天麻提取物配伍刺五加提取物組方對小鼠睡眠的影響

張夢麒　田孟華　張振宇　楊新周

摘 要：目的：研究天麻和刺五加提取物對于改進睡眠質量的作用，為天麻和刺五加改善睡眠保健食品或藥品的開發奠定一定的基礎。方法：分別以0.05、0.1、0.3g/kg·bw劑量給小鼠連續灌胃30d，采用直接睡眠實驗、延長戊巴比妥鈉誘導小鼠睡眠時間實驗、戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗、巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗，對小鼠睡眠時間和潛伏睡眠時間等進行觀察。結果：經口給予小鼠不同劑量的天麻刺五加提取物30d，末次給藥后，與溶媒對照組比較，（1）各劑量組小鼠均未發生睡眠現象;（2）0.3g/kg·bw劑量組小鼠睡眠時間顯著增加，具有顯著性差異，（3）0.1、0.3g/kg·bw劑量組入睡動物數顯著增加，具有顯著性差異。（4）0.05g/kg·bw、0.1g/kg·bw劑量組小鼠睡眠潛伏期明顯縮短，具有顯著性差異。結論：天麻刺五加提取物具有輔助睡眠的功效和縮短睡眠潛伏期的時間，具有改善睡眠質量的作用。

關鍵詞：天麻;刺五加;提取物;改善睡眠

隨著社會的不斷進步與發展，生活節奏越來越快，人們的生活壓力隨之增大，加之人們睡前使用電子產品的頻率增加，睡眠障礙疾病也隨之產生，失眠也逐漸成為臨床最常見的睡眠障礙類型。根據第三屆世界睡眠大會統計表明，預計到2020年大約有超過7億失眠者。目前針對失眠多采用一些藥物治療，包括苯二氮□類類受體激動藥、褪黑素或褪黑素受體激動劑、具有鎮靜作用的抗抑郁癥藥物、某些抗精神病藥、有中樞抑制作用的抗組胺藥物、中藥等進行治療，長期服用西藥類藥物容易產生依賴并帶來一定的副作用，如出現共濟失調、順行記憶障礙等。因此研究一些藥食同源的具有養心安神的藥品或保健食品，用于改善失眠癥狀極為重要。

天麻（GastrodiaeRhizoma）為蘭科真菌營養型多年生草本植物天麻（Gastrodiaelata Bl.）的干燥塊莖，是我國傳統名貴中藥材之一，始載于《神農本草經》，位列上品，在中國和東亞國家已有上千年的應用歷史。現代藥理學研究表明，天麻對預防和治療中樞神經系統、心血管和免疫系統疾病具有一定功效，臨床醫學常用于治療頭暈目眩、肢體麻木、癲癇抽搐、小兒驚風、風濕痹痛等癥。此外，天麻富含多種營養成分和礦質元素，已廣泛用于食品輔料，如“天麻蒸蛋”、“天麻烏骨雞”和“天麻粥”等。刺五加（Radix AcanthopanacisSemticosi）為我國的傳統中藥，重點開發的北藥之一，益氣健脾、補腎安神的功效。現代臨床和實驗研究表明，刺五加在治療睡眠障礙提高睡眠質量方面具有獨特的優勢。

天麻和刺五加均具有安眠鎮靜的作用，因此，本文根據天麻和五味子的作用，將二者的提取物進行配伍，研究天麻和刺五加提取物對于改進睡眠質量的作用，為天麻和刺五加改善睡眠保健食品或藥品的開發奠定一定的基礎。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

SPF級KM小鼠，全雌，周齡4～6周，體重18～22g，由廣東省醫學實驗動物中心提供，實驗動物生產許可證號：SCXK（粵）2013-0002。實驗動物使用許可證：SYXK（滇）K2017-0004，發證單位：昆明市科技局。小鼠于PC飼養盒群養，每日飼喂大小鼠生長繁殖飼料，自由取食，自由飲水。飼養溫度為25±2℃，相對濕度40～70%。

