調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與淋巴瘤亞型生存率的研究進(jìn)展

齊琦，劉愛春

哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院血液淋巴科，哈爾濱150000

CD4+CD25+T細(xì)胞由Sakaguchi等學(xué)者首次提出，因該細(xì)胞亞群具有免疫調(diào)節(jié)活性，所以被稱為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cell，Treg）[1]。小鼠和人體內(nèi)均天然存在Treg細(xì)胞約占外周血CD4+T細(xì)胞的5%～10%，除天然存在的Treg外，還存在外周誘導(dǎo)的抗原特異性Treg[2]。Treg最特異性的標(biāo)志是FOXP3的表達(dá)，也是其最可靠的生物標(biāo)志物[3]。自19世紀(jì)70年代初抑制性T細(xì)胞被描述以來，在Treg細(xì)胞表征方面的研究已取得了相當(dāng)大的進(jìn)步。目前，人FOXP3+CD4+T細(xì)胞可以根據(jù)其細(xì)胞表面標(biāo)志物（如CD45RA和CD45RO）的表達(dá)及FOXP3表達(dá)分為不同亞群。

研究顯示，F(xiàn)OXP3+Treg在細(xì)胞表型和功能上存在異質(zhì)性，由抑制性和非抑制性亞群組成，根據(jù)FOXP3、CD25和CD45RA的表達(dá)水平，F(xiàn)OXP3+CD4+T細(xì)胞可分為3個(gè)亞群：①幼稚或靜止的Treg細(xì)胞，即FOXP3loCD45RA+CD25lo表型；②效應(yīng)Treg細(xì)胞，即FOXP3hiCD45RA-CD25hi表型；③沒有抑制活性的非Treg細(xì)胞，即FOXP3loCD45RACD25lo表型[4]。此外，根據(jù)FOXP3+Treg的不同作用還可以將其分為以下4類：①抑制性Treg，可抑制抗腫瘤CD8+細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，類似于實(shí)體瘤中發(fā)現(xiàn)的反應(yīng)；②惡性Treg，F(xiàn)OXP3+T細(xì)胞淋巴瘤（如成人T細(xì)胞白血病/淋巴瘤）；③直接殺死腫瘤的Treg，一些淋巴瘤細(xì)胞可以作為Treg抑制性細(xì)胞毒性的靶細(xì)胞，表明Treg可以是腫瘤細(xì)胞的殺手；④無能的Treg，當(dāng)FOXP3+Treg的數(shù)量明顯減少時(shí)，成為靜止的Treg[2]。

1 Treg的功能及研究現(xiàn)狀

CD4+CD25+FOXP3+Treg是CD4+T細(xì)胞亞群之一，其作用是抑制其他免疫細(xì)胞的活化，維持免疫系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)，抑制周圍的效應(yīng)T細(xì)胞并控制對(duì)外源抗原的過度反應(yīng)[5]。在宮頸癌、腎癌、黑素瘤和乳腺癌等實(shí)體腫瘤中，F(xiàn)OXP3+Treg的高浸潤使患者的總生存期明顯縮短；而高FOXP3+Treg浸潤可在一定程度上提高大腸癌、頭頸癌和食管癌患者的生存率。提示FOXP3+Treg的預(yù)后與腫瘤部位密切相關(guān)，且與分子亞型和臨床分期有關(guān)[6]。在淋巴瘤患者中，Treg充當(dāng)抑制性Treg或惡性Treg時(shí)，抗腫瘤細(xì)胞毒性被抑制，因此，Treg數(shù)量減少與預(yù)后良好有關(guān)；相反，某些類型淋巴瘤患者的Treg可以殺死腫瘤Treg，而無能的Treg則增強(qiáng)了抗腫瘤細(xì)胞毒性或抗自身免疫性Treg的活性，因此，Treg數(shù)量增加與預(yù)后良好相關(guān)，而Treg數(shù)量減少常提示預(yù)后不良。由于Treg對(duì)淋巴瘤的影響較為復(fù)雜，評(píng)估患者的Treg表型和基因型可預(yù)測(cè)多種類型淋巴瘤患者的預(yù)后，包括彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL）、濾泡性淋巴瘤（follicular cell lymphoma，F(xiàn)L）、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤（cutaneous T-cell lymphoma，CTCL）和經(jīng)典霍奇金淋巴瘤（classic Hodgkin’s lymphoma，CHL）[2]。

