

圖3 MALAT 1表達(dá)與食管癌患者總生存期的森林圖

近年來，越來越多的研究證實(shí)了lncRNA參與腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移等過程，并在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中扮演重要角色[32]。先前的研究已經(jīng)報(bào)道了一些lncRNA可能與食管癌的預(yù)后具有相關(guān)性。但由于樣本量小等局限性，這些研究的結(jié)論可能存在爭議。因此，本研究采用系統(tǒng)評價(jià)和薈萃分析的方法，評估lncRNA表達(dá)情況與食管癌患者預(yù)后的相關(guān)性。通過檢索和篩選共納入25篇原始文獻(xiàn)，包含3830例患者。通過系統(tǒng)評價(jià)發(fā)現(xiàn)，食管癌患者中高表達(dá)的HOTAIR、SPRY4-IT1、MALAT1、NEAT1、PCAT-1、ZEB1-AS1、uc002yug.2、 CCAT2、 TUG1、 BANCR、BC200、AFAP1-AS1、ATB、FOXD2-AS1、LINC01296、XIST和NORAD預(yù)示著較差的生存期，低表達(dá)的LOC285194、LINC00675、LINC01133、MEG3和GAS5預(yù)示著較差的生存期。

雖然經(jīng)系統(tǒng)評價(jià)發(fā)現(xiàn)了多個(gè)與食管癌預(yù)后相關(guān)的 lncRNA，但僅有兩個(gè) lncRNA（HOTAIR 和MALAT1）及其生存數(shù)據(jù)可以用于薈萃分析。薈萃分析結(jié)果顯示，HOTAIR高表達(dá)與食管癌患者較短的生存期有關(guān)（HR=2.404，95%CI：1.661～3.479，P＜0.01）。值得注意的是，盡管Huang等[18]研究顯示MALAT1的表達(dá)與食管癌患者預(yù)后有關(guān)（HR=6.638，95%CI：2.948～14.497，P＜0.01），但薈萃分析結(jié)果表明MALAT1的表達(dá)水平與食管癌患者的預(yù)后無明顯相關(guān)性（HR=3.384，95%CI：0.948～12.082，P=0.060）。

HOTAIR可能作為一種促癌基因在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用[33]。研究表明，在多種腫瘤中高表達(dá)的HOTAIR預(yù)示著較差的生存期（HR=2.00，95%CI：1.77～2.27，P＜0.01）[34]，與本研究結(jié)果一致。此外，HOTAIR在細(xì)胞水平和分子水平上的功能可能解釋了HOTAIR與食管癌預(yù)后的相關(guān)性。研究表明，HOTAIR可以促進(jìn)食管癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，并通過啟動子甲基化下調(diào)WNT抑制因子 1（WNT inhibitory factor 1，WIF1）的表達(dá)，從而活化 WNT/β-聯(lián)蛋白（β-catenin）信號通路[8]。另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，敲除小鼠模型的HOTAIR基因可以抑制食管癌細(xì)胞的增殖[35]。

盡管本研究制訂了嚴(yán)格的檢索策略及納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，但仍存在一些局限性：①由于缺乏相關(guān)的研究數(shù)據(jù)，僅有5篇原始文獻(xiàn)中的生存數(shù)據(jù)可以進(jìn)行薈萃分析，這可能降低了研究結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)效力；②納入文獻(xiàn)中l(wèi)ncRNA的表達(dá)水平的界定存在差異，這可能增加了lncRNA的檢測難度；③所有的入組病例均為亞洲人群，且食管癌病理類型均為鱗狀細(xì)胞癌。但目前亞洲，尤其是中國為世界食管癌的高發(fā)區(qū)域，且絕大多數(shù)為食管鱗狀細(xì)胞癌，這一不足似乎無法避免。

綜上所述，系統(tǒng)評價(jià)和薈萃分析表明，多種lncRNA與食管癌患者的預(yù)后具有相關(guān)性，因此lncRNA可能成為食管癌患者潛在的預(yù)后生物標(biāo)志物，這一結(jié)論也需要更多的數(shù)據(jù)來證明。