1.2 藥品與試劑

天麻提取物配伍刺五加提取物（以下簡稱“天麻刺五加提取物”），兩種提取物單獨提取，按照1∶2比例進行配伍，人體推薦量為0.5g/60kg·bw（成人）/日。天麻提取物選用干燥的優質天麻塊莖，粉碎，加入10倍量的70%乙醇加熱回流提取3次，合并提取液，濃縮、干燥所得，每克天麻提取物相當于8.0g生藥量;刺五加提取物采用優質刺五加根莖粉碎至約40目，加入10倍量的60%乙醇加熱回流提取3次，合并提取液，濃縮、干燥所得，每克刺五加提取物相當于12.0g生藥量。

根據天麻刺五加提取物人體推薦劑量，設0.042、0.083、0.25g/kg·bw三個劑量組（根據《保健食品檢驗與評價技術規范》分別相當于受試樣品人體推薦攝入量的5倍、10倍、30倍），采用純水配制，經口每日1次給予小鼠相應劑量的受試物，小鼠灌胃量為0.1mL/10g·bw。

戊巴比妥鈉，Sigma公司分裝，批號：20131225、巴比妥鈉，上海試劑三廠生產，批號：65001。

1.3 實驗儀器

JJ2000型電子天平，常熟市雙杰測試儀器廠生產、SQP型電子天平，賽多利斯科學儀器（北京）有限公司生產、ELGA LA 613超純水機，英國ELGA LabWater/VWS（UK）Ltd生產。

2 實驗方法

2.1 直接睡眠實驗

取SPF級KM小鼠48只，隨機分為溶媒對照組、天麻刺五加提取物低、中、高劑量組，每組12只，全雄。受試組以0.1mL/10g·bw給藥體積灌胃給予相應受試物，溶媒對照組給予等體積純水，1次/d，連續30d。末次給藥后，以小鼠翻正反射消失1min為進入睡眠，翻正反射恢復即為小鼠覺醒判定標準，記錄各組入睡動物數及睡眠時間，并對實驗結果進行統計學分析。

2.2 延長戊巴比妥鈉睡眠時間實驗

分組及給藥方法同“2.1”。末次給藥15min后，各組小鼠均以45mg/kg·bw劑量腹腔注射戊巴比妥鈉，注射量為10mL/kg·bw。記錄動物翻正反射消失至覺醒的時間為持續睡眠時間（當小鼠置于背臥位時，能立即翻正身位，超過60s不能翻正者，即認為翻正反射消失，進入睡眠。翻正反射恢復即為動物覺醒，翻正反射消失至恢復這段時間為動物睡眠時間），觀察受試樣品能否延長戊巴比妥鈉睡眠時間。比較溶媒對照組與受試物組之間睡眠時間延長的差異，睡眠時間延長有顯著性，則實驗結果陽性。

2.3 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗

分組及給藥方法同“2.1”。末次給藥15min后，各組動物按30mg/kg·bw劑量腹腔注射戊巴比妥鈉，注射量為10mL/kg·bw，記錄30min內入睡動物數（以小鼠翻正消失1min為睡眠指標）。比較溶媒對照組與受試物組之間入睡動物數的差異，入睡動物數增加有顯著性，則實驗結果陽性。

2.4 巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗

分組及給藥方法同“2.1”。末次給藥15min后，各組小鼠均以10mL/kg·bw給藥體積腹腔注射巴比妥鈉（300mg/kg·bw），記錄注射巴比妥鈉后至小鼠翻正反射消失時間作為入睡潛伏期（以小鼠翻正消失1min為睡眠指標），觀察受試物對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響。比較溶媒對照組與受試物組之間睡眠潛伏期的差異，睡眠潛伏期縮短有顯著性，則實驗結果陽性。

2.5 試驗數據統計分析

入睡潛伏期、睡眠時間為計量資料，用SPSS17.0軟件對各試驗原始數據進行方差齊性檢驗，滿足方差齊要求的數據資料，用單因素方差分析方法中多個試驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理;對非正態分布或方差不齊的數據資料進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊要求后，用轉換所得的數據進行統計處理。入睡動物數為計數資料，用X2檢驗進行數據統計。