越來越多的證據(jù)表明，F(xiàn)OXP3+Treg對(duì)腫瘤患者的生存情況存在有害或有利的影響，Wilke等[7]認(rèn)為這與腫瘤類型密切相關(guān)，但Tanaka和Sakaguchi[4]認(rèn)為這可能是因?yàn)镕OXP3+細(xì)胞間真正的功能異質(zhì)性。目前，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的Treg生物標(biāo)志物及可以特異性調(diào)節(jié)Treg功能的細(xì)胞表面分子還包括CD25、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4，CTLA4）、糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子受體（glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor，GITR）和CD95（也稱為FAS）等，其中CD25（一種耗盡抗體）、CTLA4（一種封閉抗體）、GITR（一種激動(dòng)性抗體）和OX40（一種激動(dòng)性抗體）具有特異性的單克隆抗體可以增強(qiáng)小鼠的腫瘤免疫力（如環(huán)磷酰胺可以增強(qiáng)腫瘤特異性免疫力，CTLA4特異性阻斷單克隆抗體——伊匹單抗等已在臨床上用于治療晚期腫瘤）[3]。

2 Treg對(duì)不同種類的淋巴瘤患者生存率的影響

2.1 非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma ，NHL）

NHL是一類包含多種亞型的淋巴樣惡性腫瘤，目前仍無法完全治愈。NHL約占淋巴瘤的90%。Treg對(duì)NHL不同亞型B細(xì)胞淋巴瘤患者生存率的影響存在差異。淋巴瘤浸潤性FOXP3+Treg細(xì)胞可能代表重要的淋巴瘤/宿主微環(huán)境調(diào)節(jié)劑，因?yàn)檫@些細(xì)胞數(shù)量的增加可以積極地影響FL、生發(fā)中心（germinal center，GC）來源的DLBCL（GCBDLBCL）患者的生存期[2]。Tzankov等[8]研究結(jié)果顯示，在GCB-DLBCL中，Treg數(shù)量增加與預(yù)后良好呈正相關(guān)，在非GCB-DLBCL和Hans系統(tǒng)不可分類的DLBCL患者中，增加的FOXP3+細(xì)胞數(shù)與不良臨床結(jié)局（疾病的特異性死亡率和無失敗生存率）相關(guān)。該研究通過對(duì)其研究結(jié)果與既往的觀察結(jié)果進(jìn)行分析，提出了一種假設(shè)，認(rèn)為Treg和B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞之間存在直接或間接的細(xì)胞通訊，從而使GCB-DLBC患者獲得了良好的預(yù)后，但由于無法確定FOXP3+細(xì)胞數(shù)量與淋巴瘤細(xì)胞周期的失調(diào)、表面蛋白的表達(dá)或EB病毒感染等因素的相關(guān)性，因此，并未明確具體的機(jī)制；該研究還認(rèn)為，F(xiàn)OXP3+Treg可以直接抑制甚至殺死B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞，抑制輔助性T淋巴細(xì)胞（helper T lymphocyte，Th）及其介導(dǎo)的B細(xì)胞的功能，并允許大量Tia-1+細(xì)胞的積累，這些原因可能是導(dǎo)致GCB淋巴瘤患者預(yù)后良好的重要因素。

