六種單味藥對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的抑菌效果研究

同小妮，林娜娜，張珊珊，張怡敏*

（陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽(yáng) 712046）

近年來(lái)，通過(guò)研究表明，金黃色葡萄球菌Sau在醫(yī)院革蘭陽(yáng)性菌中檢出率最高，它能夠引起廣泛地感染，如皮膚炎癥、中毒性休克、肺炎、骨髓炎等一系列疾病且其耐藥性隨著抗生素的廣泛使用隨逐年上升趨勢(shì)[1-2]，大腸埃希菌Eco引發(fā)的一系列腹瀉、腦膜炎及敗血型感染等也與之相關(guān)[3]。耐藥細(xì)菌的出現(xiàn)會(huì)導(dǎo)致臨床抑菌藥物使用效果減弱，因此，臨床迫切需要引入非抗生素治療方法以及尋找具有新結(jié)構(gòu)和新的作用機(jī)制的藥物[4]。綜上所述，對(duì)Sau和Eco進(jìn)行抑菌的研究尤為重要。因此，為傳播中醫(yī)藥文化發(fā)掘中草藥抑菌及其自身優(yōu)勢(shì)，本實(shí)驗(yàn)前期通過(guò)大量資料搜集，找出了六種中草藥，金銀花、黃連、黃芩、連翹、五倍子、艾葉，通過(guò)體外抑菌的方法研究探討其分別對(duì)兩種細(xì)菌的抑菌效果。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥材

黃芩、黃連、連翹、金銀花、艾葉、五倍子各500克。

1.2 菌株

大腸埃希氏菌[ATCC25922]和金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]的標(biāo)準(zhǔn)二代斜面菌株

1.3 培養(yǎng)基

MH肉湯、MH瓊脂、血培養(yǎng)基

1.4 溶劑和試劑

生理鹽水、75%酒精

1.5 儀器

生物安全柜：BBS-SDC型、生化培養(yǎng)箱：LRH-250A

1.6 器材

移液槍、一次性pu管、試管架、、玻璃杯、無(wú)菌96孔聚乙烯U形微量板、0.5麥?zhǔn)媳葷峁?、平板、牛津杯?.8*6*10 mm）、接種環(huán)、手套、口罩等。

2 方法及步驟

2.1 菌種活化

從4℃保存的Eco和Sau斜面菌株上分別取單個(gè)菌落接種于不同血培養(yǎng)基上擴(kuò)增備用。

2.2 中藥的制備

六味藥分別加適量水煎煮濃縮成10～20ml，配成濃度為100 mg/ml的藥液標(biāo)記備用。

2.3 抑菌圈測(cè)定

分別取Eco和Sau接種于瓊脂培養(yǎng)基上，并放置好牛津杯，在牛津杯中滴藥液。在37℃培養(yǎng)24h，測(cè)出其抑菌圈值記錄。

2.4 MIC測(cè)定

在96孔聚乙烯U形微量板中除第一列的其余孔內(nèi)加入100μl肉湯培養(yǎng)液，在第一列孔內(nèi)加入100μl藥物，并依次進(jìn)行二倍稀釋，并將測(cè)定完成的菌液在每個(gè)孔內(nèi)加入100μl。同時(shí)在96孔板中做肉湯培養(yǎng)液和純菌作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組，觀察生長(zhǎng)變化得出其MIC值。

2.5 MBC測(cè)定

取最適的MIC孔前后共五個(gè)孔涂抹到瓊脂培養(yǎng)基上做好標(biāo)記，在37℃中培養(yǎng)24h，分別觀察培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)情況記錄結(jié)果。

3 數(shù)據(jù)記錄

表1 MIC測(cè)定與牛津杯抑菌環(huán)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 MBC測(cè)定結(jié)果

4 討 論

六種單味藥對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌均有不同程度的抑菌效果。在牛津杯抑菌實(shí)驗(yàn)中，對(duì)Sau的抑菌效果，五倍子最好，艾葉次之，其次黃連。對(duì)Eco的抑菌效果，艾葉最好，黃芩次之，其次五倍子。MIC和MBC實(shí)驗(yàn)結(jié)果，五倍子對(duì)Eco和Sau的最小抑菌和殺菌濃度都是最小。對(duì)于Eco最小抑菌濃度效果最好的是五倍子，最小殺菌濃度效果最好是艾葉，綜合兩種細(xì)菌的牛津杯抑菌實(shí)驗(yàn)、MIC和MBC實(shí)驗(yàn)分析，Sau中，牛津杯抑菌實(shí)驗(yàn)、MIC和MBC抑菌效果最好的單味藥都是五倍子。由于對(duì)Eco的牛津杯抑菌實(shí)驗(yàn)、MIC和MBC的抑菌效果的單味藥不一致，分別為艾葉、五倍子、艾葉。因此，需要對(duì)Eco的抑菌效果最好的艾葉和五倍子進(jìn)行對(duì)比，由于艾葉牛津杯抑菌圈最大，且最小殺菌濃度最小。得到對(duì)Eco抑菌效果最好的是艾葉。綜上，五倍子對(duì)Sau的抑菌效果最好，其次艾葉＞黃連＞黃芩＞金銀花＞連翹。艾葉對(duì)Eco的抑菌效果最好，其次黃芩＞五倍子＞黃連＞金銀花＞連翹。但單味藥與復(fù)方制劑相比，存在藥物效果不明顯等問(wèn)題，需要進(jìn)一步擴(kuò)大研究范圍。