水溶性抗氧化劑脂質體的制備和性能研究

唐珍寶

摘 要 為確定脂質體的最佳配方，本課題對維生素C脂質體進行研究，采用薄膜分散—超聲乳化法制備，以包封率為考察指標，通過測量脂質體在28天內的粒徑分布，最終確定脂質體的制備方法及保存條件。

關鍵詞 維生素C;脂質體;薄膜分散法;包封率

維生素C（Vitamin C）又稱抗壞血酸，是一種水溶性維生素，最早作為一種添加劑用在化妝品中，具有美白功效。維生素C安全性很好，但是其水溶液不穩(wěn)定，容易變色且不易被皮膚吸收。經脂質體包封后，可增加維生素C的穩(wěn)定性，并使其具有較長的功效，因此在化妝品工業(yè)、醫(yī)藥工業(yè)等方面能夠得到更為廣泛[1]。

1材料與儀器

試劑：抗壞血酸（AR）、三羥甲基氨基甲烷（AR）、濃鹽酸（AR）、大豆磷脂（食用級）、乙醇（AR），膽固醇（AR）、甲醇（AR）、氯仿（AR）

儀器：電子天平、旋轉蒸發(fā)儀、循環(huán)水式真空泵、Zeta電位納米粒度分析儀、紫外可見分光光度計

2實驗內容和方法

2.1 薄膜均質法機理

薄膜均質法是應用最廣泛的制取脂質體的方法，將磷脂與膽固醇溶解于有機溶劑中，并將此溶液置于圓底燒瓶中，旋轉減壓蒸干，磷脂會在燒瓶內壁上形成一層很薄的膜，加入一定量的緩沖溶液，旋轉震蕩可以使燒瓶內壁的薄膜水化脫落，就可得到脂質體，這種方法對于水溶性藥物可獲得較高的包封率，但操作較煩瑣。

2.2 薄膜均質法制備維生素C脂質體

具體操作步驟：稱取0.02g膽固醇，2.5mL大豆卵磷脂溶液（32g/L），5mL乙醇依次加入到圓底燒瓶（250mL）中，45℃水浴下用旋轉蒸發(fā)儀減壓除去有機溶劑，待有機溶劑揮發(fā)完后，真空繼續(xù)抽吸30min后在圓底燒瓶底部形成均勻薄膜，量取15mLTris-鹽酸緩沖液加入到燒杯（50mL）中，用電子天平準確稱取一定量的抗壞血酸加入到緩沖液中，不斷搖晃使抗壞血酸溶解在緩沖液中，將燒杯中緩沖液加入到圓底燒瓶中，旋轉蒸發(fā)繼續(xù)30～40min后至圓底燒瓶壁上脂質完全溶解，形成均一乳白色懸濁液，置于超聲波清洗儀中超聲8min，過微孔濾膜5-10次，編號保存于離心管中，并將制備好的樣品放置于4℃的低溫下避光保存[2]。

2.3 游離維生素C與維生素C脂質體的分離

具體操作：用20mL蒸餾水沖洗G-25凝膠柱，待柱子中的水滴完后，加1號樣品，待樣品滴加完畢后，用3mL蒸餾水潤洗，直至液滴由乳白色變澄清。用20mL乙醇沖洗柱子，再用20mL蒸餾水沖洗柱子，待蒸餾水滴完后，加2號樣品，待樣品滴完后，用3mL蒸餾水潤洗，直至液滴由乳白色變澄清。用20mL乙醇沖洗柱子，再用20mL蒸餾水沖洗柱子，待蒸餾水滴完后，加3號樣品，待樣品滴完后，用3mL蒸餾水潤洗，直至液滴由乳白色變澄清。再用20mL乙醇沖洗柱子，再用20mL水沖洗柱子，待蒸餾水滴完后，添加4號樣品，直至5號樣品過完葡聚糖G-25凝膠柱子。

將收集在離心管中的5個維生素C脂質體樣品懸浮液，放入超低溫冰箱，冷凍24小時，在將樣品放入冷凍干燥機，干燥24小時。將凍干后的樣品用甲醇溶解，過濾，取濾液定容稀釋至合適的濃度。紫外分光光度計測定維生素C的吸光度，計算出包封率。

2.4 維生素C標準曲線的制備

分析天平稱取0.020g維生素C于小燒杯（50ml）中，并全部轉移至容量瓶（100mL）用蒸餾水定容至刻度，并搖勻，得標準溶液，其濃度為200μg/mL。從容量瓶中用移液管分別取1、2、3、4、5mL維生素C標準溶液，加入到1、2、3、4、5支比色管（50mL）并用蒸餾水定容至刻度。

2.5 脂質體包封率的測定

冷凍干燥后的維生素C脂質體呈固態(tài)，需要溶解至澄清透明方可測量其吸光度，樣品中游離的脂質體溶于水易被水乳化，呈乳懸狀，為此需加入部分乙醇使游離的脂質體溶解，通過實驗測試，最佳配置比乙醇：水為2：1，此時的溶液澄清透明。將五個樣品先用乙醇再加水比例按2比1定容到50mL的比色管中，然后分別取1mL加入到10mL的比色管中，定容至刻度線，個別樣品出現(xiàn)沉淀，用離心機離心后再定容，配置好后置于陰暗處避光待測[3]。

3結果與分析

3.1 維生素C對脂質體包封率的影響表1各樣品對應包封率

3.2 結果分析

最終測出的實驗數(shù)據(jù)表明5號樣品的包封率最大，即最佳的質量配比卵磷脂：膽固醇：維生素C為4：1：5，2號樣品的包封率最小，3號樣品與4號樣品的包封率近似相等。

4誤差分析

①過葡聚糖凝膠柱有少量游離的維生素C未被除去，造成測量值偏高;②配置維生素C標準溶液樣品未用乙醇：水為2：1的比例配制，而全部用水定容。造成測量時的誤差;③維生素C易見光受熱分解，試驗中未能時刻保證制備的樣品處于避光低溫的狀態(tài)，可能造成測量值偏小;④操作過程中有少量樣品遺失，造成測量值偏小;⑤稀釋時有個別樣品出現(xiàn)微量沉淀物，可能實驗操作或保存時混入雜質，對實驗結果造成影響。

參考文獻

[1] 劉亞文，曹光群，陳婷婷.維生素C脂質體的制備研究[J].大豆科學，2007（2）：270-272.

[2] 張樹彪，許英梅，胡劍鈞，等.脂質體研究綜述[J].大連民族學院學報，2004（3）：6-9.

[3] 杜修橋，胥傳來，樂國偉，等. VC新劑型——脂質體的制備及性質初探[J].糧食與飼料工業(yè)，2001（11）：27-30.