非GCB-DLBCL患者的FOXP3+細(xì)胞絕對(duì)數(shù)與GCB-DLBCL的是相似的，但卻導(dǎo)致了不良的預(yù)后，Tzankov等[8]研究認(rèn)為，GC來源的B細(xì)胞腫瘤中，可能存在額外的細(xì)胞通訊回路，導(dǎo)致Treg功能性下調(diào)，事實(shí)上，細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）在GCB和非GCB-DLBCL中分布情況不同，在非GCB-DLBCL中含量特別高。雖然在非GCB-DLBCL中更容易觀察到Treg數(shù)量的增加，但由于IL-6和TNF-α均能抑制Treg的功能，因此，在非GCB-DLBCL中Treg不能發(fā)揮功能活性，導(dǎo)致預(yù)后不良。Tuscano等[9]開展了一項(xiàng)關(guān)于利妥昔單抗和伊匹單抗聯(lián)合治療復(fù)發(fā)或難治性B細(xì)胞淋巴瘤的I期研究，該研究提出伊匹單抗誘導(dǎo)的抑制性Treg耗竭（外周血）本身并不能單獨(dú)負(fù)責(zé)增強(qiáng)免疫介導(dǎo)的腫瘤反應(yīng)，提示影響NHL患者生存率的因素可能不僅只有Treg的數(shù)目這一因素。以往的報(bào)道尚未研究過特定Treg亞群的比率預(yù)測(cè)對(duì)腫瘤免疫療法的反應(yīng)能力，特別是CD45RA Treg對(duì)總Treg的比率，應(yīng)該把該比率作為潛在預(yù)測(cè)因子進(jìn)一步研究。

2.2 CHL

CHL在淋巴瘤中是獨(dú)一無二的，因?yàn)榇蟛糠纸櫟募?xì)胞不是惡性細(xì)胞（霍奇金和里德-斯特恩伯格細(xì)胞），而是炎性細(xì)胞，包括巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、漿細(xì)胞和肥大細(xì)胞[10]。研究表明，Treg過度激活或數(shù)量增加可能會(huì)降低免疫反應(yīng)和抗腫瘤免疫力，并可能促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展[11]。霍奇金淋巴瘤組織中Treg（尤其是CD4+CD25+）細(xì)胞的數(shù)量和活性均很高，可通過抑制白細(xì)胞介素-2（interleukin-2，IL-2）的產(chǎn)生和上調(diào)IL-2 Ra鏈（CD25）的表達(dá)來發(fā)揮局部免疫抑制作用，延遲或抑制CD8+T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞抵抗腫瘤抗原的能力，從而保護(hù)快速自我更新細(xì)胞（rapidly self-renewing cells，RS細(xì)胞）免受免疫學(xué)監(jiān)測(cè)和清除，提示RS細(xì)胞周圍微環(huán)境中Treg的存在可能具有預(yù)后價(jià)值[12]。研究顯示，霍奇金淋巴瘤患者的預(yù)后取決于Treg和其他背景浸潤細(xì)胞的比例，而不是其絕對(duì)數(shù)目，RS細(xì)胞周圍微環(huán)境中的Treg的比例高于Th2，明顯縮短了霍奇金淋巴瘤患者的無病生存期，而低比例的Treg則改善了患者的無病生存期，表明Treg具有介導(dǎo)抗腫瘤免疫應(yīng)答的作用[13-14]。Greaves等[15]的研究顯示，F(xiàn)OXP3、CD68和CD20等標(biāo)志物是CHL預(yù)后的預(yù)測(cè)指標(biāo)，并首次證明，F(xiàn)OXP3聯(lián)合CD68可進(jìn)一步改善預(yù)后分層，區(qū)分早期和晚期腫瘤中特別差和高風(fēng)險(xiǎn)的患者，表明Treg絕對(duì)數(shù)并非可以獨(dú)立影響患者的預(yù)后。