3 實驗結果

3.1 對直接睡眠的影響

實驗結果如表1所示：經口給予小鼠不同劑量的天麻刺五加提取物30d，末次給藥后，各組小鼠均未發生睡眠現象。天麻刺五加提取物0.05、0.1、0.3g/kg·bw劑量對小鼠均無直接睡眠作用。

3.2 天麻刺五加對延長戊巴比妥鈉誘導小鼠睡眠時間的影響

實驗結果如表2所示：經口給予小鼠不同劑量的天麻刺五加提取物30d，腹腔注射戊巴比妥鈉，觀察小鼠的睡眠時間。睡眠時間經方差齊性檢驗，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析中多個實驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理，與溶媒對照組比較，0.3g/kg·bw劑量組小鼠睡眠時間顯著增加，具有顯著性差異（P<0.05）。

3.3 天麻刺五加提取物對戊巴比妥鈉閾下劑量催眠的影響

實驗結果如表3所示：經口給予小鼠不同劑量的天麻刺五加提取物30d，腹腔注射戊巴比妥鈉，觀察30min內各組小鼠睡眠發生率。入睡動物數用X2檢驗進行統計處理。與溶媒對照組比較，0.1、0.3g/kg·bw劑量組入睡動物數顯著增加，具有顯著性差異（P<0.05）。

3.4 天麻刺五加提取物對巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響

實驗結果如表4所示：經口給予小鼠不同劑量的天麻刺五加提取物30d，腹腔注射巴比妥鈉，觀察小鼠的睡眠潛伏期。睡眠潛伏期經方差齊性檢驗，滿足方差齊性要求，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計處理。與溶媒對照組比較，0.05g/kg·bw、0.1g/kg·bw劑量組小鼠睡眠潛伏期明顯縮短，具有顯著性差異（P<0.05）。

4 討論

本文參照《保健食品檢驗與評價技術規范》（2003年版）的要求，采用4個實驗對天麻刺五加提取物的改善睡眠作用進行研究。其中，直接睡眠實驗對受試物的直接催眠作用進行研究;延長戊巴比妥鈉睡眠時間實驗主要是研究受試物與戊巴比妥鈉的協同作用;戊巴比妥鈉通過肝酶代謝，若受試物對肝酶具有抑制作用，亦可延長戊巴比妥鈉睡眠時間，因此，為了排除干擾，進行戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗，如果入睡動物數顯著增加，可說明受試樣品與戊巴比妥鈉（閾下劑量）具有協同作用;巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗是在巴比妥鈉催眠的基礎上，觀察受試樣品能否縮短入睡潛伏期，若睡眠潛伏期縮短，則說明受試樣品與巴比妥鈉有協同作用。

目前，對天麻、刺五加在改善睡眠方面的研究較多，但對兩者進行配伍后的研究較少。在本實驗條件及所設計的劑量范圍內，天麻刺五加提取物0.3g/kg·bw可明顯增加戊巴比妥鈉誘導的小鼠睡眠時間，0.1和0.3g/kg·bw劑量可明顯增加戊巴比妥鈉誘導的小鼠入睡數量，且呈現出明顯的劑量-效應關系;天麻刺五加提取物0.1和0.3g/kg·bw劑量組小鼠睡眠潛伏期明顯縮短。上述結果表明，天麻刺五加提取物具有改善睡眠的保健功能。同時，實驗中發現天麻刺五加提取物各劑量組對小鼠均無明顯直接睡眠作用。

綜上所述，根據《保健食品檢驗與評價技術規范》（2003年版）中的判定標準，本實驗條件及劑量范圍內，天麻刺五加提取物具有改善睡眠功能作用，且不具有直接睡眠作用，其催眠作用弱于鎮靜催眠藥物，其改善睡眠作用的機制，還需進一步深入研究。

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