2.3 慢性淋巴細(xì)胞白血病（chronic lymphocytic leukemia，CLL）

CLL與其他B細(xì)胞淋巴瘤（如FL）相似，CLL中的淋巴結(jié)微環(huán)境被認(rèn)為是惡性腫瘤細(xì)胞與腫瘤特異性免疫細(xì)胞間相互作用的主要部位[16]。目前，CLL患者的免疫異常數(shù)據(jù)主要來自于對(duì)外周血中不同的細(xì)胞的學(xué)習(xí)，對(duì)淋巴結(jié)組織中非惡性淋巴細(xì)胞的組成及其與外周血的關(guān)系知之甚少。Hanna等[17]和D'Arena等[18]發(fā)現(xiàn)，CLL負(fù)荷較高的患者中Treg數(shù)量的增高更為明顯，表明CLL積極募集Treg，而Treg的聚集伴隨著相當(dāng)大的免疫抑制作用，導(dǎo)致患者感染和繼發(fā)惡性腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)增加[19]。考慮到感染仍然是CLL發(fā)病和死亡的主要原因，間接表明Treg的聚集與CLL患者的生存率呈負(fù)相關(guān)[20]。

2.4 外周血T細(xì)胞淋巴瘤（peripheral T-cell lymphoma，PTCL）

PTCL是一種高度異質(zhì)性的淋巴細(xì)胞惡性增殖性疾病，是NHL的常見類型，約占NHL的7%，PTCL病情進(jìn)展迅速、易侵襲、預(yù)后較差，5年生存率僅為30%[21]。既往對(duì)T細(xì)胞淋巴瘤（T-cell lymphoma，TCL）的研究中，Treg在腫瘤內(nèi)的數(shù)目增加對(duì)患者的生存率有積極影響，如蕈樣肉芽腫（mycosis fungoides，MF）、未明確的皮膚T細(xì)胞淋巴瘤（cutaneous T-cell lymphoma，CTCL）[22]和結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤（Extranodal NK/T-cell lymphoma，ENKTL）[23]等。Bruneau等[24]開展的一項(xiàng)關(guān)于比較血管免疫母細(xì)胞性T細(xì)胞淋巴瘤（angioimmunoblastic T-cell lymphoma，AITL）患者的淋巴結(jié)與反應(yīng)性淋巴結(jié)情況，該研究對(duì)AITL患者的淋巴結(jié)進(jìn)行活檢，發(fā)現(xiàn)其組織內(nèi)Treg的數(shù)量明顯減少，這可能至少部分解釋了AITL患者典型的自身免疫癥狀，從而導(dǎo)致了不良預(yù)后。但Lundberg等[25]的研究顯示，TCL腫瘤組織內(nèi)Treg的數(shù)量與總生存期沒有相關(guān)性，該研究發(fā)現(xiàn)所有TCL均在一定程度上表達(dá)FOXP3+Treg，但不同亞型的TCL間FOXP3+Treg表達(dá)的頻率差異很大，在TCL中，Treg的功能似乎特別復(fù)雜，部分原因是TCL的惡性細(xì)胞是淋巴源性的，因此可能被Treg抑制，部分原因是一些研究表明惡性細(xì)胞實(shí)際上可能是Treg衍生的；該研究結(jié)果與以往的實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在差異，可能受樣本數(shù)量較少影響。Roychoudhuri等[26]研究表明，CD8+細(xì)胞毒性腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞密度/FOXP3+Treg密度的比例可以更好地預(yù)測(cè)多種腫瘤的預(yù)后[27]，腫瘤浸潤的CD8+T細(xì)胞與FOXP3+Treg細(xì)胞的比例降低與不良預(yù)后相關(guān)[4]。

3 小結(jié)與展望

Treg在惡性淋巴瘤中發(fā)揮重要作用，在不同類型的淋巴瘤患者中，F(xiàn)OXP3+Treg細(xì)胞比例預(yù)示著不同的生存和預(yù)后。同時(shí)，患者的生存和預(yù)后可能還與Treg的功能異質(zhì)性及特定Treg亞群比例對(duì)腫瘤免疫療法的反應(yīng)能力不同有關(guān)，但具體的機(jī)制仍有待闡明，需要進(jìn)一步的研究。